草果愈伤组织诱导及离体快繁初步研究

以草果(Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire)茎段和根基部为外植体,MS为基本培养基,探讨不同激素配比的培养基对草果不定芽的诱导、愈伤诱导增殖分化的影响。结果表明:①灭菌时长对草果的不定芽增殖分化有一定影响,茎段灭菌8min,根基部12min,增殖分化效果较好。选择外植体时,接种保留一层叶鞘的茎段要比接种裸露茎段增殖效果要好。②MS+6-BA 6mg/L+2,4-D 2mg/L的培养基对不定芽增殖分化效果最好,不定芽叶色鲜绿,苗健壮,整体感最佳。

胡椒不同时期体细胞胚中内源激素变化

为研究胡椒不同时期体细胞胚中内源激素变化,以‘热引1号’胡椒外种皮经培养获得的非胚性愈伤组织(Y)、胚性愈伤组织(P)、胚性愈伤组织与体细胞胚混合物(H)、体细胞胚(T)与体细胞胚增殖(Z)5个时期样品为试验材料,采用LC-MS/MS技术检测不同时期胚性培养物的内源激素种类与含量,以期找出内源激素影响胡椒体细胞胚发生的关键因素。结果表明:在胡椒体细胞胚发生过程中,吲哚-3-乙酸(IAA)含量在H时期最高,在P时期最低,在H、T与Z时期逐渐降低。吲哚-3-丁酸(IBA)含量在Y时期最高,在P时期最低,在H、T与Z时期基本不变。吲哚-3-甲酸(ICA)含量在H时期最高,且只存在含有愈伤组织的Y、P与H时期。异戊烯腺嘌呤(IP)含量在H时期最高,在P时期最低,在T与Z时期接近于零。顺式玉米素(cZ)含量在Y时期最高,其他时期都接近于零。茉莉酸甲酯(ME-JA)含量只存在Y时期和P时期,但Y时期含量高于P时期。茉莉酸(JA)含量在Z时期最高,在P时期最低,在H、T与Z时期逐渐升高。水杨酸(SA)含量在H时期最高,在Y时期最低,且H、T与Z时期先降后升。脱落酸(ABA)含量在H时期最高,在P时期最低,在T与Z时期基本不变。赤霉素类(GAS)主要存在于Y与P时期,H、T与Z时期含量很低。由此可见,IAA、SA与ABA可能与体细胞胚发生的相关性强,而cZ、MEJA与GAS可能与愈伤组织产生相关性强。

斑兰叶不同愈伤组织芽分化与抗氧化酶类关系

为进一步完善建立斑兰叶的组织培养技术,以斑兰叶的地上茎、嫩叶及老茎上的侧芽作为外植体,研究不同愈伤组织芽分化与抗氧化酶类关系,以期为提高斑兰叶愈伤组织的芽分化率提供参考。结果表明:在含0.03 mg/L TDZ与0.5 mg/L 6-BA的培养基上,只有侧芽能够诱导出黄绿色愈伤组织。侧芽基部愈伤组织先增殖分化为黄绿色愈伤组织,在添加KT与6-BA的培养基上继续培养为黄褐色愈伤组织,最终由黄褐色愈伤组织分化出芽,为芽分化愈伤组织;在只含KT的培养基上,黄绿色愈伤组织培养成褐白色愈伤组织,继续培养为黑褐色愈伤组织,无芽分化;5种愈伤组织的过氧化氢酶(CAT)活性相差不大,与超氧化物歧化酶(SOD)活性普遍较低,其中褐白色愈伤组织的CAT活性最低,为91.43 U/g;SOD活性最高,为513.05 U/g;但其无法分化出丛生芽,黄绿色愈伤过氧化物酶(POD)活性最高(6237.17 U/g),黄褐色愈伤POD活性最低(2144.94 U/g),黄褐色愈伤组织在分化成芽分化愈伤组织后POD活性上升。

胡椒不同时期体细胞胚中糖含量及相关酶活变化

为研究胡椒不同时期体细胞胚中糖类物质、生物大分子及相关酶活性变化。以‘热引1号’胡椒外种皮经培养获得的非胚性愈伤组织(Y)、胚性愈伤组织(P>、胚性愈伤组织与体细胞胚混合物(H)、体细胞胚(T)与体细胞胚增殖(Z)5个时期样品为试验材料,采用GC-MS/MS技术与分光光度技术检测不同时期胚性培养物的糖类物质、生物大分子及相关酶活性变化,以期找出糖代谢影响胡椒体细胞胚发生的关键因素。结果表明:在胡椒体细胞胚发生过程中,在胡椒胚性愈伤组织时期(P)的蔗糖合酶(SS-I)活性、淀粉酶活性、果糖与葡萄糖含量最高,但非胚性愈伤组织时期(Y)的酸性转化酶(S-AI)活性要高于P时期。而在胡椒体细胞胚发生的愈伤组织与体细胞胚混合物(H)、体细胞胚(T)与体细胞胚增殖(Z)3个时期,蔗糖、可溶性蛋白与肌醇的含量都高于P时期,且都呈上升趋势。由此可见,果糖和葡萄糖可能在胡椒体细胞胚发生早期提供能量,而蔗糖、可溶性蛋白与肌醇可能在胡椒体细胞胚发生后期提供物质基础。