抗甲胎蛋白单克隆抗体的制备及其性质的研究

甲胎蛋白(AFP)是胎儿肝脏和卵黄囊合成的一种糖蛋白。羊水和母体血清中AFP浓度的升高,对胎儿神经管缺陷和其他遗传缺陷的产前诊断,具有应用价值。在大多数原发性肝细胞癌和内胚窦癌患者血清中测得血清中AFP浓度升高,有助于肿瘤的早期诊断,也是在治疗过程中观察疗效的一项指标。

单克隆抗体亲和层析柱在纯化羊垂体催乳素中的应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术制备出5株抗羊垂体催乳素单克隆抗体。以羟磷灰石柱层析纯化一种单克隆抗体2D2(属IgG_(2~2))。与环氧氯丙烷活化的Sepharose 4B偶联制备免疫吸附层析柱。以此免疫吸附柱从羊垂体粗提液中简单快速地纯化了催乳素。

分泌型杂交瘤mRNA在蛙卵的表达

应用蔗糖密度梯度离心及乙醇分级沉淀法从分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的杂交瘤组织中提取mRNA。微量注射mRNA于蛙卵母细胞。72h后以~3H—Leu参入值测定蛋白质合成增加,并以免疫沉淀方法证明了mRNA注射蛙卵产物具有抗甲状腺球蛋白抗体的免疫活性。

三种肽类激素及芫化萜对着床前鼠胚脱氧核糖核酸合成的影响

关于胰岛素对靶细胞的糖、脂肪及蛋白质代谢的影响已有广泛的研究。Wool等曾报道过胰岛素在体外刺激同位素标记前身物参入核糖核酸(RNA)而不明显影响脱氧核糖核酸(DNA)(Wool 1963,Ebene Bonis 1963,Manchester 1967,Martin 1965)。胰高血糖素对糖、脂代谢与胰岛素作用相反.

超氧化物歧化酶脂质体制备方法包封率的比较

目的 :研究超氧化物酶 ( SOD)脂质体最佳制备方法 ,为进一步研究 SOD脂质体防病、抗衰老的药理作用打下基础。方法 :采用冻融法、逆相蒸发法、钙融合法、逆相蒸发法与钙融合法联合法 ,分别制备 SOD脂质体 ,并对 4种方法的包封率进行了比较。结果 :逆相蒸发法与钙融合法联合制备 SOD脂质体法包封率最大。结论 :逆相蒸发法与钙融合法联合法为最佳制备

红景天甙对培养大鼠皮层神经细胞O_2~ . ^-和H_2O_2损伤的保护作用

在体外对新生大鼠（０～１ｄ）大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上，利用超氧阴离子（Ｏ２．－）自由基和Ｈ２Ｏ２损伤模型，研究红景天甙（Ｓａｌ）对神经细胞自由基损伤的保护作用。通过检测乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放量和细胞存活率，以及形态学观察，证实红景天甙对大鼠皮层神经细胞的自由基损伤确有保护作用。

人酸性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌的高效表达

目的 :探讨人酸性成纤维细胞生长因子 (acidic fibroblast growth factor,a FGF)在大肠杆菌中高效表达的方法及重组人 a FGF的生物学活性。方法 :1通过 PCR法扩增人 a FGF引入点突变 ,对其密码子进行改造 ;2构建 a FGF- p ET- 2 8a重组质粒并在大肠杆菌 BL2 1 (DE3)中表达 ;3重组蛋白的纯化及生物学活性研究。结果 :通过 PCR扩增 ,将设计的核酸水平突变引入到 a FGF DNA中 ,使其自起始密码 ATG后的前 5 0个碱基均为原核细胞偏爱密码子、并保持原氨基酸序列不变 ,成功地实现了重组人 a FGF在大肠杆菌中的高效表达 ,并通过降低培养温度使大肠杆菌中可溶性目的蛋白的含量大幅增加 ,原核表达的 a FGF亦具有天然生物学活性。结论 :通过对 a FGF DNA碱基进行改造 ,可大幅度提高 a FGF在大肠杆菌中的表达量 。

甲氨碟呤脂质体的几种制备方法比较

目的探讨脂质体的制备方法 ,以便在具体工作中根据不同的目的选择适当的制备方法。方法采用逆相蒸发法、注射法、薄膜法和超声法制备包裹了甲氨喋呤和环胞苷的脂质体。对各种方法的关键步骤进行了讨论。结果被包物质如不稳定 ,采用薄膜法轻轻振摇超过 10h ,包封率可比短时间或震荡激烈提高。被包物质如经过短时间的超声和有机溶剂处理 ,采用逆相蒸发法 ,可获得较高包封率。结论根据被包物质的性质及具体工作不同 ,选择适当的脂质体制备方法 。

自由基介导兴奋性氨基酸对培养皮层神经细胞毒性的研究

本文在体外对新生大鼠（０～１ｄ）大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上，建立谷氨酸（Ｇｌｕ）对培养的皮层神经细胞兴奋毒损伤模型。通过检测乳酸脱氢酶释出率和形态学观察，证实了Ｇｌｕ对神经细胞存在兴奋毒作用。通过测定不同条件下Ｇｌｕ兴奋毒对培养的神经细胞造成损伤时细胞膜脂质过氧化物（ＬＰＯ）浓度，发现膜ＬＰＯ浓度与Ｇｌｕ剂量及作用时间紧密相关，表明Ｇｌｕ对神经细胞兴奋毒作用有自由基产生并介导了神经细胞的损伤。

氧自由基对大鼠海马及皮层的损伤作用

目的 探讨氧自由基对大鼠海马和皮层的损伤作用。方法 制备海马和皮层氧自由基损伤的大鼠模型 ,分析氧自由基代谢变化 ,核DNA损伤情况 ,蛋白质和脂质的损伤情况 ,以及组织结构变化等。结果 氧自由基可造成组织细胞核 DNA损伤 (DNA单链断裂增加 )、蛋白质损伤(羰基增加、ATPase活性下降、无活性或 /和低活性 SOD增加 )和脂质损伤 (LPO增加、自由基总量增加 )以及组织细胞结构损伤。结论 氧自由基可造成广泛的脑组织损伤。

氧化修饰的β_2-糖蛋白-1诱导抗心磷脂抗体的产生

目的：探讨蛋白质的氧化修饰与体内抗磷脂抗体产生的关系。方法：首先，在体外以次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化大鼠β_2-GP1，然后以氧化的β_2-GP1（oxβ_2－GP1）免疫同种大鼠，最后以ELISA方法检测被免疫大鼠β_2-GP1血清中的抗心磷脂抗体（ACA）。结果：氧化的β_2-GP1免疫的大鼠血清中产生高滴度的ACA。结论：β_2－GP1的氧化修饰在ACA的产生上可能起十分重要的作用。

脑缺血及再灌流期间生物膜磷脂代谢特点

本文利用大白鼠４血管结扎法建立脑缺血再灌流模型，同时制备脑组织线粒体和微粒体组分，检测假手术组，缺血１５ｍｉｎ，再灌ｌｈ、ｌｄ和３ｄ各组生物膜主要磷脂的含量变化，发现再灌流时磷脂代谢变化比缺血期幅度大，并且线粒体主要组成磷脂和微粒体主要组成磷脂代谢变化规律并不一致，证明磷脂代谢异常导致了生物膜功能丧失，造成了神经元的损伤。

海马及皮层的氧自由基损伤与大鼠学习能力和记忆能力的关系

目的 探讨海马及皮层的氧自由基损伤与大鼠学习能力和记忆能力的关系。方法 分别制备海马和皮层氧自由基损伤的大鼠模型 ,采用条件性回避反应法分析海马损伤模型和皮层损伤模型的学习能力改变和记忆能力改变的差异。结果 皮层损伤模型学习能力的下降甚于记忆能力的下降 ;而海马损伤模型记忆能力的下降甚于学习能力的下降。结论 皮层和海马在学习和记忆均有作用 ,且皮层偏重于学习功能 。

慢性乙肝病毒感染与抗磷脂抗体的关系

探讨慢性乙肝病毒 (HBV)感染与抗磷脂抗体 (APA)水平的相关性 ;采用ELISA方法 ,检测慢性乙型肝炎及乙肝后肝硬化患者血清中APA的水平 ;与对照组相比 ,患者血清中APA均有显著升高 (P <0 0 5 ) ,且两组患者间亦有显著差异 (P <0 0 5 ) ;

几种肾脏疾病中抗β_2GPI抗体的检测

目的 探讨抗 β2 GPI抗体 (aβ2 GPI)与几种肾脏疾病的相关性。方法 选择 6 9例肾脏病患者及 4 0例正常对照 ,用ELISA进行aβ2 GPI及抗心磷脂抗体 (ACA)检测。结果 肾脏疾病患者aβ2 GPI和ACA阳性率均高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,肾脏病患者中aβ2 GPI和ACA呈正相关性 (r=0 .6 89,P <0 .0 5 )。结论 aβ2 GPI和ACA很可能针对同一种抗原 ,而且与慢性肾炎、肾病综合征、狼疮性肾炎等肾脏疾病有相关性 ,推测aβ2 GPI可能在肾脏病患者高凝状态的形成中起重要作用。

抗心磷脂抗体检测及其影响因素的研究

目的 :研究血清样品稀释度、温度、离子强度以及样品检测间隔时间对血清抗心磷脂抗体 (ACA)检测结果的影响。方法 :采用酶联免疫吸附测定法 (ELISA)检测ACA。结果 :血清样品最佳稀释度为 1∶5 0 ;37℃时光吸收值比 2 2℃和 2 5℃的光吸收值显著下降 ;15mol LNaCl可明显抑制ACA与抗原结合 (P <0 0 1) ,抑制率平均为 45 4% ;包被 14d以上的检测结果明显高于 1d和 7d的测定结果 (P <0 0 5 )。结论 :血清ACA检测结果受血清样品稀释度、温度、离子强度及包被时间影响。

氧自由基对CAT、SOD和GPX的氧化修饰研究

以氧自由基产生系统作用于CAT、SOD和GPX,探索氧自由基的氧化修饰对CAT、SOD和GPX结构与功能的影响。结果:CAT被氧自由基氧化修饰后,改变了酶蛋白二级结构(α-螺旋百分含量减少)、空间构象(ΔCp减少,分子粒晶直径增大)、辅基Fe(Ⅲ)微环境及酶、底物的亲和力和催化活性。过氧化氢 羟自由基系统可以使SOD酶蛋白氨基酸残基氧化产生羰基,并使SOD活性降低。过氧化氢 羟自由基可在His对SOD作用背景上更为严重地损伤SOD(活性降低幅度更大)。氧自由基对GPX有损伤作用:氧自由基可使GPX酶蛋白氨基酸残基氧化产生羰基,并可使GPX酶蛋白二级结构发生变化(α-螺旋百分含量减少),这些可能是使GPX活性下降的原因。结果提示:氧自由基的氧化修饰,可对抗氧化酶CAT、SOD和GPX造成损伤。氧自由基使酶蛋白结构和辅基的微环境与价态发生变化,可能是酶活性降低的原因。

人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞O_2^-和H_2_O_2损伤的保护作用

目的：研究人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞自由基损伤的保护作用。方法：应用O-2和H2O2对培养大鼠皮层神经细胞损伤模型。结果：与损伤组比较，人参皂甙保护组的乳酸脱氢酶（LDH）释放量显著减少（P<0．01）；而细胞存活率显著增高（P＜0．01）。结论：人参皂甙能保护培养大鼠皮层神经细胞少受自由基损伤。

超氧阴离子自由基诱导皮层神经细胞Cu/ZnSOD基因表达的研究

目的:探讨超氧阴离子自由基对神经细胞Cu ZnSOD基因表达的影响。方法:以产超氧阴离子自由基系统(XO X)作用于原代培养的新生大鼠大脑皮层神经元,分析SOD含量、SOD活性和SODmRNA丰度。结果:SOD含量随超氧阴离子自由基作用时间的延长显著增加,第5天后增加的变化趋于稳定,第7天达每毫克蛋白质(1 24±0 23)μg;SOD活性在开始的1～5d呈上升状态,第5天为每毫克蛋白质(5 30±0 44)U,第6天开始显著下降为每毫克蛋白质(2 15±0 32)U,且稳定至第7天的每毫克蛋白质(2 08±0 73)U;SODmRNA的相对丰度显著高于对照组。结论:超氧阴离子自由基可诱导培养的神经细胞Cu ZnSOD基因表达;SOD活性变化和SOD含量变化并不平行,可能是在超氧阴离子自由基作用一定时间后,细胞内出现了无活性或 和低活性的SOD。