非同位素标记pAW101探针作人流胚胎组织的亲权鉴定

DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)技术的经典方法是用酚抽提DNA,同位素标记探针。本文研究选用N_aCI盐析分离DNA的技术,结合地高辛配基标记pAW101探针方法,作了11例无争议的胚胎组织的亲权鉴定,同时测定4种同Ⅰ酶型,在不违反孟德尔遗规律的前提下,按Essen-Moller公式计算父权概率(均>99.73％),达到确定亲生关系的标准。本方法简单、易于掌握,结果稳定可靠,适宜于一般实验室开展工作。

广东汉族人基因组D17S5位点遗传多态性

本文介绍用二步法PCR检测广东汉族人基因组D17S5 VNTR(数量可变的串联重复序列)遗传多态性的结果。共发现有12个等位基因。这些等位基因片段的大小在100bp至870bp之间(每一重复单位为70bp)，等位基因的频率分布在0．00．5至0．19之间。

重组DNA技术斑点杂交法检测生物检材的性别

介绍了用斑点杂交技术,以Y染色体特异的3.5kb DNA片段为探针检测人血痕、人的组织碎块、牙齿、头发、羊水等的性别。样本经制备相当于0.1ul新鲜血的血痕,0.05 mg的组织块,带毛囊的头发1根,1/20颗牙齿牙髓质和2ul的羊水经本法检查,均能确定其性别。组织块经用福尔马林固定1周后,同样可以判断其性别,血痕性别的盲测结果全部正确。同时,对9种常见动物的血痕亦作了检查,均未显示阳性反应。本法准确灵敏,操作简单,值得进一步推广。

PCR技术的原理及方法

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是近年来分子生物学领域迅速发展起来并得到广泛应用的新技术。近10余年来,由于基因工程技术的建立和发展使核酸的分子生物学分析工作飞跃发展.由于核酸序列分析技术的进步,目前在分子生物学领域里的中心问题之一是鉴定核酸片段的特征。因为,传统的基因工程技术的检测过程非常繁琐,不仅要有相当量的样品和较长的时间周期,而且要求训练操作者有熟练的技术去保证检测结果的敏感性和准确性。在医学和遗传学研究中,要确定核苷酸链中的点突变,小片段DNA的缺失或插入,在传统的Southern核酸杂交结果中是不容易准确地反映出来的。

人癌胚抗原-重组痘苗病毒的构建和制备

痘苗病毒的基因组庞大，结构复杂而特殊，不可能将外源基因直接插入它的基因组，必须利用一种特殊的痘苗病毒质粒，才能构建成功重组痘苗病毒．在分析了痘苗病毒质粒ｐＪ１２０〔含有我国天花疫苗－痘苗病毒天坛株７６１的启动子和胸苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ，简称ＴＫ基因），及含有人癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ，简称ＣＥＡ）ｃＤＮＡ全序列的质粒ｐ９１０２３Ｂ－ｃｅａ－１７结构的基础上，设计出三步法构建了重组疫苗病毒质粒ｐＪ－ＣＥＡ．经酶切及ＰＣＲ鉴定ｐＪ－ＣＥＡ中ＣＥＡｃＤ－ＮＡ的存在，进一步用同源重组方法构建了表达人ＣＥＡ的重组痘苗病毒，并以人体成纤维细胞作为宿主细胞，对ＣＥＡ－重组痘苗病毒进行了大量培养．再次证实痘苗病毒是良好的真核表达载体，可以高效而准确地表达细胞膜糖蛋白ＣＥＡ．

CEA-重组痘苗病毒预防CEA阳性肿瘤的动物实验研究

目的：探讨 Ｃ Ｅ Ａ重组痘苗病毒对 Ｃ Ｅ Ａ 阳性肿瘤的预防作用。方法：构建 Ｃ Ｅ Ａ 阳性小鼠 Ｈｅｐａ 肝癌细胞模型（ Ｈｅｐａ Ｃ Ｅ Ａ＋ ） 。将实验鼠分为４ 组，先分别皮下接种痘苗病毒（ 野生型 Ｗ Ｖ Ｖ 或重组型 Ｃ Ｅ Ａｒ Ｖ）３ 次，再分别颈背部皮下注射 Ｃ Ｅ Ａ 阳性或 Ｃ Ｅ Ａ 阴性同源鼠 Ｈｅｐａ 肝癌细胞。观察动物反应并在接种癌细胞后每周测量一次肿瘤大小。结果：３ 个对照组各鼠颈背部皮下均可见有瘤块形成，并且以相近速率快速增长，３ 组之间无统计学上的显著差异，而接种 Ｃ Ｅ Ａｒ Ｖ／ Ｈｅｐａ Ｃ Ｅ Ａ＋ 组各鼠在观察期限内均无肿瘤形成。整个实验过程中实验鼠未表现有毒副反应。结论： Ｃ Ｅ Ａｒ Ｖ 通过诱导机体的免疫系统产生 Ｃ Ｅ Ａ 特异性的细胞和体液免疫应答反应，能有效预防小鼠移植性 Ｃ Ｅ Ａ 阳性肿瘤的形成。

PCR-SSP技术对广东汉族人HLA-DR基因分型

探索具有高分辨率、高特异性和简捷快速的方法对ＨＬＡ－ＤＲ基因分型，为临床器官移植配型和疾病相关性分析提供实用的方法和基础资料．利用ＤＲ１～ＤＲｗ１８序列特异性的１９组引物及１对内参照引物进行ＰＣＲ扩增即ＰＣＲ－ＳＳＰ对ＨＬＡ－ＤＲ进行基因分型，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外光下观察分型结果．每个被检个体的ＤＲ型别可由特异引物扩增出现的电泳谱带直接判断．双盲检测２２例的结果１００％正确．在１０２例中国广东地区汉族人中，ＤＲ９和ＤＲ２的基因频率最高，分别为０．２２０５和０．１９１２，ＤＲ１０为最低（０．００９８）．与用ＰＣＲ－ＳＳＯ方法分型获得的结果比较，基因型别分布基本一致，但一些等位基因的频率有差异，表明ＨＬＡ－ＤＲ基因频率的分布在不同地区、不同种族的人群间存在着差异．ＰＣＲ－ＳＳＰ法分辨率和特异性虽不及ＰＣＲ－ＳＳＯ法但比血清学方法精细，分型的全过程只需２～４ｈ能满足临床器官移植配型的要求．基因频率调查结果为器官移植配型和疾病相关性分析提供了基础资料．

CEA-重组痘苗病毒对CEA阳性肿瘤疗效的实验研究

目的:为探讨CEA-重组痘苗病毒对CEA阳性肿瘤的治疗作用.方法:构建CEA阳性小鼠Hepa肝癌细胞模型(Hepa-CEA);对4组实验鼠进行颈背部皮下注射CEA阳性或CEA阴性同源鼠Hepa肝癌细胞,再接种痘苗病毒(野生型W-VV或重组型CEA-rV)3次:观察动物反应,并在接种癌细胞后每周测量一次皮下肿瘤大小.结果:4组实验鼠颈背部皮下均可见瘤块形成,但3个对照组肿瘤生长迅速,组间差异无统计学意义(P>0.05),而接种Hepa-CEA/CEA-rV组小鼠皮下肿瘤生长缓慢,瘤块较小,与3个对照组比较有统计学上的显著差异(P<0.01),整个实验过程中接种鼠未表现有毒副反应,结论:CEA-rV可能通过诱导机体免疫系统产生CEA特异性的细胞或体液免疫应答反应,对CEA阳性肿瘤的生长明显产生抑制作用.

广东汉族人载脂蛋白B(apoB)基因3′端VNTR的遗传多态性研究

随机抽提100例无血缘关系的广东汉族人的血痕DNA,用PCR法扩增载脂蛋白B(apolipoprotein B apoB)基因3′端的VNTR,共检出19个等位基因,片段大小分布在510～1200bp之间,等位基因频率为0.005—0.195,杂合度为88.80％,父权排除率为0.6395,其等位基因数目及频率分布均与英国白种人的有差异。家系分析表明扩增片段按孟德尔方式遗传。本实验证实了apoB基因3′端VNTR的高度多态性和高度杂合性。

系统性红斑狼疮与HLA-DQA1基因的相关性

为了探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）易感基因，用ＰＣＲ－ＰＡＧＥ法结合银染色对４１例无亲缘关系广东籍汉人ＳＬＥ患者进行ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因分型。结果显示检出的６种ＤＱＡ１等位基因中，ＳＬＥ患者组ＤＱＡ１ｘ０１０１（３９．０２％，ＲＲ＝４．０３９，Ｐ＜０．０１，ＥＦ＝０．２９３）显著高于健康人组，对ＳＬＥ有易感倾向，而ＤＱＡ１＊０１０２基因（１．２２％，ＲＲ＝０．０８３，Ｐ＜０．００５，ＰＦ＝０．１１８）则显著下降，对ＳＬＥ可能有抵抗作用。ＤＱＡ１＊０１０１／０１０１和＊０１０１／０４０１两种基因型在ＳＬＥ组显著增高，而ＤＱＡ１＊０１０２／０３０１显著减少；ＤＱＡ１＊０１０１纯合子患者出现ＡＣＬ的阳性率较高，提示两者关系值得进一步探讨。

痘苗病毒介导人癌胚抗原的免疫原性实验研究

痘苗病毒介导人癌胚抗原的免疫原性实验研究①杨洁江悦华②罗超权杨太成②伍新尧王晓怀③杨英浩（中山医科大学生化教研室，广州５１００８９）①本课题为广东省卫生厅“九五”五个一工程资助项目②广州军区总医院医学实验科，广州５１００６０③广州军区总医院放射肿瘤科...

表达人癌胚抗原重组痘苗病毒的构建

用痘苗病毒作载体，成功构建了高效表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的ＣＥＡ－重组痘苗病毒，用１４３ＴＫ－细胞作为宿主细胞，表达的蛋白质只在细胞膜上能检测到，而胞质内和细胞上清液中均未能检测到，可见所表达的蛋白质保持了其原有特性，再次证实痘苗病毒是真核表达的有效载体。本结果为进一步研究ＣＥＡ－重组痘苗病毒能否激活机体的免疫系统杀伤表达ＣＥＡ的肿瘤提供了物质基础。

CEA重组痘苗病毒对CEA阳性肿瘤的防治研究

肿瘤的免疫治疗是治疗肿瘤的新方法 ,它通过增强肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的免疫原性 ,诱导机体产生肿瘤特异性的免疫应答反应而杀伤肿瘤细胞。本系列研究采用同源重组方法构建了表达人癌胚抗原 (carcinoembryonicantigen ,CEA)的重组痘苗病毒 ,经动物实验证明了其具有强免疫原性、安全性和防治CEA阳性肿瘤的可靠性。

基因工程技术DNA多态性分析及应用

自１９８８年以来，本课题组应用基因工程技术对ＤＮＡ多态性进行分析，取得良好效果。这一技术避开了基因产物，直接研究遗传物质本身──ＤＮＡ的多态性，具有准确、分辨力高、不受基因表达过程影响因素干扰等许多优越性。在医学遗传学某些遗传病的诊断、基因连锁分析、疾病相关性分析、人类学、自身免疫性疾病、人类免疫调控、亲子鉴定和法医学个体识别等方面均具有广阔的应用前景。这些技术的实际应用已取得了明显的社会效益。

序列特异性引物-聚合酶链反应法用于广东汉族人群HLA DQA1等位基因分析

目的：研究广东汉族人群中人类白细胞抗原（ＨＬＡ）ＤＱＡ１等位基因频率分布，为ＨＬＡＤＱＡ１相关疾病的研究及人类学的研究提供基础资料。方法：用序列特异性引物聚合酶链反应（ＳＳＰＰＣＲ）法对广东汉族人群作ＨＬＡＤＱＡ１等位基因分型，根据出现扩增产物所用的序列特异性引物，直接分析判断受检查者的基因型别。结果：１４６例广东汉族健康无血缘关系个体中共检出１０个等位基因，以ＤＱＡ１０３０１的频率（０．２９１）最高，基因型的观察值与期望值相比，符合ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ平衡，纯合基因型的观察值与期望值相比，Ｐ＞０．９５，家系调查及重复性试验显示结果可靠。结论：广东汉族ＨＬＡＤＱＡ１基因与其他１０组华人群体的资料比较，总体检验有显著差异，但均以ＤＱＡ１０３０１的频率最高，显示华人的遗传系统既有共性亦有各自的特点，南方汉族人群体间或与南方一些少数民族比较均有显著差异，显示南方华人群体遗传背景的复杂性。

人DNA指纹的研究及其应用

1988年,作者根据DNA指纹是人基因组中重复序列的RFLP的原理和人与鼠的髓鞘碱性蛋白(MBP)基因同源序列高于90％的事实,选用鼠MBP CDNA3’-端的与人基因组中该类重复序列几乎完全同源的0.81kb片段作探针,检测用Hae Ⅲ酶解的人DNA限制性片段(RF),在人群中可检出22条谱带,受检的无血缘关系的个体之间没有两个人的谱带是完全相同的,显示这一方法的高度个体特异性。

用Y染色体特异性探针作斑点印迹法检测人血痕的性别

血痕的性别检查是法医学检案中一个重要内容。过去常用的方法是检查血痕里残存有核细胞中的x和y小体，也有试图测定血痕中性激素(主要是睾丸酮)含量的办法来达到鉴定性别的目的。但都因方法比较繁琐且结果不大可靠，或男女性别判断的界线不够清楚，或受澎响的因素太多而不能令人满意。

pAW101-EcoRⅠ限制性片段在广东人群中的分布及其在法医学上的应用

用pAW1015kb的片段为探什,检测广东地区106例无血缘关系居民的EcoRI酶切限制性片段(RF)的分布情况。共发现长度各异的65条RF,每人只具有其中的1～2条。统计学分析证明,这些RF的分布符合哈一温氏平衡。无血缘关系的两个个体间具有完全相同的RF图谱的机会为0.00048(相当于l/2080)。家系调查结果表明,这些RF符合孟德尔遗传规律。本文是应用作者推导出来的计算RF大小的数学模式。此法在作亲权鉴定时,父权排除率可达0.914,相当于目前国内所用的血型测定法(包括HLA-A,-B抗原测定)所达到的总和,说明此方法在法医学个人识别和亲权鉴定中具有广阔的应用前景。

用计算机程序进行Hardy-Weinberg氏平衡吻合度测验的方法

本文给出用计算机程序进行Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ氏平衡吻合度的ｘ２检验的方法和有关公式，同时给出在ｘ２值和自由度ｎ给定的情况下，对概率Ｐ（ｘ２，ｎ）进行精确计算的公式，这些方法和公式都已编成计算机程序，使得在进行Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ氏平衡吻合度测验时，能够对数据进行自动化的统计分析，大大地提高了工作效率。