FOXP3和GITR/GITRL mRNA在类风湿关节炎和结直肠癌患者外周血中的表达研究

探讨FOXP3和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)及其配体(GITRL)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和结直肠癌患者中的表达变化及GITR与FOXP3表达的相关性。运用实时荧光定量RT-PCR方法,检测55例健康体检者、55例RA患者、50例结直肠癌患者的外周血单个核细胞(peripheral blood monocytes,PBMC)中FOXP3、GITR和GITRL的基因表达水平。结果:在RA患者组FOXP3、GITR和GITRL均显著低于健康对照组(P<0.01),经过转换后的mRNA表达水平分别为对照组的18.5%、7.5%和1.7%,GITR和FOXP3的表达水平呈显著正相关(r=0.86,P<0.01);而在结直肠癌患者组,FOXP3的表达水平显著高于对照组(P<0.01),表达水平为对照组的173.7%,GITR和GITRL的表达水平显著低于对照组(P<0.01),mRNA表达水平为对照组的45.7%和50.1%,GITR和FOXP3的表达有一定的相关性(P=0.046)。RA和结直肠癌患者均存在调节性T细胞(regulatory Tcells,Treg)异常。在RA中,GITR表达趋势与FOXP3一致,均反映Treg数量或功能降低。但在结直肠癌患者中,两者表达不尽一致。

流式细胞术检测RA患者外周血CD4^+CD25^+FOXP3^+ Treg细胞及其GITR表达

目的研究FOXP3和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)在类风湿关节炎(RA)患者外周血Treg细胞的表达并探讨其临床意义。方法用五色流式细胞术(FCM)检测40例健康体检者、61例RA患者外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(Treg)及其中GITR的表达情况。结果RA患者组FOXP3的平均荧光强度(MFI)低于健康对照组(P<0.05),CD4+CD25+FOXP3+Treg占CD4+T细胞的比例、CD4+CD25+FOXP3+Treg中GITR的表达率、GITR MFI和健康对照组相比无统计学差异(P>0.05);活动期RA患者的FOXP3 MFI和GITR MFI均显著低于非活动期组(P<0.01和P=0.032),CD4+CD25+FOXP3+Treg占CD4+T细胞中的比例、CD4+CD25+FOXP3+Treg中GITR的表达率与非活动期组相比无统计学差异(P>0.05)。结论RA患者的FOXP3表达低下,活动期组的FOXP3表达低于非活动期组,为其作为RA病情变化的判断指标提供进一步的证据。

MG-7、CEA、CA19-9、CA72-4对胃癌辅助诊断及其预后判断的临床评价

目的:探讨胃癌抗原(MG-7)、癌胚抗原(CEA)、糖类相关抗原(CA19-9、CA72-4)对胃癌的辅助诊断及预后判断的价值。方法:对60名健康体检者、60例胃炎组患者、56例其他癌肿患者组及60例胃癌患者术前及术后3个月的血清标本用酶联免疫吸附试验或化学发光法进行4种标志物的检测。结果:在胃癌术前组,MG-7为(7．0±5．1)U/ml,CEA为(76．6±264．4)μg/L,CA19-9为(84．8±187．7)U/ml,CA72-4为(47．6±88．6)U/ml,与健康体检组、胃炎组、其他癌肿患者组相比,有不同程度的升高;这4种肿瘤标志物联合检测较其中任何一个标志物单项检测的灵敏度均有较大的提高;分析胃癌患者术后3个月4种肿瘤标志物的含量变化,发现均较术前明显降低。结论:MG-7、CEA、CA19-9和CA72-4的联合检测可提高对胃癌辅助诊断的灵敏度;动态观察胃癌患者血清中这4种肿瘤标志物含量的变化,对胃癌的辅助诊断、疗效评估均有重要意义。

直接标记的抗体芯片筛选血清疾病候选标志物的研究

目的应用血清样品直接标记和抗体芯片方法进行抗原和疾病标志物的筛选。方法分别取正常、糖尿病和甲亢患者的血清,采用FMB的ASB600抗体芯片的样品及相关的标记试剂盒,对3μl血清样本进行直接生物素标记。抗体芯片孵育后,用链霉亲合素标记的Cy3荧光显色芯片,经扫描仪检测杂交信号,分析比较芯片内、芯片之间的信号结果重复性,初步筛选疾病样本中与正常样本有差别的蛋白标志物。结果芯片内的两点重复性相关系数R2达到0.95～0.99,芯片重复实验间的相关系数R2达到0.98。对不同样本间的芯片信号进行比较,可以发现与疾病相关的新蛋白分子。结论本研究中使用的ASB600抗体芯片和直接标记荧光检测的实验方法可用于疾病相关的血清分子标志物的识别与寻找。

液相蛋白芯片与酶免疫法检测4种肿瘤标志物的比较

目的:建立液相蛋白芯片测定AFP、CEA、CA19-9、CA125等肿瘤标志物的方法,讨论其应用于临床检验的可行性。方法:分别用液相蛋白芯片法检测微粒子酶免分析法(MEIA)检测的阳性标本AFP60例、CEA42例、CA19-965例、CA12550例及上述项目阴性样本33例。结果:液相蛋白芯片法检测的样品浓度范围比MEIA法的范围更大,在共同的样品浓度范围内,两者检测定性和定量结果基本是一致的。而液相蛋白芯片的方法可以同时进行多指标的检测,体现出高通量的概念,可以节省临床上检测的时间和人力需求。结论:液相蛋白芯片法检测肿瘤标志物,可应用于临床检测。

雌激素受体与乳腺癌三苯氧胺治疗的研究进展

乳腺癌是女性激素依赖肿瘤 ,癌组织中雌激素受体 (EstrogenReceptor,ER)和孕激素受体 (ProgestoroneReceptor,PR)水平对选择内分泌治疗和预后有重要意义。但近年研究发现三苯氧胺 (TAM)治疗过程中ER表达的选择性压力、ER基因的突变及变异等 ,都是导致患者对TAM治疗的抵抗的原因 ,细胞周期素 (cyclin)D1也发现与乳腺癌的预后有一定的关系 ,本文就这些方面作一综述。

不同的梅毒血清学试验方法检测1808例血清标本结果分析

目的结合患者临床资料,比较快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、梅毒螺旋体特异性抗体化学发光法(CLIA)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)检测梅毒的优缺点。方法 1 808例标本分别采用RPR法和CLIA法检测,结果阳性的标本再用TPPA法复测。结果1 808例患者中共确诊170例梅毒感染患者。RPR法敏感性和阳性预测值较低,与CLIA法和TPPA法相比差异有统计学意义(P<0.05);RPR法特异性与CLIA法相比差异无统计学意义(P>0.05);阴性预测值低于CLIA法,差异有统计学意义(P<0.05)。CLIA法敏感性与TPPA法相比差异无统计学意义(P>0.05),阳性预测值低于TPPA法,差异有统计学意义(P<0.05)。三种方法均存在一定的生物学假阳性,RPR法和TPPA法存在一定的假阴性。结论梅毒血清学试验CLIA法和TPPA法在梅毒诊断方面优于RPR法,建议改进梅毒检测流程并且结合流行病史、临床资料及实验室检查结果综合判断。

ELISA法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg结果比较分析

目的对酶联免疫吸附试验(ELISA)和电化学发光免疫法(ECLIA)检测血清中的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)结果进行比较分析。方法采用ELISA和ECLIA 2种方法分别检测8 913例血清中的HBsAg。结果 ELISA法和ECLIA法检测出的总阳性数和总阳性率分别为519例占5.82%,451例占5.06%;以ECLIA法为参照,ELISA法假阴性率为0.67%,假阳性率为1.43%,相对敏感性为88.3%,相对特异性为98.5%二者的符合率为97.9%;403例阳性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阳性率为11.9%,相对敏感性为100%,相对特异性为50%,二者的符合率为88.1%;116例弱阳性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阳性率为69%,相对敏感性为100%,相对特异性为50%,二者的符合率为31%;8 394例阴性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阴性率为0.71%,相对敏感性为50%,相对特异性为100%,二者的符合率为99.3%。结论血清HBsAg ELISA法检测存在一定的假阴性率和假阳性率,敏感性和特异性较ECLIA法差,且随HBsAg浓度变化较大。ECLIA法快速、准确、敏感性、特异性更高。

抗EB病毒衣壳抗原IgG抗体亲合力诊断儿童传染性单核细胞增多症的价值及患儿免疫状态的变化

目的探讨抗EB病毒衣壳抗原(EBV-CA)IgG抗体亲合力对EB病毒(EBV)感染传染性单核细胞增多症(IM)的诊断价值及患儿免疫状态的变化。方法选取行抗EBV-CAIgG抗体亲合力及抗EBV-CAIgM抗体检测的儿童5882例,其中IM500例、非IM5382例,检测抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、EBVDNA载量、外周血异型淋巴细胞(简称异淋)比例和外周血淋巴细胞亚群。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、异淋比例和EBVDNA单项及联合检测诊断IM的效能,并观察IM患儿的免疫状态。另选取临床诊断为IM并检测EBVDNA和淋巴细胞亚群的患儿502例,探讨EBVDNA阳性及阴性IM患儿的细胞免疫状况。结果在5882例儿童中,抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、EBVDNA和异淋比例4项指标任意1项阳性的患儿为1031例(17.53%),其中IM的发生率最高(38.1%)。ROC曲线分析结果显示,抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、异淋比例和EBVDNA诊断IM的曲线下面积(AUC)分别为0.883、0.729、0.788和0.664,4项指标联合检测的AUC为0.847。依据年龄将1031例患儿分为婴儿组(<1岁)、幼儿组(1~3岁)、学龄前期组(4~6岁)和学龄期组(7~17岁)。除婴儿组外,其他3组中的IM患儿CD3-CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例、CD3-CD19+B细胞比例、CD3+CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+比值显著低于非IM患儿(P<0.01),CD3+T细胞比例、CD3+CD8+T细胞比例显著高于非IM患儿(P<0.01)。婴儿组中的IM患儿CD3-CD19+B细胞比例显著低于非IM患儿(P<0.01),CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞比例显著高于非IM患儿(P<0.01),而CD3-CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例、CD3+CD4+T细胞比例、CD4+/CD8+比值IM患儿与非IM患儿之间差异无统计学意义(P>0.05)。EBVDNA阳性IM患儿与阴性IM患儿比较,上述变化更明显。结论抗EBV-CAIgG抗体亲合力对IM的诊断价值优于异淋比例、抗EBV-CAIgM抗体和EBVDNA。IM患儿细胞免疫功能明显紊乱,EBVDNA阳性的IM患儿紊乱程度更严重。

胱抑素C的临床价值研究进展

胱抑素C(Cystain C,Cys C)是一种新的半胱氨酸蛋白酶抑制剂。在脑脊液、血液、尿液和胸腹水中都有发现,它的浓度几乎不受肾前因素的影响,能自由通过肾小球滤过,没有肾小管的重吸收和排泄,也没有肾外的排泄途径。在反应肾功能损伤方面比常规的血肌酐、尿素氮更为敏感,可以替代Ccr来反映肾小球滤过功能。生理情况下几乎没有影响Cys C稳定的因素,应用大剂量激素治疗和甲状腺功能障碍的患者可使它的分泌大大改变。该项目临床检测方法方便可行,可自动化单个或批量检测,能更早期更准确地提供肾功能的变化情况,为临床早期治疗提供依据。

上海地区汉族健康人群血清脂联素水平分析

目的探讨上海地区汉族健康人群血清脂联素水平,分析其与年龄、性别、血脂浓度及胰岛素抵抗指数的关系。方法收集400名汉族健康体检者的血清标本,采用酶联免疫吸附双抗夹心(ELISA)法测定血清脂联素水平和血清空腹胰岛素(FINS)水平。结果上海地区汉族健康人血清空腹脂联素水平为(9.48±4.86)!g/ml,各年龄组间比较差异无统计学意义;男性脂联素浓度为(8.46±3.97)!g/ml,女性为(10.22±5.30)!g/ml,男性和女性相比脂联素浓度差异有统计学意义;女性绝经前后脂联素浓度分别为(11.89±4.78)!g/ml和(8.78±4.65)!g/ml,两者脂联素浓度差异有统计学意义。结论①血清脂联素浓度在各年龄段差异无统计学意义;女性脂联素浓度高于男性,差别有统计学意义(P<0.05);绝经前、后女性脂联素浓度差异有统计学意义(P<0.05)。②血清脂联素水平与空腹胰岛素水平、体重、体重指数、腰臀比、收缩压、LDL-C等指标呈负相关,与HDL-C水平呈正相关。

罗氏E170全自动电化学发光免疫分析仪剩余试剂再利用结果分析

目的探讨Roche E170全自动电化学发光免疫分析仪剩余试剂合并再利用的可行性。方法采用合并剩余试剂分别检测特定血清中5个肿瘤标记物[血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA199、CA153、CA125)]的含量,并进行精密度、准确性及回收率分析;与新试剂分别检测同一组标本中5个项目低、中、高3个浓度的含量,并做均值比较及相关性分析。结果合并剩余试剂检测AFP、CEA、CA199、CA153、CA125 5个项目低、高浓度血清批内、批间变异系数(CV)均符合相关标准。质控血清准确性在允许范围内,回收率均值在90%～110%之间。用合并剩余试剂与新试剂分别检测5个项目低、中、高3个浓度,各组均值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Roche E170免疫分析仪可以对剩余试剂合并再利用,能够保证检测质量,降低检测成本。

阿仑膦酸钠与雌激素对实验性骨质疏松大鼠种植体骨结合作用的比较研究

目的研究抗骨质疏松药物对骨质疏松状态下种植体骨结合的作用。方法40只12周龄雌性SD大鼠,随机分为四组,每组10只：伪手术组(S组)、卵巢切除组(O组)、OVX+雌激素组(E组)、OVX+阿仑膦酸钠组(A组)。S组伪手术12周后,O组、E组、A组卵巢切除12周后双侧股骨进行种植手术。种植术后E组腹腔注射苯甲酸雌二醇；A组阿仑膦酸钠灌胃。各组分别在种植术后6周、12周处死。取右侧胫骨QCT行骨密度测量；左侧带种植体股骨行硬组织切片及骨组织形态计量学测量；右侧带种植体股骨摄X线片和进行力学测试。结果①体重、血清雌二醇、碱性磷酸酶检测S组均与其余三组有统计学差异,且胫骨骨密度检测亦表明大鼠骨质疏松成功建立。②组织学观察：种植术后6周和12周,S组皮质骨区新生骨组织主要为编织骨和成熟的层板骨,并与种植体紧密结合；松质骨区骨小梁密集,粗细不均；种植体表面有一层较厚的新生骨板包绕,仅有少数区域与骨髓腔直接接触。E组和A组组织学改变与S组相似,而O组松质骨区骨小梁稀疏,结合骨板较薄,种植体表面与骨髓腔相通较多。③骨组织形态计量学：O组比S组、E组和A组骨结合率、松质骨区骨量明显下降,结果有统计学意义。E组、A组与S组未有统计学差异。④力学测试结果：A组提出力虽低于S组,但明显高于O组和E组,与E组相比有统计学意义。结论抗骨质疏松药物均能提高种植体骨结合。雌激素和阿仑磷酸钠治疗在组织学改变相似的情况下,阿仑磷酸钠由于抑制了破骨细胞的活性,其力学性能较雌激素替代治疗组有统计学意义上的提高。

碱性磷酸酶同工酶对原发性胆汁性肝硬化的诊断价值初探

目的 初步探讨血清碱性磷酸酶(ALP)同工酶对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的辅助诊断价值。方法 用Sebia琼脂糖凝胶电泳分离30名正常人、23例PBC患者和25例其他肝胆疾病患者的血清ALP同工酶,经 光密度扫描仪扫描后,分析各型同工酶的相对含量。结果 血清ALP同工酶经电泳后可分为肝型、胆汁型、肠 型和骨型4个区带。PBC患者的肝型ALP的相对含量最高,约为56%～70%,显著高于正常对照及乙肝后肝硬 化患者(P<0.05),而其胆汁型ALP的相对含量显著低于肝外阻塞性黄疸患者(P<0.05)。结论 ALP同工酶 分析可辅助诊断PBC。

RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达

目的:设计针对PADI-4基因的RNAi表达载体,抑制PADI-4基因在HL-60细胞中的表达,初步确定PADI-4基因在类风湿性关节炎发生发展中的作用,为后续研究奠定实验基础。方法:设计并合成4对针对PADI-4基因编码区的核苷酸链,核苷酸链经体外退火后形成双链SiRNA,克隆进入pSiRNA-hH1neo G2空载体后转化入GT116细胞,通过蓝白斑筛选后,挑取白斑进行扩增,抽提质粒并对重组质粒进行双酶切分析。以脂质体转染法,分别将pSiRNA-hH1neo G2空载体和4个重组质粒载体转染进入HL-60细胞系,于转染的第3、5、7、10、14天后收集细胞,抽提细胞总RNA后,反转录成cDNA,用Real-time PCR技术检测各实验组HL-60细胞内PADI-4基因mRNA水平的表达情况,并做统计分析。结果:经Acc65Ⅰ和HindⅢ双酶切鉴定,重组质粒中已经插入目的片段,为合格质粒;转染pSiRNA表达载体后,HL-60细胞系中PADI-4基因mRNA表达水平下降,其中以第3号载体的干扰效果最优,干扰效率达到62%。结论:成功构建针对PADI-4基因的pSiRNA表达载体,并且筛选出干扰效率最好的载体,为后续研究PADI-4基因在类风湿性关节炎中的作用奠定实验基础。

MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪精密度验证情况分析

目的验证MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪的精密度情况。方法取生产制造商提供的乙肝两对半精密度浓度附近的混合患者血清,按照EP15-A2的要求,两个浓度的血清分别在MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪上测定5天,每天重复测定三次。结果两个浓度的血清乙肝两对半测定值的重复不精密度(Sr)和中间不精密度(S1)均小于制造商声明的重复不精密度(σr)和中间不精密度(σ1)。结论本实验室使用的MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪和罗氏公司提供的配套试剂精密度好,实验结果稳定可靠;本实验室接受生产制造商提供的乙肝两对半的精密度报告情况。

荧光定量RT-PCR检测类风湿关节炎患者葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA表达水平的研究

目的通过比较分析葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)mRNA在类风湿关节炎(RA)、其他自身免疫性疾病及健康人群之间的表达差异,探讨其在RA中的致病机制。方法建立实时定量RT-PCR方法,并利用该法检测128例RA患者(RA组)、32例其他自身免疫性疾病患者(疾病对照组)、100例健康体检者(健康对照组)G6PI基因的表达水平。结果经GAPDH校正后G6PI基因表达水平在RA组为2.72±2.09,其中活动组和缓解组分别为3.12±2.40和2.13±1.34,疾病对照组为2.14±1.43,健康对照组为1.25±0.73。RA组显著高于健康对照组(P<0.01),RA活动组基因表达水平显著高于缓解组(P<0.01),也显著高于疾病对照组(P<0.01)。结论 G6PI在RA患者中表达的显著增加表明G6PI可能参与了RA的发病过程,并与疾病的活动性相关,可作为RA的辅助性诊断指标及早期筛查指标。

葡萄糖-6-磷酸异构酶免疫复合物检测方法的建立及其在类风湿关节炎诊断中的应用

目的建立葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)免疫复合物测定方法,初步探讨其与类风湿关节炎(RA)发病机制的关系及其对RA辅助诊断、病情监测的作用。方法建立C1q抗体捕获ELISA方法,并对311例血清标本(RA患者176例、其他免疫疾病患者35例和健康体检者100例)和44例关节液标本(RA患者33例、非RA关节疾病患者11例)中的G6PI/G6PI抗体/C1q免疫复合物水平进行检测。结果以波长450 nm吸光度值(A_(450nm))表示复合物含量,176例RA患者血清中G6PI免疫复合物为0.918±0.507,显著高于其他免疫疾病对照组(0.746±0.399)和健康对照组(0.696±0.362),P<0.01;而两对照组间差异无统计学意义。RA活动组为1.045±0.529,显著高于非活动组(0.764±0.436),P<0.01。以健康对照组A_(450nm)值建立正常参考区间,结果G6PI免疫复合物对RA诊断的敏感性和特异性分别为60.2%和67.4%,活动期RA的阳性率为74%,显著高于非活动期(43.7%)。33例RA患者、11例其他关节疾病患者关节液中G6PI免疫复合物A_(450nm)分别为0.835±0.497和0.596±0.132,RA患者组显著高于其他关节病组,P<0.05。结论 RA患者血清和关节液G6PI免疫复合物含量增高,且增高程度与RA病情活动相关;G6PI免疫复合物可能在RA发病中起重要作用,且与疾病的活动性密切相关。

葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原、抗体测定在类风湿关节炎诊断中的作用

目的探讨血清和关节液中葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)抗原和抗体含量变化与类风湿关节炎(RA)病情活动状态的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定RA患者176例、其他免疫疾病患者35例、健康体检者100例的血清标本及RA患者33例、其他免疫疾病患者11例的关节液标本中G6PI抗原和抗体水平。结果 G6PI抗原在诊断RA中的敏感度和特异度分别为75.0%和93.3%;176例RA患者血清G6PI含量为(4.37±8.65)μg/mL,显著高于疾病对照组(0.07±0.07)μg/mL(P<0.01)和健康对照组(0.34±1.30)μg/mL(P<0.01);在RA组中,活动期患者血清G6PI含量为(7.61±10.69)μg/mL,显著高于缓解组(0.47±0.47)μg/mL(P<0.01);关节液G6PI表达量也显著高于疾病对照组,分别为(1.39±0.58)μg/mL和(0.16±0.17)μg/mL(P<0.05)。以波长450 nm吸光度值(A_(450nm))表示抗体含量,G6PI抗体的含量在RA组、疾病对照组以及健康对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),在RA活动组与非活动组之间差异无统计学意义(P>0.05);关节液中G6PI抗体含量RA患者与疾病对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 G6PI抗原在RA患者中高表达,并且与疾病活动性有密切关系。因此G6PI抗原可以作为敏感度、特异性俱佳的RA辅助诊断指标,尤其对病情判断有重要作用。而G6PI抗体在RA的诊断中价值不大,与病情活动亦无关。