GmHs1^(pro-1)多样性分析及蛋白互作预测

GmHs1^(pro-1)是Hs1^(pro-1)同源的抗线虫候选基因,通过使用不同的大豆品种克隆GmHs1^(pro-1)CDS区研究了其多样性、建立了进化树,并利用在线数据库分析预测了与其互作的蛋白。结果表明:在24种大豆品种中均克隆到长度约1 400bp的GmHs1^(pro-1)CDS区,同已有数据合并后该区段共有20个突变点,5个新突变点中的3个引起了编码氨基酸的变化。GmHs1^(pro-1)可能主要同glyma18g04770编码的蛋白互作,该蛋白受syringolide诱导。GmHs1^(pro-1)定位在胞浆内,具有1个吲哚化合物双加氧酶类似结构域,可能参与吲哚相关通路影响线虫发育。

大豆肌醇加氧酶基因响应线虫胁迫的表达分析

肌醇加氧酶通常与植物细胞壁的合成以及诱导合胞体发育相关。为确定大豆胞囊线虫侵染大豆根部后,肌醇加氧酶基因表达水平的变化,以感病品种辽豆15和抗病品种灰皮支黑豆、哈尔滨小黑豆和小粒黑豆为试验材料,在人工接种大豆胞囊线虫3号生理小种后,利用实时荧光定量PCR检测肌醇加氧酶家族基因表达量。结果表明,抗病品种中GmMIOX2基因均在接种后5d表达量达到最大,而感病品种变化并不明显。GmMIOX4基因在抗病品种灰皮支黑豆、哈尔滨小黑豆和小粒黑豆中表达量分别在接种后5d,20d和10d显著高于感病品种的表达量。表明GmMIOX2和GmMIOX4基因与大豆胞囊线虫发育调控相关。通过扩增Gm MIOX基因的CDS序列,构建GFP融合表达载体p CAMBIA1303-MIOX2和p CAMBIA1303-MIOX4,农杆菌浸润法注射本氏烟叶片进行亚细胞定位观察,GmMIOX2蛋白主要分布在细胞膜,GmMIOX4蛋白主要分布在细胞质和细胞膜。生物信息学分析表明,GmMIOX2和GmMIOX4蛋白结构域主要由α螺旋构成,蛋白序列进化分析发现GmMIOX2和GmMIOX4分别与拟南芥At MIOX1、At MIOX4亲缘性较近。

抗性候选基因GmMIOX4的表达分析、克隆及过表达载体的构建

将两个不同抗性大豆品种灰皮支黑豆和辽豆15人工接种大豆胞囊线虫3号生理小种(SCN3),利用实时荧光定量PCR技术,对SCN3侵染后的早期和线虫完成一个整个生活史时的Gm MIOX4基因相对表达量变化进行分析。结果表明:在SCN3侵染下,辽豆15根内的Gm MIOX4基因在25 dpi时,相对表达量升高,而灰皮支黑豆根内的Gm MIOX4基因在10 dpi时被诱导表达,相对表达量达到最高值,表明该基因在此时期发挥一定作用。线虫侵入大豆根内10 d是其通过合胞体吸取寄主营养从而维持正常生长发育的时期,在10 dpi该基因被诱导表达,使其合胞体结构发生改变,从而抑制线虫发育,最终导致死亡或使灰皮支黑豆根内成虫数量减少,起到抗病效果。随后以抗性品种灰皮支黑豆根系总RNA为模板,利用RT-PCR技术获得了939 bp的Gm MIOX4基因的CDS序列,克隆得到质粒p GEM-MIOX4,再以得到的Gm MIOX4序列为材料构建过表达载体p CAM-MIOX4,为进一步研究Gm MIOX4基因功能奠定了基础。

液体活检在肿瘤诊疗全程管理中的现状及展望

有效的检测方法能够在早期发现恶性肿瘤迹象,提高患者生存率。液体活检,作为一项新兴的无创技术,通过检测体液中的生物标志物,为恶性肿瘤提供全方位的信息,从而指导更加精准的治疗。液体活检的主要检测指标包括循环肿瘤DNA、循环肿瘤细胞、微小RNA和外泌体等。通过使用不同的技术手段检测这些生物标志物,可以为不同发展阶段的肿瘤提供治疗方向,延长患者的生存期,提高生活质量。相较于传统组织检测,液体活检作为一种非侵入式的手段,具有无创性,克服肿瘤异质性及可以实时监测肿瘤情况等优势。随着技术的不断发展,液体活检在早期、中期和晚期恶性肿瘤治疗中都具有重要的临床指导价值,包括指导肿瘤治疗、研究抗药性机制、预测患者预后、监测复发以及协助早期筛查和诊断。本文将综述当前液体活检技术的发展状况,深入分析液体活检所使用的生物标志物,探讨其在肿瘤诊疗全程管理中的研究进展。