人脐血间充质干细胞移植联合神经节苷脂注射治疗脑性瘫痪

背景:最近研究证实神经节苷脂在体外能促进脐血间充质干细胞存活及分化。目的:观察侧脑室注射人脐血间充质干细胞及神经节苷脂对脑性瘫痪大鼠神经功能恢复的影响。方法:受孕17 d大鼠腹腔注射脂多糖2 d,放回笼中饲养,孕鼠分娩出脑性瘫痪乳鼠60只,随机分5组:模型组10只,假移植组10只,脐血间充质干细胞移植组18只,神经节苷脂组10只,联合移植组12只。在立体定位仪下,将脐血间充质干细胞或神经节苷脂注入左侧侧脑室,假移植组注入同样体积的PBS。在移植后7,14,21,28 d分别处死2只脐血间充质干细胞移植组大鼠,移植后14 d处死2只联合移植组大鼠,进行脑组织免疫荧光染色。移植后28 d进行神经功能评估。结果与结论:1脐血间充质干细胞能存活、迁移、分化,主要分布在侧脑室、海马、皮质。移植后14 d,联合移植组Brd U、GFAP阳性细胞数明显高于脐血间充质干细胞移植组,差异有显著性意义(P<0.05);2神经功能评估:与模型组比较,脐血间充质干细胞移植组、神经节苷脂组、联合移植组的握持时间延长、足错误次数减少,差异有显著性意义(P<0.05)。联合移植组优于脐血间充质干细胞移植组及神经节苷脂组,差异有显著性意义(P<0.05);3结果表明,脐血间充质干细胞及神经节苷脂均能改善脑性瘫痪大鼠神经功能,神经节苷脂能够提高脐血间充质干细胞在大鼠脑内存活及分化,联合应用效果更好。

新生大鼠海马神经干细胞的无血清培养及鉴定

目的探讨新生大鼠海马神经干细胞无血清培养的最佳方法,观察神经干细胞的生长、增殖及分化的特点。方法分离新生24h大鼠的海马组织,分别采用含碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、及bFGF+EGF的无血清条件培养基进行悬浮培养,采用神经巢蛋白(nestin)免疫荧光染色方法鉴定神经干细胞,通过胎牛血清诱导分化,鉴定分化细胞,进一步证实神经干细胞。结果bFGF+EGF能更好的诱导神经干细胞增殖,培养细胞呈nestin抗原阳性,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特异性抗原。结论bFGF+EGF的无血清培养基可用于培养大鼠海马神经干细胞。

硫必利与氟哌啶醇治疗Tourette综合征疗效及安全性

目的对比硫必利与氟哌啶醇治疗Tourette综合征（TS）的疗效和安全性。方法将71例TS患儿随机分为硫必利组35例和氟哌啶醇组36例。硫必利组给予硫必利150-300mg／d，氟哌啶醇组给予氟哌啶醇1．5-6．0mg／d，同时给予等量安坦治疗。两组均治疗12周。于治疗前、治疗第12周末采用耶鲁抽动症整体严重度量表（YGTSS）、治疗中需处理的不良反应症状量表（TESS），对两组患儿进行评估。结果治疗后，两组患儿的总抽动得分、综合损伤得分和YGTSS总分与治疗前比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。两组患儿之间的总抽动得分、综合损伤得分和YGTSS总分的差异无统计学意义（P均〉0．05）。氟哌啶醇组患儿的TESS评分高于硫必利组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论硫必利与氟哌啶醇治疗TS疗效相当，硫必利相对不良反应轻，耐受性好。

人脐血间充质干细胞在脑瘫大鼠脑内定植和存活能力的研究

目的：通过侧脑室注射,观察人脐血间充质干细胞（MRCs）在脑瘫（CP）大鼠脑内的存活、迁移、分化情况。方法：用腹腔注射脂多糖方法制作CP大鼠模型14只,将标记过的MSCs经侧脑室注射到12只CP大鼠脑内,观察在注射1-4周后MSCs在脑内存活、迁移、分化情况;2只不进行注射的CP大鼠作空白对照。结果：腹腔注射脂多糖方法成功制作CP模型;MSCs鉴定成功;MSCs经侧脑室注射能在CP大鼠脑内存活、迁移,并分化成神经细胞,随移植时间推移,有减少趋势（P〈0.01）。2只未注射模型大鼠未检测到MSCs阳性细胞。结论：MSCs能在CP大鼠脑内定植,随着时间推移,数量明显减少。

神经营养素-3体外诱导新生鼠海马神经干细胞定向分化

目的探讨神经营养素-3(NT-3)对神经干细胞(NSCs)定向分化的影响。方法取24h龄新生鼠海马组织,以无血清培养基获得NSCs,随即分为实验和对照组。实验组用基础培养液加50g/L胎牛血清(FBS)和20μg/LNT-3诱导其分化;对照组用基础培养液加50g/LFBS。用免疫荧光及流式细胞仪法检测分化得到神经元特异性烯醇化酶(NSE)神经元及阳性神经元比例。结果随着分化培养时间延长,二组NSE阳性神经元渐增加;实验组NSE阳性神经元的比例在分化培养第3天达到高峰,约63%,对照组仅29%,二组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论NT-3体外促进NSCs向神经元定向分化,并可提高其分化比例。

培土生金穴位敷贴对CVA患儿免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群的影响

目的:研究培土生金穴位敷贴对咳嗽变异型哮喘(cough variant asthma,CVA)患儿免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群的影响。方法:纳入86例CVA患儿,随机均分为观察组与对照组,各43例。对照组采用常规治疗,观察组在此基础上联合培土生金穴位敷贴治疗。连续治疗2个月,比较治疗前后肺功能指标、血清免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群水平,并评价综合临床疗效。结果:观察组治疗总有效率为90.70%,高于对照组的74.42%(P<0.05)。治疗前,2组IgA、IgG和IgE水平差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组IgA、IgG水平明显高于治疗前,IgE水平明显低于治疗前(P<0.01),且观察组IgA、IgG水平明显高于对照组,IgE水平明显低于对照组(P<0.01)。2组治疗后CD4^+水平、CD4^+/CD8^+明显升高,CD8^+明显降低(P<0.01),且治疗后观察组CD4^+水平、CD4^+/CD8^+明显高于对照组,CD8^+明显低于对照组(P<0.01)。2组治疗后第1 s用力呼气量、最大呼气量、肺活量均明显升高(P<0.01),且治疗后观察组FVC高于对照组(P<0.05)。结论:常规治疗基础上联合培土生金穴位敷贴治疗小儿CVA能升高患儿肺功能指标FVC,增强体液及细胞免疫,具有显著的辅助治疗效果。

人脐血间充质干细胞移植与神经节苷脂注射治疗脑瘫大鼠的对比研究

目的：建立稳定的人脐血间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）分离培养体系，观察其移植对脑瘫（CP）大鼠功能恢复的影响及细胞的存活、迁移、向神经细胞分化的情况，并与神经节苷脂（GMl）注射对CP鼠神经功能恢复进行对比。方法：采集足月新生儿脐带血100ml，分离出单个核细胞，体外培养并予5-溴脱氧嘧啶尿苷（Brdu）标记72h；受孕17d孕鼠腹腔注射脂多糖（LPS）0．4mg／（kg·d），12h后置于缺氧环境2～2．5h，4h后再次腹腔注射同剂量LPS，孕鼠自体分娩，生后4周，通过行为学评分选择CP模型动物80只，随机分为4组：CP组（CP模型）、假移植组（CP模型＋PBS）、MSCs移植组（CP模型＋MSCs）、GMl注射组（CP模型＋GM1），每组20只。移植后第1、2、3周应用免疫荧光法观察Brdu标记的MSCs的存活、迁移，移植后第4周，通过行为学评价观察大鼠神经功能恢复情况，应用免疫荧光法检测其胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达情况。结果：MSCs移植比GM1注射使大鼠握持时间更长，足错误次数更少（P〈0．05）；移植的MSCs可在大鼠脑组织中存活，并向四周脑组织迁移，（0．45±0．68）个MSCs表达GFAP，（0．15±0．36）个MSCs表达NSE。结论：人脐血MSCs移植比神经节苷脂注射较好的提高CP大鼠神经功能的恢复，移植细胞可在大鼠脑缺血区域中存活、迁移，并部分向星形胶质细胞或神经元分化。

脑源性神经营养因子体外诱导新生大鼠海马神经干细胞定向分化

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)定向分化的影响,寻找新的NSCs诱导剂,以提高向神经元方向分化比例。方法取1日龄新生大鼠海马组织,采用无血清培养液悬浮培养方法进行培养,传2代后可得到高纯度NSCs。通过NSCs特殊标志物神经巢蛋白(nestin)染色鉴定培养细胞。将传3代的NSCs随即分为2组,每组15份,每份均为2mL,含细胞数为1×105。实验组用基础培养液加入50g/L胎牛血清和20μg/LBDNF诱导其分化;对照组用基础培养液加入50g/L胎牛血清。分化培养1周后用免疫荧光标记及流式细胞术检测其分化得到的神经元及其比例。结果通过无血清悬浮培养海马组织细胞呈球形生长,nestin免疫荧光染色呈强阳性表达,细胞纯度>90%;免疫荧光标记及流式细胞仪检测,实验组NSE阳性细胞的百分比为60.45%,明显高于对照组(23.67%)(χ2=27.75P<0.005)。结论通过无血清悬浮培养法培养新生大鼠海马组织细胞可获得纯度较高的NSCs;BDNF可体外诱导海马NSCs向神经元定向分化,并提高其分化比例;BDNF是一种较为理想的NSCs分化诱导剂。

鼠神经生长因子联合脑源性神经营养因子诱导人脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化

背景:作者在前期研究中发现鼠神经生长因子具备诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化的能力,为进一步探讨提高诱导效率的方法,拟尝试使用多种细胞生长因子进行联合诱导。目的:探讨鼠神经生长因子联合脑源性神经营养因子在体外条件下对人脐血间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化的作用。方法:复苏获赠的原代人脐血间充质干细胞并进行体外扩增培养,取第5代脐血间充质干细胞分为5组,其中前4组为预诱导组,在加入成纤维生长因子和表皮生长因子预诱导24 h后,再用鼠神经生长因子、脑源性神经营养因子及二者联合对脐血间充质干细胞进行诱导,对照组仅使用等量细胞培养基培养;最后一组为非预诱导组,先用细胞培养基培养24 h后,再加入鼠神经生长因子和脑源性神经营养因子进行联合诱导。倒置显微镜下观察诱导后细胞形态变化,并用免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达,实时荧光定量PCR技术检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白在m RNA水平的相对表达量。结果与结论:(1)脐血间充质干细胞形态为大小不一的长梭形、纺锤形,经诱导后细胞胞体逐渐回缩变圆,并向一侧或多侧发出突起,呈现出神经元样细胞改变;(2)免疫细胞化学及实时荧光定量PCR结果显示各实验组细胞均阳性表达神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白,联合诱导组神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性率及二者m RNA表达量均高于单独诱导组、对照组以及非预诱导组;(3)鼠神经生长因子和脑源性神经营养因子均能诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化,二者在诱导过程中具有协同作用,联合使用能够有效提高诱导效率。

鼠神经生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化

背景:脐血间充质干细胞是从胎儿脐血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为类神经元的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的科学研究价值。目的:探讨鼠神经生长因子在体外条件下对脐血间充质干细胞向类神经元诱导分化的作用。方法:复苏人脐血间充质干细胞,体外扩增培养并观察细胞形态特征,绘制细胞生长曲线。取第5代脐血间充质干细胞,分别加入质量浓度为50,100,150,200μg/L的鼠神经生长因子培养液作为诱导组,另设不加任何诱导剂的空白对照组,每日倒置显微镜下观察细胞形态变化并拍照记录,诱导7 d后采用免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,使用Image-Pro Plus 6.0软件计算NSE、GFAP阳性表达率。结果与结论:(1)脐血间充质干细胞复苏后活性达90%以上,形态为大小不一的长梭形、纺锤形,其生长曲线呈"S"型,第3-6天为细胞对数生长期;(2)经鼠神经生长因子诱导后细胞形态出现典型类神经元样改变,而对照组细胞形态无明显变化;(3)免疫细胞化学法显示鼠神经生长因子诱导后细胞NSE、GFAP均呈阳性表达,其中100μg/L鼠神经生长因子诱导组的NSE、GFAP阳性表达率最高,相比其他鼠神经生长因子诱导组差异有显著性意义(P<0.05),而对照组无NSE、GFAP阳性细胞;(4)结果表明,鼠神经生长因子在体外能够诱导脐血间充质干细胞分化为类神经元,100μg/L为较合适的诱导质量浓度。

脐血间充质干细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从胎儿脐带血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为神经细胞的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的研究价值,该文将对脐血间充质干细胞向神经细胞定向分化的诱导方法作一综述。

自制教具在小学英语单词教学中的运用

近年来,小学英语教学的开展为我国英语水平提升起到了一定的促进作用。各种教学创新也被搬到了小学英语的课堂上。自制教具便是其中的一种,其通过更加直观的教学演示,让小学生将枯燥难懂的英语单词难度有效降低。

自制教具在小学英语单词教学中的运用

近年来,小学英语教学的开展为我国英语水平提升起到了一定的促进作用。各种教学创新也被搬到了小学英语的课堂上。自制教具便是其中的一种,其通过更加直观的教学演示,让小学生将枯燥难懂的英语单词难度有效降低。

重症手足口病33例

目的探讨重症手足口病(HFMD)的临床特点、治疗方法及预后。方法收集33例重症HFMD患儿的临床资料,并对其临床特点、治疗方法和转归等进行分析。结果 33例中男25例,女8例;3岁以下占93.93%。中枢神经系统损害发生在病程第3天(中位数)。33例均出现发热、皮疹,26例有易惊、肢体抖动、惊恐样表情,10例出现呕吐,6例出现走路不稳、肢体无力,6例出现抽搐,3例出现嗜睡,3例出现肢体迟缓性瘫痪,2例出现呼吸不规则、抽泣样呼吸,2例出现昏迷,1例出现感染性休克。并病毒性脑炎27例,脑膜炎、脑脊髓炎、脑干脑炎各2例。入院后予甲泼尼龙、丙种球蛋白、降颅压、抗感染等对症治疗。经治疗后死亡1例,死于神经源性肺水肿;3例出院时留有神经系统损伤后遗症;余29例治愈出院。结论 HFMD并中枢神经系统感染主要发生在3岁以下幼儿,早发现、早治疗大多预后较好,并发脑干脑炎、神经源性肺水肿、脑脊髓炎病情重,可导致死亡或留有后遗症。

托吡酯添加治疗难治性癫的疗效

目的研究托吡酯添加治疗难治性癫的疗效和安全性。方法以2008年8月-2009年11月在本院儿科就诊的31例难治性癫患儿为研究对象,原来托吡酯添加治疗使用的抗癫药物种类和剂量不变,采用托吡酯添加治疗,初始剂量从0.5～1.0mg.kg-1.d-1开始,每周增加0.5～1.0 mg.kg-1,目标剂量为4.0～8.0 mg.kg-1.d-1,根据癫控制情况调整托吡酯用量。随访3个月。结果患儿治疗12周后,总有效率为84.0%,其中控制5例,显效14例,有效7例,无效5例,无恶化病例。治疗8周、12周,总有效率与治疗4周比较明显提高(Pa<0.05)。发作类型中,治疗12周后简单局限性癫总有效率为75.0%,复杂局限性癫为88.8%,全面性发作为92.3%,继发性癫为50.0%。9例患儿在加量期出现不良反应,但不需特殊处理,除6例体质量下降外,其他症状自行消失。结论托吡酯添加治疗难治性癫是安全有效的。

神经营养素3及神经干细胞联合移植治疗实验性大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的研究神经营养素3(NT-3)及神经干细胞联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠神经功能恢复及神经干细胞分化为神经元的比例的影响,并探讨其可能机制。方法取新出生的24 h 内的 wistar 大鼠,从海马中分离神经细胞,进行培养、鉴定。用出生7 d 的 wistar 新生大鼠制作缺氧缺血性脑损伤的动物模型,模型成功后7 d 进行移植。将实验大鼠随机分为5组:正常组、模型组、假移植组、神经干细胞移植组、NT-3及神经干细胞联合移植组(简称联合移植组),每组12只。移植部位为损伤同侧侧脑室。移植后4周进行功能实验,取脑组织进行免疫组化及免疫荧光检查。结果从新生鼠海马中成功培养出神经干细胞,培养条件下呈悬浮状态生长,形成神经球,绝大多数的细胞表达神经干细胞的标志物神经巢蛋白(nestin)。说明培养的细胞大部分为神经干细胞,细胞纯度达90%以上。Y 迷宫实验结果:神经干细胞移植组平均(163±11.6)次学会,记忆的平均正确率为(50±13.3)%;神经干细胞(NSC)+NT-3联合移植组平均(117.27±11.04)次学会,记忆的正确率平均(63±11.2)%。握持牵引实验结果:神经干细胞移植组平均(30.1±11.8)s,右下肢能放置的占40%;NSC+NT-3联合移植组平均(40.64±10.6)s,右下肢能放置的占72.73%。斜坡实验结果:神经干细胞移植组平均(20.3±8.25);NSC+NT-3联合移植组平均(12.9±5.15)s。说明接受 NT-3及神经干细胞移植组大鼠的学习能力、记忆能力及肢体功能与单纯神经干细胞移植组相比有明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。其神经干细胞分化成神经元的比例(50%)与单纯神经干细胞移植组(30%)比有明显增多。结论 NT-3与神经干细胞联合移植能提高缺氧缺血性脑损伤大鼠的学习、记忆能力和肢体功能,并能提高神经干细胞向神经元转化的比率,NT-3和神经干细胞联合移植较单独神经干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤有更好的治疗效果。

肠道病毒71型衣壳蛋白VPl研究进展

人肠道病毒71型（enterovims 7l，EV71）是婴幼儿手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）的主要致病原之一。临床研究发现，EV71感染可导致多种临床表现，从轻微HFMD到致命性脑干脑炎并发肺水肿甚至死亡，但原因尚不清楚。EV71衣壳蛋白VPl在病毒识别、结合、进入靶细胞及病毒颗粒装配过程中发挥核心作用，VPl变异是EV7l适应性和免疫原性的重要决定因素。现对VPl结构、功能及其相关的抗病毒疫苗和药物的研究进展进行综述，为进一步研发新的更有效的抗病毒疫苗和药物提供理论基础。

神经营养因子与神经干细胞移植联合治疗缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的观察神经营养因子与神经干细胞(NSCs)联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的治疗效果。方法取新生24h的Wistar大鼠海马NSCs进行培养、鉴定。选7日龄Wistar大鼠制备HIBD动物模型,7d后行损伤侧侧脑室移植。将实验大鼠随机分为9组:正常组、模型组、磷酸盐缓冲液移植组、NSCs移植组、BDNF组、BDNF+NSCs移植组、NT-3组、NT-3+NSCs移植组、BDNF+NT-3+NSCs移植组。移植4周后进行功能实验,取脑组织进行免疫组化及免疫荧光检查。结果从新生大鼠海马可成功培养出NSCs,并表达NSCs的标志物神经巢蛋白(neuroepi-thelial stem cell protein,Nestin),NSCs可分化为神经元及星形胶质细胞。Y迷宫实验:NSCs移植组达到学会的次数(163±11.60)n,正确记忆次数(5.00±1.13)n;BDNF组(150.00±8.94,5.17±1.47)n;BDNF+NSCs移植组(111.25±13.56,6.23±1.60)n;NT-3组(153.56±10.35,5.07±1.03)n;NT-3+NSCs移植组(117.27±11.4,6.30±1.1)n;BDNF+NT-3+NSCs移植组(110±11.55,6.30±1.1)n。悬吊实验:NSC移植组平均(30.10±11.8)s;BDNF组(36.25±10.98)s;BDNF+NSCs移植组(43.6±10.56)s;NT-3组(34.95±10.15)s;NT-3+NSCs移植组(40.64±10.6)s;BDNF+NT-3+NSCs移植组(42.20±6.25)s。斜坡试验:NSCs移植组平均(20.3±8.25)s;BDNF组(14.33±2.88)s;BDNF+NSC移植组(11.17±2.48)s;NT-3组(15.26±2.98)s;NT-3+NSC移植组(12.8±3.65)s;BDNF+NT-3+NSCs移植组(12.9±5.18)s。说明各联合移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与NSCs移植组比较,明显改善(P<0.05),而NSCs组大鼠学习记忆能力及神经功能与HIBD组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各联合移植组损伤侧皮层、海马存活的NSCs数量(BDNF+NSC移植组9.31±0.71个,10.10±1.65个;NT-3+NSCs移植组6.18±1.83个,8.18±3.06个;BDNF+NT-3+NSCs移植组为9.58±1.61个,11.45±1.36个)与NSCs组(3.33±0.24个,4.22±0.33个)比较明显增多(P<0.05),且NSCs分化为神经元的比例明显增多,与NSCs移植组比较,有统计学意义(P<0.05),但双因子联合移植组与其单因子移植组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论BDNF、NT-3与NSCs联合移植是治疗HIBD的有效方法。