白术多糖对脂多糖处理下雏鹅十二指肠肠道屏障功能的调节作用

本试验旨在探索白术多糖(PAMK)对脂多糖(LPS)诱导的雏鹅十二指肠肠道屏障损伤的调节作用。将240只1日龄雏鹅随机分为4组(对照组、PAMK组、LPS组、PAMK+LPS组),每组6个重复,每个重复10只雏鹅。对照组和LPS组饲喂基础饲粮,PAMK组和PAMK+LPS组饲喂含有400 mg/kg PAMK的基础饲粮。对照组和PAMK组于21日龄时腹腔注射0.5 mL生理盐水,LPS组和PAMK+LPS组腹腔注射5 mg/kg BW的LPS注射液。腹腔注射后12 h采集雏鹅的血清、十二指肠样品。通过检测肠绒毛形态、血清D-乳酸含量、血清二胺氧化酶(DAO)活性、十二指肠紧密连接和黏附连接相关指标来评估肠道机械屏障功能;通过检测十二指肠杯状细胞数量和黏蛋白相关指标评估肠道化学屏障功能;通过检测十二指肠炎症通路和炎性细胞因子相关指标评估肠道免疫屏障功能。结果显示:与对照组相比,PAMK组十二指肠的绒毛高度、绒隐比、隐窝深度均无显著变化(P>0.05);血清中D-乳酸含量和DAO活性无显著变化(P>0.05);十二指肠组织中闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁小带蛋白-2(ZO-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-连环蛋白(α-catenin)、β-连环蛋白(β-catenin)、连接黏附分子(JAM)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的基因相对表达量无显著变化(P>0.05);十二指肠的杯状细胞数量无显著变化(P>0.05);十二指肠组织中黏蛋白-1(MUC-1)和黏蛋白-2(MUC-2)的基因相对表达量无显著变化(P>0.05);十二指肠组织中Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)基因相对表达量和TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)、NLRP3、Caspase-1的蛋白表达水平无显著变化(P>0.05)。与对照组相比,LPS显著降低了十二指肠的绒毛高度和绒隐比(P<0.05),并显著增加了隐窝深度(P<0.05);显著增加了血清中DAO活性(P<0.05);显著降低了十二指肠组织中β-catenin、JAM的基因相对表达量(P<0.05);显著减少了十二指肠的杯状细胞数量(P<0.05);显著降低了十二指肠组织中MUC-2基因相对表达量(P<0.05);显著提高了十二指肠组织中TLR4、NLRP3、Caspase-1、TNF-α、IL-6的基因相对表达量和MyD88、Caspase-1的蛋白表达水平(P<0.05)。与对照组相比,PAMK显著增加了LPS处理下十二指肠的绒毛高度(P<0.05),显著减少了隐窝深度(P<0.05),显著增加了绒隐比(P<0.05);显著减少血清中D-乳酸含量(P<0.05);显著增加十二指肠组织中Occludin、β-catenin、JAM基因相对表达量(P<0.05);显著增加了LPS处理下十二指肠中的杯状细胞数量(P<0.05);显著增加了十二指肠组织中MUC-2的基因相对表达量(P<0.05);显著降低了LPS处理下十二指肠组织中TLR4、NLRP3、Caspase-1、TNF-α、IL-6基因相对表达量和MyD88、Caspase-1的蛋白表达水平(P<0.05)。综上所述,LPS可以破坏雏鹅十二指肠肠道的屏障功能,PAMK具有缓解LPS造成的十二指肠肠道屏障损伤的作用。

白术多糖缓解环磷酰胺诱导的岭南黄鸡氧化应激和肝脏细胞凋亡

本研究旨在探索白术多糖(PAMK)对环磷酰胺(CTX)诱导的岭南黄鸡氧化应激和肝脏细胞凋亡异常的调节作用。选用240只健康1日龄岭南黄鸡,随机分成4个组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组和环磷酰胺组(CTX组)饲喂基础饲粮,白术多糖组(PAMK组)和白术多糖+环磷酰胺组(PAMK+CTX组)饲喂添加400 mg/kg PAMK的基础饲粮。在20、21、22日龄时,CTX组和PAMK+CTX组的岭南黄鸡腿肌注射20 mg/kg CTX,对照组和PAMK组的岭南黄鸡腿肌注射0.5 mL生理盐水。试验期27 d。结果显示:与CTX组相比,PAMK+CTX组肝脏细胞凋亡现象有所缓解,肝脏细胞状态有所恢复,炎性浸润程度有所降低,点状坏死灶数量明显减少;此外,血清丙二醛(MDA)含量显著下降(P<0.05),血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05),肝脏组织半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)的蛋白相对表达量和半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)的mRNA相对表达量显著下调(P<0.05)。由此可见,PAMK能够缓解由CTX引起的岭南黄鸡氧化应激和肝脏细胞凋亡增多的现象。

LPS通过ROS/p38/MAPK信号通路对鹅胚肝细胞凋亡的影响

【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术,探索脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制,为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚,无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化,过细胞筛后分离培养鹅胚肝细胞并进行PAS染色鉴定。在鹅胚肝细胞中添加不同浓度(0(对照组)、0.1、1.0、10μg/mL)LPS,分别于12、24、36 h收集细胞,采用试剂盒检测鹅胚肝细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡关键基因(caspase3、caspase9、p38)mRNA表达量。【结果】试验成功从鹅胚中分离出肝细胞并进行培养,鹅胚肝细胞形态完整,贴壁率高,存活率高,能稳定生长。PAS染色结果显示,鹅胚肝细胞质呈深浅不一的紫红色,肝细胞核呈蓝色。添加不同浓度LPS后发现,鹅胚肝细胞有氧化损伤情况,其中1.0μg/mL LPS组鹅胚肝细胞内ROS水平升高。添加LPS后鹅胚肝细胞晚期细胞凋亡受到抑制,除36 h外,细胞凋亡关键基因caspase 3、caspase 9、p 38表达量均显著降低(P<0.05)。【结论】本研究建立了较稳定的鹅胚肝细胞分离培养方法,添加不同浓度LPS后鹅胚肝细胞内ROS水平升高,激活p38/MAPK通路,且细胞凋亡受到一定抑制。

非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光LAMP检测方法的建立

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)通用型高通量检测技术,利用高度保守的非结构DNA聚合酶G1211R基因,制备质粒标准品,建立实时荧光LAMP方法,出现典型的S形核酸扩增曲线,扩增产物具有特异的熔解曲线。G1211R基因质粒标准品在1.81×10~5拷贝数/μL^1.81×10~9拷贝数/μL对数值与Ct值之间的线性关系良好。以ASFV E70株病毒核酸为模板,LAMP检测灵敏度达到21pg,优于荧光定量PCR方法。重复性试验LAMP检测批内和批间变异系数均小于5%。LAMP方法检测ASFV特异性良好,与猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及昆虫核酸无交叉反应。以ASFV Arm 07株制备各种临床模拟样品,检出阳性率达到17.31%。检测方法的建立,可为非洲猪瘟防控提供新的技术手段,有利于不同基因型毒株检测和出入境快速筛查。

白术多糖对岭南黄鸡生长性能、屠宰性能及免疫器官发育的影响

本研究旨在探索白术多糖(PAMK)对岭南黄鸡生长性能、屠宰性能及免疫器官发育的影响。选择240只健康的1日龄岭南黄鸡,随机分成4个组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加100(PAMK100组)、400(PAMK 400组)、800 mg/kg(PAMK800组)的白术多糖。试验期35 d。结果表明:1)与对照组相比,PAMK400组岭南黄鸡1~21日龄和1~35日龄的平均日采食量和料重比均显著降低(P<0.05),总增重和平均日增重均有所升高(P>0.05)。2)与对照组相比,PAMK100、PAMK400和PAMK800组岭南黄鸡35日龄的屠宰率、半净膛率和全净膛率均显著升高(P<0.05)。3)与对照组相比,PAMK100组岭南黄鸡21日龄的脾脏指数显著降低(P<0.05),PAMK100和PAMK400组岭南黄鸡21日龄的法氏囊指数显著升高(P<0.05)。4)与对照组相比,PAMK 400组岭南黄鸡肝脏双核细胞数量增多,各种类型细胞形态良好;胸腺中成熟胸腺细胞数量增多,皮髓分界明显;脾脏中淋巴细胞排列密集有序,形态良好;法氏囊中大淋巴滤泡数量增多,滤泡排列也更加紧密。由此可见,饲粮中添加400 mg/kg白术多糖可以提高岭南黄鸡的生长性能和屠宰性能,并促进免疫器官的生长发育。

马岗鹅TLR4基因的克隆及组织表达分析

为了解马岗鹅天然免疫受体TLR4基因特点及该基因在马岗鹅脏器的表达差异,研究扩增马岗鹅脾脏中的TLR4基因并测序,分析和预测TLR4基因核酸和蛋白特征,应用real-time PCR检测TLR4 mRNA在马岗鹅体内脏器的表达差异。结果显示:马岗鹅的TLR4基因大小为2 611 bp,编码氨基酸843个,分子质量为96.17 ku,理论等电点为7.55,含有30个氨基酸组成的信号肽,蛋白整体表现为疏水性;相似性分析和系统发育树分析表明,马岗鹅的TLR4基因与绿头鸭、原鸡等禽类动物有着较高的相似性;TLR4基因在马岗鹅的脾、法氏囊、胸腺、肺、肠等富含淋巴组织或细胞的器官中相对转录量较高。研究结果为进一步探讨马岗鹅的免疫机制奠定了基础。

广东省鹅细小病毒的分离及序列分析

从广东省鹅主要养殖区分离出2株鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV),分别命名为GDQY2017和GDYJ2017,纯化后测序分析。VP基因的系统发育分析结果表明,2株GPV单独形成一个分支,与疫苗株距离较远。选择压力分析结果表明,分离株的1位点有强烈的净化选择。氨基酸分析结果显示,与疫苗株相比,分离的GPV菌株含有22个不同的氨基酸残基,并且具有阳性选择的位点(Arg116Gln)。

欧盟进口马科动物法规解析及思考

欧盟在全球马产业居权威地位,当前中欧马产业合作交流蓬勃开展,跟踪研究欧盟相关法规新动向具有重要意义。本文一是对于欧盟关于输入马科动物的重要法规进行分析解读,概述了欧盟有关核心法规体系,着重解析新发布的欧盟委员会执行条例(EU)2018/659,提炼阐述该法规要点,归纳关于中国的准入规定,并梳理解读注册马匹临时进出欧盟领土的监管与检疫卫生要求。二是对于进一步完善我国有关赛马进出境检疫法规体系进行思考,包括论述赛马国际移动特殊性,分析进出境检疫监管与法规现状,探讨参考借鉴欧盟经验,建立赛马跨境移动一体化检疫与卫生要求法规。本文以期为提升我国进出境把关与服务成效以及促进现代马产业发展提供支持。

不同来源硒对小鼠淋巴结中离子谱的影响

[目的]探究不同来源的硒对小鼠淋巴结中离子谱的影响,进而探讨硒调节淋巴结免疫可能的作用途径。[方法]选择40只BALB/c小鼠,随机分为对照组、亚硒酸钠组、酵母硒组、海藻硒组4组,各组饲料中硒含量分别为0.03、0.23、0.23、0.23 mg/kg。试验第60天无菌采集各组小鼠淋巴结,运用电感耦合等离子体质谱法检测各组小鼠淋巴结中各元素水平。[结果]与对照组相比,亚硒酸钠、酵母硒、海藻硒都能不同程度影响小鼠淋巴结中常量元素、必需微量元素、有毒微量元素的含量,其中酵母硒和海藻硒在降低有毒微量元素沉积方面效果显著优于亚硒酸钠。[结论]有机硒在调节小鼠淋巴结中离子谱方面有着更好的效果。

鹅细小病毒基因组结构研究进展

鹅细小病毒(Goose Parvovirus Virus,GPV)是小鹅瘟疫病的病原体,基因全长组约5 kb,编码左右2个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),分别为LORF(Left ORF)和RORF(Right ORF)。LORF编码非结构蛋白(Nonstructural Protein,NS)NS1和NS2,RORF编码3种结构蛋白(Structural Protein)VP1、VP2和VP3。本文从病原学、基因和蛋白分子结构方面对GPV基因组结构特征的研究进展进行综述,并对GPV基因工程疫苗的开发进行展望,为我国防控GPV提供参考。

HSP27在热应激致岭南黄鸡雏鸡免疫器官损伤中的作用

为了从热休克蛋白27（HSP27）基因角度揭示热应激致雏鸡免疫器官形态损伤的机制,试验将120只8日龄岭南黄鸡随机分为对照组和热应激组,并构建雏鸡热应激模型,采用组织切片和透射电镜方法对比分析其免疫器官在热应激条件下的显微结构和超微结构变化,并用Real-time PCR方法检测HSP27基因在免疫器官中mRNA的表达差异。结果表明：同日龄阶段比较,热应激组免疫器官发育不良,胸腺细胞数量减少,Hassall氏小体严重退化,胸腺细胞凋亡及坏死数量增多,染色质发生聚集,细胞器肿胀变性;脾脏组织疏松,脾小结生发中心不明显,动脉周围淋巴鞘变薄,淋巴细胞结构疏松,胞核内异染色质减少,线粒体数量增多、结构异常;法氏囊中淋巴滤泡数量减少,皮质和髓质分界模糊,淋巴细胞染色质聚集,胞浆中粗面内质网上核糖体脱落,线粒体肿胀空泡化。法氏囊中HSP27 mRNA相对表达量逐渐降低,在热应激第21天时相对表达量显著高于第28,35天;脾脏中HSP27 mRNA相对表达量逐渐升高,在第35天时相对表达量显著高于第21,28天;胸腺中HSP27mRNA相对表达量与日龄无明显关联,在第28天时相对表达量最低且显著低于第21天和第35天。说明热应激会造成岭南黄鸡雏鸡免疫器官损伤,而HSP27在这一过程中扮演着重要角色。

荧光定量PCR检测鹅细小病毒体系的建立和应用

为解决在养殖过程中多种疫病混合感染造成鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)的临床及实验室诊断困难的问题,利用分离得到的GPV GDGZh1设计合成1对特异性引物GPV-rt PCRF/GPV-rt PCRR,建立了GPV SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并进行了临床样品及GPV在种鹅体内定植规律的检测.结果表明,该方法对质粒的检测灵敏度为3.5×10~2copies/μL,GPV具有组织广泛嗜性,种鹅的直肠、脾脏、心脏、肾脏和卵巢中病毒含量在攻毒后第5天最高,肝脏中病毒含量在攻毒后第9天最高,心脏和肾脏在攻毒后第17天检测不到病毒,直肠、肝脏、脾脏和卵巢在攻毒后第25天还能检测到病毒.这说明种鹅感染GPV后,病毒可以在其体内长期存在,并不断向外排毒,还能通过垂直传播的方式将病毒传递给雏鹅.