一种新型血清蛋白电泳缓冲液的替代研究

目的探究可替代巴比妥缓冲液的新型血清蛋白电泳缓冲液。方法通过不同电压、电泳时间梯度的电泳,筛选新型电泳缓冲液的最佳试验条件;比较新型电泳缓冲液与巴比妥缓冲液分离血清蛋白的图谱效果、蛋白区带分散程度及各组蛋白质相对含量。结果新型电泳缓冲液在电压为70V、电泳时间为50min时,电泳图谱稳定且重复性更好,其图谱出现5条区带的比率比巴比妥缓冲液高23.14%、蛋白区带分散程度适中。新型缓冲液膜条扩展的总距离、最远区带与最近区带的距离均短于巴比妥缓冲液,差异有统计学意义(P<0.05)。新型缓冲液与巴比妥缓冲液点样区距第一条带远端的距离比较差异无统计学意义。两种缓冲液分离的各组蛋白相对含量比较差异无统计学意义。结论新型电泳缓冲液分离血清蛋白图谱区带清晰、重复性好、结果稳定,电泳图谱效果、蛋白区带分散程度优于巴比妥缓冲液,且在电压为70V、电泳时间为50min试验条件下,与巴比妥缓冲液分离的各种蛋白含量差异不显著,可替代其用于血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳实验中。

血清蛋白醋酸纤维膜电泳缓冲液的筛选

旨在筛选适合血清蛋白醋酸纤维膜电泳的最佳电泳缓冲液。方法:选择6种常见电泳缓冲液,采用醋酸纤维膜为支持物分离家兔血清蛋白,确定其电泳最佳电压;在相同实验条件下,观察使用频次和放置一定时间对各种缓冲液稳定性的影响,并对比图谱分离蛋白质区带的数量及清晰度,定量分析蛋白质区带膜条扩展的总距离、点样区距第一条带远端、最远区带与最近区带的距离。结果表明在电压条件为70 V时,各种缓冲液电泳分离血清蛋白均能达到较好水平,其中出现5条清晰区带的概率,Tris-磷酸盐缓冲液为66.66%,巴比妥缓冲液为65.22%、Tris-盐酸缓冲液为8.33%;各缓冲液在使用5次以内、室温条件放置6个月后均对缓冲液稳定性影响不大;图谱区带数量和清晰度、区带分散程度定量分析表明Tris-磷酸、巴比妥缓冲液效果最好,Tris-盐酸缓冲液次之,磷酸盐、硼酸盐缓冲液较差。结论:6种缓冲溶液中,以图谱分离5条蛋白质区带为准,Tris-磷酸盐缓冲液分离血清蛋白图谱区带清晰,与巴比妥缓冲液效果相当。