冠突曲霉UBC与MAT1-2-1互作关系验证及功能研究

【目的】验证冠突曲霉泛素结合酶(UBC)与交配型蛋白(MAT1-2-1)的互作关系,对UBC基因进行功能研究,为深入解析冠突曲霉有性产孢机制提供理论参考。【方法】采用实时荧光定量PCR检测UBC基因在冠突曲霉有性发育阶段的表达水平,酵母双杂交试验验证MAT1-2-1与UBC的互作关系,利用无缝克隆方法构建pDHt/sk-hyg-UBC过表达载体,并转化冠突曲霉获得UBC过表达菌株,对过表达菌株进行表达量检测、形态学观察及氧和盐胁迫的耐受性测定。【结果】PCR克隆获得UBC基因的编码区(CDS)序列,长度为474 bp,编码157个氨基酸残基,相对分子质量为39587.24 Da,理论等电点为5.16,为疏水的不稳定蛋白,含跨膜结构域,定位于细胞核,属于UBCc超家族成员。有性发育阶段(闭囊壳形成期和子囊孢子大量形成期)UBC基因的相对表达量显著高于营养菌丝体阶段(P<0.05,下同)。自激活检测结果显示,UBC无自激活作用;酵母双杂交验证结果显示,UBC与MAT1-2-1存在互作关系。通过构建过表达载体pDHt/sk-hyg-UBC成功获得UBC过表达菌株(OE::UBC)。与野生型菌株相比,UBC和MAT1-2-1基因在UBC过表达菌株的相对表达量均显著升高。UBC过表达菌株与野生型菌株在MYA、MYA+5%NaCl和MYA+17%NaCl固体培养基上的菌落形态无明显差异。过表达菌株能分别在含18 mmol/L过氧化氢和25%NaCl的培养基中生长,而野生型菌株不能生长,说明UBC基因的过表达提高冠突曲霉对氧胁迫和盐胁迫的耐受性。【结论】UBC基因可能与冠突曲霉的有性发育相关,且与MAT1-2-1基因存在共表达特征。由于UBC与MAT1-2-1存在互作关系,且UBC基因的过表达可明显增强冠突曲霉的抗氧化和抗盐能力,故推测UBC通过与MAT1-2-1发生互作共同参与冠突曲霉的氧胁迫和盐胁迫应答过程。

艳山姜风味发酵酒工艺条件的优化

为艳山姜风味发酵酒的开发奠定理论基础,以艳山姜为原料,酒精度、感官品评为衡量指标,在单因素试验(料液比、主发酵温度、起始pH、酵母添加量、主发酵周期)的基础上进行正交试验,筛选艳山姜风味发酵酒的最优工艺参数。结果表明:适宜艳山姜发酵的菌株为安琪活性干酵母RH。优化工艺参数为料液比5%、主发酵温度25℃、起始pH 4.0、酵母添加量0.9%和主发酵周期11d。发酵的产品酒精度为10.05%,总糖为(5.56±0.43)g/L、总酸为(4.80±0.24)g/L、感官评分为(90.67±2.08)分。质量指标符合有关标准限量,发酵酒体呈金黄色,有光泽,具有艳山姜的特征香味。

橘绿木霉GF-11的哌珀霉素鉴定及活性研究

[目的]为将橘绿木霉GF-11应用于生防实践,研究了该菌的哌珀霉素及其生物活性。[方法]使用浸提法提取该菌的哌珀霉素,运用TLC及LC-MS/MS鉴定哌珀霉素,并采用稀释平板法和牛津杯法测定抑菌效果,应用染色法、电导率测定、核酸和蛋白质含量测定、DNA降解等指标初步分析了该粗提物对链格孢菌的抑菌机制。[结果]TLC和LC-MS/MS结果显示该粗提物有5种新的哌珀霉素;粗提物对链格孢菌、细极链格孢菌、高氏白粉菌的抑菌率分别为61.2%、58.2%、35.7%,对链格孢菌孢子萌发的抑制率为85%;对大肠杆菌等细菌抑制效果较弱。粗提物可改变链格孢菌丝形态、破坏细胞膜结构,致使胞内电解质及大分子物质外泄,降解基因组DNA。[结论]橘绿木霉GF-11粗提物中鉴定出5种新的哌珀霉素;该粗提物对真菌抑菌效果较好,对细菌抑菌效果较差,并可通过破坏病原菌细胞膜结构达到抑菌效果。