核酸负载纳米金的改良ELISA高灵敏检测平台的构建

目的构建基于核酸负载纳米金(AuNPs)的酶联免疫吸附试验(ELISA)高灵敏检测平台。方法将生物素化DNA通过金-硫键结合在AuNPs上,制备纳米金生物素化DNA(AuNPs@DNA-B)信号探针,在ELISA检测目标分子的基础上,使信号探针通过链霉亲和素结合于夹心复合物中的生物素化抗体上,发挥信号放大作用,实现对目标分子的高灵敏检测。该研究选用血清水平极低的抗体免疫球蛋白(Ig)E作为目标分子,验证该检测平台的可行性。结果通过紫外光谱扫描、透射电镜观察,发现制备的AuNPs颗粒大小均匀、分散性好。在最优条件下,该方法对选定的目标分子IgE的最低检测限为0.012 ng/mL;批内变异系数<2.0%,批间变异系数<6.1%;该方法的回收率为(99.956±0.168)%~(104.733±3.376)%,传统ELISA为(99.100±0.529)%~(100.044±0.276)%,差异无统计学意义(P>0.05)。其检测灵敏度与化学发光法相近。结论该研究成功构建了基于AuNPs@DNA-B的信号放大ELISA高灵敏检测平台。

细胞因子/趋化因子在单纯疱疹病毒脑炎小鼠表达及生物信息学分析

目的 探讨单纯疱疹病毒脑炎(herpes simplex encephalitis, HSE)中细胞因子/趋化因子谱的表达情况,确定差异表达的因子及其相关的生物信息学作用。方法 单纯疱疹病毒1型(HSV-1)接种于Vero细胞,Reed-Muench法测定病毒滴度;实验组小鼠鼻腔接种HSV-1,建立动物感染模型,观察至接种后第7天,处死小鼠,左半脑制备石蜡切片用于病理学检测,右半脑制备脑组织匀浆用于观察其致Vero细胞病变作用及高通量细胞因子/趋化因子表达谱芯片检测。GO、KEGG和PPI等分析技术用于差异表达蛋白的生物信息学研究。结果 实验组小鼠接种HSV-1后几乎都出现了病毒性脑炎的症状(发病率为100%),7 d内15只小鼠中死亡3只(死亡率20%),而对照组小鼠均正常,但实验组动物的发病率和死亡率与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。脑组织病理学检测发现实验组小鼠脑组织轻度水肿伴大量炎性细胞浸润,见少量出血灶,对照组小鼠脑组织正常。实验组小鼠脑组织匀浆接种Vero细胞后发现大量细胞脱落、融合,出现明显的细胞病变效应,对照组细胞无明显改变。脑组织匀浆经PCR扩增出了病毒UL36的基因片段,而对照组未扩增出。细胞因子/趋化因子芯片于实验组筛选出了7个差异表达蛋白,GO富集分析发现其涉及多个生物学过程,与炎性细胞的活化和趋化有关;KEGG通路富集分析筛选出了7个有意义的信号通路,涉及TNF信号通路和NOD样受体信号通路等;PPI分析发现大多数差异表达蛋白组成了一个相互作用网络,其中IL-6、IL-1、IFN-γ和TNF-α是该网络的主要因子。结论 单纯疱疹病毒脑炎小鼠模型中筛选出了7种差异表达的细胞因子/趋化因子,和与之相关的信号通路可能参与了HSE的病理生理机制。