tsRNA在急性心肌梗死早期诊断中的价值

目的 探讨转运RNA衍生的小RNA(transfer RNA-derived small RNA,tsRNA)在急性心肌梗死(AMI)早期诊断中的价值及其作为AMI诊断标志物的潜能。方法 将年龄及体质量匹配的雄性C57小鼠(8~10周龄)随机分为MI组及对照组(Sham组),每组4只。两组均于建模24 h后提取左室心肌组织RNA,经去修饰预处理,连接人工化接头后扩增,筛选包含15~40个核苷酸的小RNA扩增产物,构建文库并测序,将测序结果与GtRNAdb数据库成熟的t RNA和tRNA前体序列比对,获得在AMI前后心肌中差异表达的tsRNA谱。采用生物信息学分析同一密码子对应的tRNA在AMI前后剪切方式的改变。依据AMI前后tsRNA表达谱差异,获得在AMI后特异性高丰度表达的tsRNA,并在AMI小鼠心肌和血浆中验证,探讨tsRNA作为AMI诊断标志物的潜能。结果 tsRNA表达谱在组内有较好的重复性,组间差异较大。发生AMI后,Asn-GTT、Glu-TTC、Gly-ACC、Gly-GCC、His-GTG、Ile-AAT、Ile-GAT、Pro-TGG、Ser-AGA和Trp-CCA在心肌中剪切方式发生改变,生成有明显差异的tsRNA表达谱。与Sham组相比,MI组有268个tsRNA表达上调,1 228个tsRNA表达下调,且有64个特异性tsRNA。AMI建模第1天,小鼠tRF-Gly-CCC-2-31、tiRNA-Val-CAC-1-32、tiRNA-ValAAC-2-32、tiRNA-Glu-TTC-2-32和tiRNA-Lys-TTT-1-34在心肌中特异性表达,其中tiRNA-Val-AAC-2-32和tiRNA-LysTTT-1-34在AMI小鼠血浆中特异性高丰度表达,并随AMI持续时间动态变化。结论 tsRNA表达谱在AMI前后差异显著,其中在小鼠心肌和血浆中特异性表达的tiRNA-Val-AAC-2-32和tiRNA-Lys-TTT-1-34有AMI诊断潜能,可能在AMI修复过程中发挥重要作用。

中性粒细胞HDC/histamine信号:抗血栓治疗的新靶点

血栓及其并发症是一种危害健康的临床病症。中性粒细胞胞外诱捕网(NET)是由中性粒细胞释放、解聚的染色质形成的细胞外的纤维网络,通过激活血小板、加速凝血从而促进血栓形成影响疾病转归。组氨酸脱羧酶(HDC)是催化组胺(histamine)生成的关键酶,在中性粒细胞,尤其是骨髓内不成熟CD11b+髓系细胞内有高水平表达。组胺信号参与过敏反应、胃酸分泌、炎症、免疫反应和肿瘤发生等多种生理和病理生理事件。组胺及其下游相关信号对中性粒细胞极化、NET形成和血栓发生发展的调控,可能成为血栓性疾病靶向药物研发的重要参考。文章主要对表达HDC的中性粒细胞在血栓形成和发生发展的作用进行综述。

乳腺癌的风险评估及治疗

乳腺癌是一个与日俱增的公共健康问题。近年来实质性的治疗乳腺癌的方法已有一定进展,但是女性逐渐升高的患病风险以及治疗的困难性说明现有的乳腺癌的风险评估方法已经不太适用。引进新的途径对近期数据进行风险预测,并用于治疗已是形势所趋。综述了乳腺癌的风险预测模型、风险评估指征以及乳腺癌的治疗方法。

TXNIP通过诱导氧化应激促进心肌纤维化的发生

目的:探讨硫氧还蛋白-互作蛋白(TXNIP)在心肌纤维化发生过程中的表达变化及其潜在调节机制。方法:通过皮下泵入血管紧张素(Ang)Ⅱ建立心肌纤维化小鼠模型,Western blot检测TXNIP在心肌纤维化小鼠和假手术组小鼠心肌组织中的表达差异。分离和培养新生大鼠的心肌成纤维细胞(CFs),外源性使用人重组Ang Ⅱ和(或)losartan处理CFs,用Westernblot和细胞免疫荧光检测TXNIP表达的变化。构建TXNIP的小干扰RNA(si RNA),利用细胞划痕实验、结晶紫染色、Western blot以及细胞活性氧簇探针等多种方法检测TXNIP对Ang Ⅱ刺激状态下CFs迁移、纤维激活相关蛋白[Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、波形蛋白(vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]表达、氧化应激及MAPK信号通路的影响。结果:TXNIP在心肌纤维化小鼠的心肌组织中表达上调。Ang Ⅱ可浓度和时间依赖性地促进CFs中TXNIP表达上调,这种效应可以被losartan完全抵消。敲减TXNIP可以显著抑制Ang Ⅱ诱导的CFs迁移及ColⅠ、ColⅢ、vimentin和α-SMA表达升高。此外,敲减TXNIP可以抑制Ang Ⅱ诱导的细胞氧化应激和MAPK信号通路激活。结论:TXNIP可能通过MAPK信号通路诱导CFs发生氧化应激,进而促进心肌纤维化的发生;TXNIP可能成为治疗心肌纤维化的新靶点。

IL-1β通过抑制AKT下调人脐静脉内皮细胞eNOS Ser1177磷酸化水平

目的:探讨白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)能否调控人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)第1177位丝氨酸(Ser1177)磷酸化水平及其可能的机制。方法:将HUVECs随机分为正常对照组、肿瘤坏死因子α(tumor necro⁃sis factor-α,TNF-α)处理组、IL-1β处理组、IL-6处理组、单纯SC79[蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)特异性激动剂]处理组和SC79+IL-1β处理组。用Western blot方法检测HUVECs中eNOS、p-eNOS-Ser1177、AKT和p-AKT-Ser473的蛋白水平。采用化学比色法检测HUVECs培养液中一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。结果:与正常对照组相比,TNF-α和IL-6处理对HUVECs中p-eNOS-Ser1177的蛋白水平均无显著影响(P>0.05),而IL-1β处理则显著降低细胞中p-eNOS-Ser1177蛋白水平和培养液中NO含量(P<0.05),同时伴有p-AKT-Ser473的下调(P<0.05)。IL-1β对细胞中p-eNOS-Ser1177蛋白水平和培养液中NO含量的调节能被SC79所阻断(P<0.05)。结论:IL-1β可下调HUVECs中p-eNOS-Ser1177蛋白水平进而影响eNOS活性,这种效应可能涉及到AKT/eNOS通路。

单核苷酸多态rs386585341影响miR-499a-3p下游调控免疫和血管新生的网络

目的发生在microRNA基因前体或成熟序列或靶基因3′非翻译区结合位点的单核苷酸多态性(SNP)可能通过影响microRNA对靶基因的识别调控过程,参与许多疾病如肿瘤、神经系统疾病、肌肥大、心血管疾病等的发生发展过程。本研究采用生物信息学技术分析位于miR-499a-3p种子序列第4位的SNP rs386585341 A>G可能影响生物学过程及信号通路。方法应用RNAfold数据库预测rs386585341 A>G是否影响pre-miR-499a的二级结构,分别构建pre-miR-499a-A和pre-miR-499a-G过表达质粒检测rs386585341 A>G是否影响成熟miR-499a的表达,利用基因表达谱芯片和生物信息学分析rs386585341 A>G对miR-499a-3p功能的影响,取差异基因表达谱和TargetScan靶基因交集,分析rs386585341不同等位点miR-499a-3p-A和miR-499a-3p-G靶基因差异。结果rs386585341 A>G不影响pre-miR-499a的二级结构,也不影响成熟miR-499a-5p和miR-499a-3p的表达水平,但影响成熟miR-499a-3p调控的靶基因网络。取差异表达基因(DEG)谱行GO和pathway分析,发现miR-499a-3p-A和miR-499a-3p-G展示不同的生物学功能,miR-499a-3p-A的下游基因网络主要富集在免疫调控方面,而miR-499a-3p-G的下游基因网络主要富集在血管新生方面;下调表达基因和TargetScan靶基因交集分析得到4个miR-499a-3p-A直接靶基因(Spry2、Pcnx、Ndufa5及Tcf7l2),而未能得到miR-499a-3p-G直接靶基因,提示miR-499a-3p种子区域第4号位由A转换成G后,调控靶基因方式可能由促进靶基因mRNA的降解转换为仅抑制靶基因的蛋白翻译。结论rs386585341 A>G可能通过影响miR-499a-3p下游调控网络在免疫和血管新生方面发挥功能。

白细胞介素-6通过AMPK/SIRT1通路下调eNOS Thr495/497

该文探讨了白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cells,BAECs)的内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的影响及其可能的发生机制。在原代BAECs细胞培养基础上,选取IL-6不同浓度(10、20、40 ng/mL)、不同时间(0.5、1、2 h)处理BAECs;AMPKα1 siRNA预处理BAECs后加入IL-6共处理2 h。用Western blot方法检测BAECs细胞中eNOS、Thr497、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达情况,用一氧化氮(NO)检测试剂盒检测BAECs细胞中NO含量。结果显示,与正常对照组相比,IL-6显著降低Thr497的表达(P<0.05),同时伴有p-AMPK、SIRT1上调(P<0.05),NO含量升高。而IL-6对Thr497的下调作用被AMPKα1 siRNA和EX-527阻断(P<0.05)。总之,IL-6可下调BAECs中Thr497表达进而影响eNOS活性,其作用机制可能涉及到AMPK/SIRT1通路的参与。