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土贝母苷乙通过诱导铁自噬抑制非小细胞肺癌细胞增殖
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作者 杨翘伊 张春云 +6 位作者 孙硕 李文敏 黄鑫 梁艳 张伟伟 李怀永 杨清竹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1834-1843,共10页
目的:探讨土贝母苷乙(tubeimosideⅡ,TBMSⅡ)诱导非小细胞肺癌细胞铁死亡的作用及潜在的分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌细胞H460,MTT法检测不同TBMSⅡ剂量处理的H460细胞的存活率,根据药物对细胞的抑制率的计算结果,选择细胞存活... 目的:探讨土贝母苷乙(tubeimosideⅡ,TBMSⅡ)诱导非小细胞肺癌细胞铁死亡的作用及潜在的分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌细胞H460,MTT法检测不同TBMSⅡ剂量处理的H460细胞的存活率,根据药物对细胞的抑制率的计算结果,选择细胞存活率50%的TBMSⅡ剂量为参照进行后续实验;Transwell实验检测细胞的迁移能力,克隆形成实验检测TBMSⅡ对H460细胞增殖的影响。流式细胞仪及荧光显微镜检测H460细胞中脂质活性氧(lipid reactive oxygen species,lipid ROS)水平的变化;试剂盒检测细胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)、总抗氧能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)和Fe2+水平;Western blot法检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 membrane 11,SLC7A11)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)、核受体辅激活因子4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)、自噬蛋白P62和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达;透射电镜检测细胞中线粒体结构的变化;免疫荧光实验检测细胞中LC3分别与FTH1和NCOA4的共定位,同时检测LC3和NCOA4与溶酶体的共定位。结果:与对照组比较,随着TBMSⅡ药物浓度增大,H460细胞的存活率、迁移能力以及克隆形成数量逐渐降低且细胞内部出现空泡;H460细胞中加入TBMSⅡ作用后,细胞中GSH和T-AOC水平降低而MDA水平升高,并且细胞中抗氧化蛋白SLC7A11和GPX4蛋白表达下降;H460细胞中的lipid ROS水平以及Fe2+随着TBMSⅡ浓度的升高而升高,而TBMSⅡ诱导的细胞死亡能够被铁死亡抑制剂Fer-1所逆转;自噬标志蛋白LC3Ⅱ/LC3 I和P62的水平随着TBMSⅡ浓度的增加而升高,且TBMSⅡ对H460细胞的线粒体形态产生影响,并且随着TBMSⅡ浓度的增加细胞中线粒体荧光强度降低;H460细胞中NCOA4蛋白的表达随着TBMSⅡ浓度增加而增加,但FTH1蛋白表达则随着TBMSⅡ浓度的增加而降低;细胞中LC3Ⅱ/FTH1以及LC3Ⅱ/NCOA4的结合能力随着TBMSⅡ浓度的增加而增强;随着TBMSⅡ浓度的增加细胞中LC3Ⅱ以及FTH1与溶酶体结合能力增强。结论:TBMSⅡ通过诱导铁自噬抑制非小细胞肺癌的增殖。 展开更多
关键词 土贝母苷乙 非小细胞肺癌 核受体辅激活因子4 铁自噬 铁死亡
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