龙眼蛋白对C57BL/6小鼠及RAW264.7巨噬细胞的炎症因子的影响研究

目的探讨龙眼蛋白对C57BL/6小鼠及RAW264.7巨噬细胞的炎症因子影响及作用机制。方法采用反向色谱-质谱法(reverse-phase liquid chromatography-mass spectrometry,RPLC-MS)鉴定龙眼蛋白的组成。采用100 mg/(kg·d)和200 mg/(kg·d)龙眼蛋白腹腔注射C57BL/6小鼠,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定小鼠血液炎症因子的表达,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法染色分析肺部炎症病理反应;用0.2、0.4、0.6 mg/mL龙眼蛋白处理小鼠RAW264.7巨噬细胞,噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法测定细胞活力,实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)和ELISA检测炎症因子表达,蛋白质免疫印迹法(western blot,WB)分析腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activatedprotein kinase,AMPK)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路相关蛋白表达情况。结果通过RPLC-MS结合数据库检索,共鉴定到肽段覆盖率在30%以上的蛋白质25种。腹腔注射100 mg/(kg·d)龙眼蛋白使小鼠肺部产生炎症病理反应,小鼠血清中的炎症因子[血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SSA)、超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)]均显著升高。0.2 mg/mL龙眼蛋白处理使RAW264.7细胞IL-6、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的m RNA和蛋白表达均呈剂量依赖式上升,AMPK磷酸化水平表达下调,p65磷酸化水平表达上调。结论龙眼蛋白能够促进小鼠和RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,其作用机制可能是龙眼蛋白促进了AMPK/NF-κB信号通路相关炎症因子的表达。