牙髓卟啉单胞菌内毒素对成骨细胞表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的影响

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(P.e)内毒素(LPS)对成骨细胞表达炎症因子白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的影响,探讨P.e-LPS参与根尖周病变牙槽骨吸收的病理机制。方法:应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测在不同浓度P.e-LPS(0～50μg/mL)和不同作用时间(0～24h),P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的水平。应用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnettt检验。结果:当P.e-LPS浓度大于5μg/mL,作用1h后,与0μg/mL和0h组比较,IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的表达水平均显著提高(P<0.01),表明P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA具有剂量和时间依赖性。结论:P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA,是加速根尖病变的重要毒力因子。

牙髓卟啉单胞菌内毒素诱导成骨细胞表达炎症因子的信号通路研究

目的检测细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对牙髓卟啉单胞菌内毒素(LPS)诱导成骨细胞白细胞介素(IL)-1β mRNA和IL-6 mRNA的影响,探讨根尖周病变牙槽骨吸收的可能病理机制。方法成骨细胞MG-63经PD98059和SB203580预处理1h后,加入牙髓卟啉单胞菌LPS作用6h,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的表达水平。结果PD98059预处理后,牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63表达IL-1β mRNA的水平下降。SB203580预处理后,牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA水平均下降。结论牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63细胞表达IL-1β mRNA依赖ERK1/2和p38MAPK信号转导通路,表达IL-6 mRNA依赖p38MAPK信号转导通路。

PBL教学模式在口腔内科教学中的应用与思考

目的:探索PBL教学模式在口腔内科教学中的应用,以期提高教学质量。方法:选取中国医科大学五年制口腔医学专业学生作为研究对象,随机分为两组,进行PBL教学模式和传统教学方法的比较研究,通过学生问卷调查和试卷考核的方式进行结果评价。结果:PBL教学模式深受学生欢迎,且PBL教学组考核成绩高于传统教学组(P<0.01)。结论:PBL教学模式在培养创造型、开拓型、实用型医学人才的过程中发挥其独特的优势,但PBL教学模式的普遍推广应用,还存在一些需要解决的问题。

不同氢氧化钙制剂对牙髓卟啉单胞菌的杀菌效果

目的:比较Endocal、Calxyl、国产氢氧化钙糊剂、Vitapex 4种氢氧化钙制剂对牙髓根尖周主要致病菌牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)活性的影响。方法:(1)通过动态比浊法比较在直接接触条件下不同氢氧化钙制剂不同作用时间对牙髓卟啉单胞菌的抑制作用。(2)选取新鲜拔除的人单根管牙85颗,经根管预备、高压消毒灭菌后,置入P.e菌悬液,建立牙髓卟啉单胞菌感染模型。将模型采用抽签法随机分为5组,即Endocal组、Calxyl组、国产氢氧化钙糊剂组、Vitapex组、无菌去离子水对照组。分别于封药前和封药7d后,用无菌纸捻在根管中取样,细菌培养计数菌落,并完成细菌24h回复实验。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果:Endocal、Calxyl、国产氢氧化钙糊剂、Vitapex均能有效减少牙髓卟啉单胞菌的数量(P<0.05),细菌清除率均达95%以上。动态比浊法检测结果显示,Endocal、国产氢氧化钙糊剂抑菌作用优于其他组,有显著性差异(P<0.05);细菌培养法结果显示,Endocal组细菌清除率显著大于Vitapex组(P<0.05)。结论:Endocal、Calxyl、国产氢氧化钙糊剂、Vitapex 4种药物对牙髓卟啉单胞菌均有较好的抑制作用,其中,Endocal的抗菌作用优于Vitapex。

SOCS-1和SOCS-3在慢性根尖周炎病损组织中的表达及临床意义

目的:检测细胞因子信号转导抑制因子1(suppressor of cytokine signaling-1,SOCS-1)和细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3)在慢性根尖周炎病损组织中的表达水平,探讨SOCS-1、3在慢性根尖周炎发病机制中的作用。方法:收集25例慢性根尖周炎病损组织作为病例组,16例健康牙的牙周膜组织作为对照组。对样本中的蛋白表达量采用免疫组织化学法检测,mRNA表达量采用实时定量PCR法检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组织化学结果显示,SOCS-1、3蛋白在慢性根尖周炎病损组织中的表达水平均显著高于对照组(P<0.01);重度炎症组中,SOCS-1、3的蛋白表达显著高于轻中度炎症组(P<0.01)。SOCS-1mRNA在轻中度炎症组、重度炎症组和对照组中的表达量分别为2.620±1.552、2.373±1.083和1.277±1.040,SOCS-3mRNA的表达量分别为9.308±5.901,7.565±3.233和1.232±1.099。SOCS-1、3 mRNA在轻中度炎症组、重度炎症组均显著高于对照组(P<0.01),但不同炎症组之间并无显著差异。结论:SOCS-1、3可能与慢性根尖周炎密切相关。

MicroRNA 34a-5p对成骨细胞炎症反应及分化的影响

目的:探究microRNA 34a-5p(miR-34a-5p)对成骨细胞炎症反应及分化的调节作用,并初步探究其相关机制。方法:脂质体法瞬时转染人成骨样细胞系MG63使细胞中miR-34a-5p表达增强,同时设通用阴性对照(NC)组。牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)来源的不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用于MG63后,检测细胞内miR-34a-5p表达;取20mg/L P.e-LPS作用24h后,检测细胞内IL-6表达。成骨诱导48h后,检测细胞中成骨分化标志物以及Notch1受体的表达。结果:P.e-LPS作用于MG63细胞后,miR-34a-5p表达被抑制(P<0.05)。MiR-34a-5p转染细胞后,与NC组相比,细胞内IL-6表达减少(P<0.01);20mg/L P.e-LPS作用下,miR-34a-5p组IL-6表达较NC组下降更为明显(P<0.01)。成骨细胞诱导分化48h后,miR-34a-5p组中分化标志物表达较NC对照组均显著增加(P<0.05),而Notch1受体表达被抑制(P<0.05)。结论:MiR-34a-5p可能通过Notch1信号通路,发挥抑制成骨细胞炎症和促进成骨分化的作用。

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞CD14表达的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞CD14表达的影响。方法:在有血清和无血清存在的情况下,用10μg/mLP.e-LPS作用于MC3T3-E1细胞24h,流式细胞术检测CD14的表达;10μg/mLP.e-LPS刺激MC3T3-E1细胞后,观察不同时间(0、1、3、6、12及24h)后检测细胞膜结合型CD14mRNA表达的变化。应用SPSS13.0软件包对结果进行两样本t检验、单因素方差分析和Dunnettt检验。结果:流式细胞术分析P.e-LPS作用24h后,CD14蛋白表达量增加,但无血清组增加更明显;随着P.e-LPS作用时间的增加,MC3T3-E1细胞膜结合型CD14mRNA的表达量逐渐增加,作用3h时表达最明显,作用大于6h后表达量逐渐降低。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞MC3T3-E1的CD14表达增强,表明P.e-LPS可能通过CD14对成骨细胞发挥作用。

生物活性肽-蛋氨酸脑啡肽对成骨细胞增殖的影响

蛋氨酸脑啡肽(Methionine Enkephalin,MENK)作为内源性物质,通过与阿片受体结合,发挥阿片样物质的生物学作用。研究表明,MENK在成熟的骨组织和成骨细胞中均有分布,并且在成骨细胞表面发现了阿片受体。实验旨在进一步研究MENK对成骨细胞增殖的影响。体外培养MC3T3-E1成骨细胞,MTT方法检测MENK对成骨细胞增殖的影响。结果表明,10-7、10-8、10-9mol/L的MENK对成骨细胞的增殖具有促进作用(P<0.05)。提示MENK可在骨缺损疾病中发挥促进骨组织重建的作用。

白藜芦醇对牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导成骨细胞产生MIP-2的影响

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响成骨细胞产生巨噬细胞炎性蛋白2(macrophage inflammatory protein-2,MIP-2)mRNA和蛋白分泌的作用,以及白藜芦醇对P.eLPS诱导分泌MIP-2产生的抑制作用。方法:以不同剂量的P.e-LPS (0～50 mg/L)作用于MC3T3-El细胞,并以20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞不同时间(0～48 h),采用实时反转录PCR (real-time RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MIP-2 mRNA和蛋白的表达;采用ELISA方法检测白藜芦醇对20 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞24 h后MIP-2蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:当不同剂量P.e-LPS (0～50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞时,MIP-2 mRNA的表达和蛋白的分泌随剂量的提高而升高;其中,蛋白表达从(41.86±2.49)ng/L升高到(3126.74±158.30)ng/L,差异显著(P<0.05)。在观察时间内(0～48 h),20 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞后,MIP-2 mRNA的表达和蛋白的分泌随时间的延长而增高,48 h时蛋白表达量最高,为(2102.55±123.27)ng/L(P<0.01)。10 mol/L白藜芦醇预处理细胞1 h,可抑制P.e-LPS诱导的MIP-2蛋白的表达,蛋白水平从(1805.33±67.54)ng/L降低到(813.82±47.21)ng/L,差异显著(P<0.01)。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞表达和分泌MIP-2,白藜芦醇对P.e-LPS诱导的MIP-2蛋白分泌发挥抑制作用。

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达MIP-1α的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophageinflammatoryprotein-1α,MIP-1α)m RNA和蛋白分泌的影响,以及姜黄素对此过程产生的抑制作用。方法:以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0~48 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测MIP-1αm RNA和蛋白的表达。以同样方法检测姜黄素对20 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞后MIP-1αm RNA和蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:在观察时间内(0~48 h),20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞后,MIP-1αm RNA的表达和蛋白的分泌具有时间依赖性。10 mol/L姜黄素预处理细胞1 h,可以降低P.e-LPS诱导的MIP-1αm RNA和蛋白的表达水平。结论:P.e-LPS可以诱导成骨细胞表达和分泌MIP-1α,姜黄素对此过程发挥明显的抑制作用。

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达IL-34 mRNA的影响

目的 :探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生白介素34(interleukin-34,IL-34)m RNA表达的影响及此过程是否有p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1蛋白的参与。方法:以不同浓度P.e-LPS(0~50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞和以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0~24 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测IL-34 m RNA的表达。以同样方法检测NF-κB抑制剂BAY 11-7082、p38MAPK抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂PD98059、沉默调节蛋白1(sirtuin1,SIRT1)激动剂白藜芦醇(resveratrol,RES)和SIRT1抑制剂EX-527对P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞后IL-34 m RNA表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果 :不同浓度P.e-LPS(0~50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞后,IL-34 m RNA的表达具有剂量依赖性。20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞24 h时,IL-34 m RNA的表达量最大;48 h时,IL-34 m RNA的表达量有所下降。10 mol/L BAY-117082、SB203580、PD98059预处理细胞1 h,可以降低P.e-LPS诱导的IL-34 m RNA的表达水平。50 mol/L RES下调P.e-LPS诱导小鼠成骨细胞表达IL-34 m RNA,而10 mol/L EX-527则上调IL-34 m RNA的表达。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞表达IL-34 m RNA,其机制可能是激活p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1信号通路。

肿瘤坏死因子-α和白介素-2对成骨细胞增殖的影响

成骨细胞在骨组织改建中至关重要。本试验体外培养人骨肉瘤细胞系MG63,MTT方法检测白介素-2（Interleukin-2,IL-2）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对成骨细胞增殖的影响。结果表明,当IL-2的浓度大于100U/mL,其能够促进成骨细胞增殖（P〈0.05）,一定浓度（50～1000U/mL）的TNF-α对成骨细胞的增殖也有促进作用。

白介素-2及干扰素-γ对人成骨细胞增殖的影响

体外培养人骨肉瘤细胞系MG63,MTT方法检测白介素-2(Interleukin-2,IL-2)和干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)对成骨细胞增殖的影响。结果表明,一定浓度(0.1～100 U/μL)的IL-2能够促进成骨细胞增殖(P<0.05),而IFN-γ对成骨细胞增殖的影响无统计学意义(P>0.05),提示IL-2是成骨细胞的一种促分裂原。

情景模拟结合Seminar教学法在牙体牙髓病学临床实习前期的应用

目的:探讨在牙体牙髓病学临床实习前阶段开展情景模拟与Seminar教学法相结合的教学效果。方法:随机将60名即将进入牙体牙髓科临床实习的学生分成两组,实验组进行情景模拟与Seminar相结合的教学方法,对照组进行传统教学,通过考试成绩和调查问卷评价教学效果。结果:实验组学生的考试成绩较对照组优秀;学生对情景模拟结合Seminar教学法的评价也更好。结论:在牙体牙髓病学临床实习之前开展情景模拟结合Seminar教学法有利于提高教学质量。

牛血浆纤维黏连蛋白对大鼠成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响

目的:研究外源性纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)对大鼠成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响,探讨应用FN治疗骨缺损性疾病的可行性。方法:酶消化法分离成骨细胞,通过细胞对染料Alamar蓝摄取检测细胞增殖,ELISA方法检测碱性磷酸酶活性,流式细胞术检测FN对成骨细胞细胞周期及凋亡的影响,Western印迹法检测FN作用后成骨细胞Bcl-2及Bax基因的蛋白表达变化。采用SPSS12.0软件包对实验数据进行单因素方差分析。结果:FN浓度为40μg/mL以上时,能促进大鼠成骨细胞的增殖,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);FN能增加成骨细胞ALP活性,各组与对照组相比均有显著性差异(P<0.05),并有明显的剂量依赖性;不同浓度的FN作用成骨细胞后,可使处于DNA合成期(S期)的细胞百分率增加;增殖指数(proliferation index,PI)增加,细胞凋亡百分率减少,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);FN作用后的细胞,Bcl-2基因的蛋白表达量增加,Bax基因的蛋白表达量减少,有剂量依赖性。结论:外源性FN能促进大鼠成骨细胞增殖、分化,使大鼠成骨细胞的DNA合成期(S期)的细胞百分比增加,同时抑制大鼠成骨细胞的凋亡,使大鼠成骨细胞胞质内Bcl-2基因的蛋白表达量增加,同时减少Bax基因的蛋白表达量。

不同激光处理60颗磨损后牙的临床疗效观察

目的:评价2种不同激光联合自酸蚀粘结系统处理磨损后牙的临床疗效。方法:选取符合纳入标准的30例患者的60颗牙(磨损程度相似),磨牙与磨牙配对,前磨牙与前磨牙配对,按计算机生成的随机数据表分为实验组和对照组,分别采用Er,Cr:YSGG激光和Nd:YAG激光联合Adper TM Easy One处理磨损牙表面,Z350复合树脂分层充填,以改良美国公共卫生署标准评价修复后1、6、12、18个月的疗效。采用SPSS 13.0软件包对数据进行χ2检验或Fisher确切概率检验。结果 :固位方面,12个月时,实验组固位B级率优于对照组,差异具有显著性(P<0.05);18个月时,实验组固位情况优于对照组,差异具有显著性(P<0.05)。牙髓牙本质反应方面,1、6、12、18个月相比较,实验组与对照组差异无显著性(P>0.05);2组总疗效相比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:Er,Cr:YSGG激光和Nd:YAG激光联合Adper TM Easy One处理磨损牙表面后,均可获得较为满意的临床效果,但是2种激光相比,前者能够获得更好的粘结强度,可作为临床上治疗磨损后牙修复的首选激光。

牙髓卟啉单胞菌内毒素对成骨细胞分化的抑制作用

目的 :研究牙髓卟啉单胞菌脂多糖(P.e-LPS)对成骨细胞分化的影响,探讨P.e-LPS在根尖周骨吸收疾病中的致病机制。方法:厌氧条件下培养P.e,应用热酚水法提取P.e-LPS,采用凝胶鲎试剂法对所提取的LPS进行定性分析。应用成骨细胞分化培养基(50μg/mL抗坏血酸、6 mmol/Lβ甘油磷酸钠)诱导前成骨细胞系MC3T3-E1向成骨细胞分化。实时定量PCR(RT-PCR)检测成骨分化基因Distal-less homeobox 5(DLX5)、Runt-related transcription factor2(Runx2)、Osterix、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)以及胶原(Collagen)的表达。碱性磷酸酶(ALP)活性测定、茜素红染色以及Von Kossa染色检测成骨细胞的矿化水平。应用siRNA转染,沉默P.e-LPS的受体Toll-like receptor-4(TLR-4)在成骨细胞中的表达。采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :P.e-LPS(10μg/mL)作用于MC3T3-E1细胞3 d,与对照组相比,成骨分化基因DLX5、Runx2、Osterix、OCN、BSP、胶原的mRNA表达水平显著下降(P<0.05)。P.e-LPS(10μg/mL)分别作用于MC3T3-E1细胞7 d和14 d,ALP活性及茜素红染色强度下降。P.e-LPS分别作用于siRNA-TLR-4转染组及对照组7、14、21 d,与对照组相比,si-TLR-4组细胞的成骨分化基因表达水平、ALP活性、茜素红染色强度以及Von Kossa染色强度均显著高于对照组(P<0.05)。结论:P.e-LPS通过受体TLR-4抑制成骨细胞的分化,从而参与根尖周病变的骨吸收过程。

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达MCP-1的影响

目的 :探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.endodontalis)脂多糖对小鼠成骨细胞表达单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)m RNA和蛋白的影响,以及是否有p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路和核因子κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)信号通路的参与。方法 :以不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖(0~50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞24 h;以20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于细胞不同时间(0~48 h)后,采用实时反转录PCR和酶联免疫吸附测定检测MCP-1m RNA和蛋白的表达。采用p38MAPK抑制剂SB203580和NF-κB抑制剂BAY11-7082分别预处理细胞1 h,检测其对P.endodontalis脂多糖刺激MC3T3-E1细胞后MCP-1m RNA表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖(0~50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞后,MCP-1的m RNA表达和蛋白分泌呈剂量依赖性;观察时间内(0~48 h),20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于MC3T3-E1细胞后,MCP-1 m RNA的表达和蛋白分泌呈时间依赖性;10 mol/L的SB203580和BAY11-7082分别预处理细胞1 h,可以降低P.endodontalis脂多糖诱导MCP-1 m RNA的表达,且SB203580的抑制作用强于BAY11-7082。结论:P.endodontalis脂多糖可能通过激活p38MAPK和NF-κB信号通路诱导成骨细胞表达MCP-1m RNA和蛋白。

成骨细胞调节破骨细胞功能的机制及途径研究进展

成骨细胞与破骨细胞是骨重塑、修复过程中重要的细胞,成骨细胞主要起骨形成作用,破骨细胞主要介导骨吸收,两者关系十分密切。成骨细胞参与破骨细胞骨吸收功能调节,可以调节破骨细胞在骨表面附着、分化,诱导破骨细胞凋亡,抑制破骨细胞骨吸收。成骨细胞通过三种方式调节破骨细胞,包括旁分泌、近分泌及旁分泌、近分泌协同。旁分泌包括成骨细胞产生细胞因子作用于破骨细胞,以及破骨细胞吸收骨基质释放基质中的成骨细胞合成的细胞因子,近分泌包括直接接触及缝隙连接,旁分泌、近分泌两者协同发挥作用。

神经纤毛蛋白-1在前成骨细胞成骨分化过程中及小鼠胫骨组织中的表达研究

目的探究神经纤毛蛋白-1(neuropilin 1,NRP1)在前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化过程中的m RNA和蛋白表达特征,以及其在小鼠胫骨组织中的表达情况,为临床应用信号素3A/NRP1信号轴治疗慢性根尖周炎区骨吸收提供实验基础。方法研究于2023年4—6月在中国医科大学附属口腔医院中心实验室进行。成骨分化诱导培养MC3T3-E1,并根据成骨分化时间分组。采用Western blot检测对照组(0 d)和分化1、3、5、7、10、14、20 d组的NRP1蛋白表达情况;采用qRT-PCR检测对照组和分化1、3、5、7、10、14 d组的NRP1 mRNA表达情况;对照组和成骨分化3、5 d组细胞进行免疫荧光染色,采用激光共聚焦显微镜观察成骨分化前期NRP1亚细胞定位。将3只4日龄小鼠共6根胫骨均分为NRP1组和阴性对照IgG组,并进行免疫荧光染色,采用倒置荧光显微镜观察NRP1在小鼠胫骨组织中的表达情况。结果各组NRP1蛋白及mRNA的相对表达量比较,差异均有统计学意义(F值分别为48600.000、60.030,均P<0.001);且分化7、10 d组的NRP1蛋白相对表达量较其他时间组高,分化10 d组的NRP1 mRNA相对表达量最高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在Western blot检测中NRP1主条带下方观察到分泌型NRP1(soluble NRP1,sNRP1)副条带。对照组和分化3、5 d组中,NRP1均在细胞质中表达,其亚细胞定位表现为围绕细胞核周围。NRP1在小鼠胫骨干骺端表达,且成骨区成骨细胞内表达广泛。结论NRP1参与前成骨细胞成骨分化过程,成骨分化前期主要在细胞质中表达,且参与小鼠胫骨形成。