siRNA干扰ClC-2表达对人胶质瘤U-87细胞增殖的抑制作用

背景与目的:利用小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法。本研究采用siRNA抑制人神经胶质瘤细胞系U-87细胞上容积调控氯通道ClC-2基因的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响。方法:设计和构建两个针对人ClC-2基因的siRNA真核表达载体,并给予酶切鉴定和DNA序列分析鉴定;用脂质体LipofectamineTM2000介导转染,将空载体质粒pSUPER.puro-shRNA和两个重组质粒pSUPER.puro-shRNA-ClC-21、pSUPER.puro-shRNA-ClC-22分别转染入U-87细胞(依次为PP0组、PP1组和PP2组);采用RT-PCR检测ClC-2mRNA表达变化;MTT分析检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;平板克隆形成实验检测克隆形成率。结果:目的片段成功地连接到真核细胞表达载体pSUPER.puro上。PP1组、PP2组与对照组、PP0组相比较,ClC-2基因的mRNA水平明显降低,细胞生长速度明显减慢,细胞周期进程被阻滞在G1期:细胞的G1期百分含量分别增加了约30.24%、18.04%(P<0.05)。平板克隆形成试验发现,克隆形成率PP1组[(11.0±1.0)%]、PP2组[(20±3.1)%]明显低于对照组[(46.5±1.6)%]和PP0组[(47.5±2.8)%](P<0.01)。结论:干扰人神经胶质瘤细胞系U-87细胞的ClC-2基因表达可以抑制细胞的增殖,提示ClC-2基因可能成为控制人恶性胶质瘤生长的新靶点。

人ClC-2基因小分子干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定

目的:构建靶向人C lC-2基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:根据DEQOR提供的siRNA设计原则和程序,设计两个靶向C lC-2基因的发夹状siRNA;通过化学合成的方法合成两对分别互补的寡核苷酸链,退火后得到编码该siRNA的C lC-2基因片段。将该片段连接至经BglⅡ和HindⅢ双酶切的真核细胞表达载体pSUPER.puro的多克隆位点,转化扩增提取质粒;对重组质粒进行EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定。脂质体L ipofectam ineTM2000介导瞬时转染,通过RT-PCR检测人胶质瘤细胞系BT-325细胞中C lC-2mRNA表达。结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与真核细胞表达载体pSUPER.puro连接正确。转染两重组质粒细胞的C lC-2 mRNA表达明显降低。结论:成功构建人C lC-2基因干扰真核表达载体2个,分别命名为pSUPER.puro-siC lC-21和pSUPER.puro-siC lC-22,可用于进一步研究C lC-2基因对人胶质瘤侵袭和迁移活动的影响。

多索茶碱联合布地奈德治疗支气管哮喘的临床分析

目的研究多索茶碱联合布地奈德治疗支气管哮喘患者的临床价值。方法选取89例支气管哮喘患者,随机分成对照组(43例)和研究组(46例),对照组应用氨茶碱治疗,研究组应用多索茶碱联合布地奈德治疗。结果研究组:咳嗽消失时间(4.07±0.76)d,气喘消失时间(3.12±1.14)d,哮鸣音消失时间(4.10±0.91)d;对照组:咳嗽消失时间(6.09±1.39)d,气喘消失时间(4.90±1.78)d,哮鸣音消失时间(5.28±1.79)d。研究组咳嗽、气喘以及哮鸣音等临床症状消失时间均短于对照组(P<0.05)。治疗后研究组FEV1、FVC、FEV1%以及PEF指标分别为(2.92±0.63)L、(3.45±0.81)L、(84.31±0.76)%、(4.73±0.94)L/s;对照组分别为(2.02±0.57)L、(2.71±0.66)L、(74.06±0.59)%、(4.23±0.70)L/s;治疗后,研究组FEV1、FVC、FEV1%以及PEF等指标明显高于对照组(P<0.05)。研究组血清ESR为(7.86±0.75)mm/h,血清CRP为(2.16±0.43)mg/L;对照组血清ESR为(9.15±1.26)mm/h,血清CRP为(3.49±0.69)mg/L。研究组患者血清ESR与血清CRP指标明显低于对照组(P<0.05);研究组患者不良反应发生率为6.5%,对照组为27.9%,研究组不良反应率明显低于对照组(P<0.05)。结论应用多索茶碱联合布地奈德治疗支气管哮喘患者,可显著缩短患者的临床症状消失时间,改善肺功能,并提高治疗安全性,可推广。

干扰ClC-2基因表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响

目的观察抑制容积调控氯通道ClC-2基因的表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响。方法设计和构建两个针对ClC2基因的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染,将空载体质粒和两个重组质粒分别转染入BT-325细胞(依次为对照组、PP1组和PP2组);通过RTPCR检测ClC2基因mRNA表达变化;MTT分析检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期。结果与对照组相比较,干扰组ClC2基因的mRNA水平明显降低,细胞生长速度明显减慢,细胞周期进程被阻滞在G1期。结论干扰胶质瘤细胞系BT-325细胞的ClC-2基因表达可以抑制细胞的生长,提示ClC2基因可能成为控制胶质瘤恶性生长的新靶点。

盐酸氨溴索在慢性支气管炎急性加重期的临床价值

目的探讨盐酸氨溴索治疗慢性支气管炎急性加重期的临床效果。方法将84例慢性支气管炎急性加重期患者分为对照组(42例)和观察组(42例)。对照组给予吸氧、解痉、平喘、抗感染等对症支持治疗,观察组在对照组对症支持治疗基础上加用盐酸氨溴索注射液静脉滴注治疗。比较两组患者治疗效果。结果两组患者治疗前后咳嗽、咳痰、喘息症状评分比较,治疗前组间评分比较无统计学意义(P>0.05),治疗后组间评分差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗有效率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组不良反应发生率(11.9%)与观察组不良反应发生率(9.5%)比较差异不具统计学意义(P>0.05)。结论盐酸氨溴索治疗慢性支气管炎急性加重期可有效提高治疗效果,值得在临床中推广应用。

胸腺肽对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者T淋巴细胞亚群的影响

目的研究胸腺肽对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者T淋巴细胞亚群的影响。方法选取2016年1月至2017年12月在某院进行慢性阻塞性肺疾病急性加重期治疗的患者80例。按照单双号法随机分为观察组和对照组,对照组采用常规药物治疗,观察组在此基础上加入胸腺肽治疗,对比治疗效果以及T淋巴细胞亚群水平。结果观察组治疗总有效率为97.5%,对照组治疗总有效率80.0%,观察组高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组T淋巴细胞亚群各项指标水平改善较好,优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论胸腺肽治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者可改善临床症状,促进肺功能恢复及T淋巴细胞亚群各项指标趋于正常,增强机体免疫能力,效果确切。

腋下小切口治疗自发性气胸

目的探讨腋下小切口治疗自发性气胸的临床疗效。方法回顾分析2003年1月～2008年10月68例腋下小切口治疗自发性气胸的临床资料。结果术后肺全部复张,无手术并发症,术后住院6～10d均痊愈出院,随访3～18个月无复发。结论腋下小切口治疗自发性气胸具有创伤小,手术时间短,并发症少,美观,操作简单及费用低等优点。

黏蛋白1(MUC1)致敏的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤实验研究

目的研究以Cp G作为免疫佐剂,应用黏蛋白1(MUC1)致敏树突状细胞(DC)制备疫苗在体外诱导的特异性抗肿瘤作用。方法健康人外周血采用密度梯度离心法,分离外周血单核细胞(PBMC),应用GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子体外培养诱导DC,观察细胞形态,并通过流式细胞术检测成熟DC细胞标志物CD80、CD86。再应用Cp G作为免疫佐剂,MUC1作为抗原致敏DC制备疫苗,致敏的DC与T细胞混合培养,观察其诱导T淋巴细胞增殖能力。诱导产生的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)与肿瘤靶细胞以5∶1、10∶1、20∶1的效靶比共孵育,MTT法检测CTL杀伤活性。结果 DC表型检测结果为CD80+细胞占70.4%,CD86+细胞占72.0%,呈现成熟DC表型。MUC1致敏的DC疫苗与淋巴细胞混合培养显示,DC疫苗具有刺激T细胞增殖活化的作用,其中DC+Cp G+MUC1组明显高于MUC1+DC或Cp G+DC组,差异有统计学意义(P<0.01)。DC疫苗诱导产生的特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤作用较单独T细胞组或DC组明显增强,差异有统计学意义(P<0.01)。并随着效靶比增大,其杀伤作用呈逐渐增强。结论经Cp G和MUC1致敏的DC疫苗在体外可诱导产生特异性抗肿瘤免疫效应。

我国儿童商业医疗保险影响因素的实证研究

医疗保险是社会保障体系的重要组成部分,我国的基本医疗保险体制正在稳步发展,在基本覆盖全民的基础上,我们要求更好的医疗保障。而儿童医疗却面临着不小的困境,社会医保仅兜底而不能解燃眉之急,社会救助覆盖少难以得到,商业医保又发展缓慢。儿童作为社会的弱势群体,必须得到更好的保障。本文通过分析儿童商业医疗保险影响因素,得出对儿童医保体系的发展建议。

CpG联合MUC1增强人外周血树突状细胞功能的实验研究

目的:观察Cp G联合黏蛋白1(MUC1)应用对树突状细胞(DC)刺激T细胞增殖作用的影响。方法:应用淋巴细胞分离液分离人外周血单核细胞,体外培养应用GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子诱导DC,观察细胞形态,并通过流式细胞术检测细胞标志物CD80、CD86。收获DC按如下分组:A:DC;B:DC+Cp G;C:DC+MUC1;D:DC+Cp G+MUC1;E:Cp G+MUC1,分别与T淋巴细胞混合培养,通过MTT法检测T细胞增殖情况。结果:DC表型检测结果为:CD80^+细胞占70.4%,CD86^+细胞占72.0%,呈现成熟DC表型。MUC1与DC联合疫苗与淋巴细胞混合培养显示:DC具有刺激T细胞增殖的作用,Cp G+DC组和MUC1+DC组,分别较单纯DC组对T细胞的刺激增殖作用明显增强(P<0.01),DC+Cp G+MUC1组又明显高于单用MUC1或Cp G+DC组,差别显著(P<0.01),单纯加Cp G和MUC1(无DC组)则基本无明显刺激T细胞增殖作用。结论:Cp G联合MUC1能明显提高DC促T细胞增殖的功能。

以皮损为首发症状的转移性癌(附五例报告)

皮肤转移性肿瘤少见，内脏肿瘤发生皮肤转移者约占１．０％～２．７％［１］。本院从１９８７年至１９９６年共收治５例，现报告如下。例１男性，３９岁。颏下皮肤硬结渐至婴儿头大一年。查：颏下约１０ｃｍ×６ｃｍ大小硬块，质硬如板，紫红色，不活动，境界清楚。右耳下...

Web数据挖掘在云计算平台的实际运用

云计算是基于开放标准和服务而构建的架构,属于新兴的共享基础架构,其作用是为用户提供更加方便、安全的网络计算与数据存储的服务。在云计算领域不断发展的进程中,近年来web数据挖掘在该领域得到广泛的运用,并且取得显著成果。对此,对云计算的Web数据挖掘体系架构功能设计进行研究,并阐述了基于云计算的web数据挖掘技术。

在中职信息技术教学中应用分组协作式学习的探讨

信息技术是中职教育的基础课程,分组协作式学习是一种以生为本的教学模式,在中职信息技术教学中应用分组协作学习模式,不仅能够营造宽松、和谐的学习氛围,也能提高学生的团队意识和互动探究的能力。本文探讨在中职信息技术教学中应用分组协作式学习的优势,立足课程目标和实际学情探索实践分组协作式学习的可行路径和方法,以期满足职业素质教育的改革要求,助推中职信息技术教学实现创新和发展,以供参考。

媒体深度融合背景下新闻采编流程再造的路径

融媒体时代,广播电视媒体所面临的媒介生态发生了鲜明的变化,大众对于新闻内容的需求也产生了颠覆性的改变。在这样的背景下,传统的新闻采编流程已经难以适应时代发展,因此必须对新闻采编流程进行创新和再造,确保新闻生产工作的质量不断提高。基于此,本文首先从内容、流程、服务和技术四个层面分析了新闻采编流程再造的思路,然后深入探究了新闻采编流程再造的具体路径,希望能够给广大新闻从业者提供一些有益的建议,推动新闻媒体长远发展。

靶标系统中的目标红外特性建模技术研究

针对自主对抗条件下红外靶标系统的需求,对适用于该领域的目标全向红外特性建模及校验技术进行研究。对某型靶机目标进行精细三维建模,将主要红外辐射源等效为红外光源,利用光学仿真软件通过有限光学追迹法,对各角度观察面处的红外辐射强度进行仿真,从而获得目标全向红外辐射模型。进行了地面实际测试,实验结果和仿真结果符合良好,验证了该建模仿真方法可行,可为相关领域研究提供理论支持。

肺癌合并急性肺血栓栓塞症的危险因素研究

目的探讨肺癌合并急性肺血栓栓塞症(APE)的危险因素。方法收集2017年3月至2019年9月我院收治的39例肺癌合并APE患者(观察组)的临床资料,按照1∶2比例选择年龄、性别类似同时期收治的单纯肺癌患者78例作为对照组,分析并比较两组患者的一般资料、肿瘤情况、治疗方式、实验室指标及生存情况。采用Kaplan-Meier生存分析比较两组的生存情况,采用logistic回归分析肺癌合并APE的独立危险因素。结果两组患者在性别、年龄、体质指数(BMI)、高血压、糖尿病、高血脂等一般资料方面无明显差异(P>0.05),Karnofsky功能状态评分(ZPS评分)差异具有统计学意义(P<0.01);两组患者在病理类型、TNM分期方面无明显差异(P>0.05);两组患者在HB、WBC、ALB、D-Dimer方面差异具有统计学意义(P<0.05);因素logistic回归分析结果表明ZPS评分≥2、D-Dimer、WBC是肺癌合并APE的独立危险因素。结论ZPS评分≥2、高D-Dimer、高WBC肺癌患者更易患APE。肺癌合并APE患者预后相对较差,应进一步加强对肺癌合并APE的防治工作。

民商法中诚实信用原则内涵、完善策略及对企业的影响

伴随着社会的发展和进步,民商法在社会生活中的地位变得越来越重要。在和民事关系相关的案件中都需要依据民商法来进行调节。民商法越来越成为人们在经济生活中的一项行为准则。诚实守信是民商法中的一项重要原则,随着社会经济的迅速发展,人与人之间的信任愈加重要。人无信而不立,做任何事情都需要讲诚信,守诚信。本文将针对民商法中诚实信用原则的内涵,对民商法中诚实信用原则的完善策略以及诚实信用原则对企业有什么影响进行探究和论述,以期对民商法中诚实信用原则的完善有所帮助。

ω-3多不饱和脂肪酸对糖尿病大鼠学习记忆的影响

目的:研究ω-3多不饱和脂肪酸(PUFA)对糖尿病(DM)大鼠学习记忆能力的影响及分子机制。方法:18只成年雄性SD大鼠分为对照组(control)、糖尿病组(DM)和PUFA治疗组(DM+PUFA)。利用链脲佐菌素腹腔注射的方法制备DM模型,DM+PUFA大鼠给予60 d的PUFA饮食,利用水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,利用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测大鼠海马组织TNF-α和IL-1β水平,Western Blot检测海马组织中p38 MAPK表达及磷酸化水平。结果:与对照组相比,DM组大鼠学习记忆能力发生障碍,海马TNF-α和IL-1β水平升高,p38 MAPK表达及磷酸化水平均增加,给予PUFA处理的DM大鼠,学习记忆能力有了明显改善,TNF-α和IL-1β水平下降,p38 MAPK表达及磷酸化水平降低。结论:ω-3多不饱和脂肪酸可通过降低海马部位炎症反应减轻糖尿病大鼠学习记忆能力损伤。