TCF-4在肺癌中高表达并与肺癌的进展有关

背景与目的T细胞因子4(Tcellfactor4,TCF-4)是Wnt信号传导通路的重要分子,但其mRNA及蛋白在肺癌组织及细胞系中的表达情况和意义的相关研究较少。本研究的目的是检测TCF-4在肺癌组织和细胞系中的表达情况,并探讨其与肺癌的临床病理因素和生物学行为的关系。方法采用免疫组织化学(S-P法)检测120例肺鳞癌和肺腺癌患者及10例癌旁正常肺组织中TCF-4的表达;应用免疫荧光法检测肺癌细胞系及HBE(人正常支气管上皮)细胞系中TCF-4的表达水平及亚细胞定位;应用RT-PCR方法检测九种肺癌细胞系中TCF-4mRNA的表达水平。结果在120例肺鳞癌和肺腺癌组织标本中,96例为TCF-4高表达(80.0%),其中包括37例同时有细胞浆和核表达(30.8%)。TCF-4的高表达水平与患者的TNM分期正相关(P=0.022),10例癌旁正常肺组织无TCF-4表达。免疫荧光显示TCF-4蛋白在正常支气管上皮细胞系中表达极弱,而在肺癌细胞系中则出现明显的表达,主要定位于细胞核。TCF-4的mRNA在不同组织学类型的肺癌细胞系中的表达并不一致,巨细胞癌细胞系中相对较高,而腺癌细胞系中表达较低。结论TCF-4的高表达与肺癌的进展密切相关,有效抑制TCF-4在肺癌中的高表达可能成为肺癌治疗的新途径。

Axin通过负向调控Wnt通路抑制A549细胞系增殖

目的:前期研究发现转染Axin能抑制A549细胞的增殖能力,本研究目的是探讨Axin抑制A549细胞增殖能力的机制。方法:我们构建了野生型和突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变)转染A549细胞,并应用GSK-3βsiRNA处理细胞,Western bolt检测各处理组β-catenin和cyclin D1的变化,MTT检测各处理组细胞增殖能力的变化。结果:转染野生型Axin能够明显地下调β-catenin和cyclin D1(P<0.01),抑制Wnt通路活性和A549细胞的增殖(P<0.01),而GSK-3βsiRNA可以阻断Axin的这种功能;转染突变型Axin不能有效的下调Wnt通路或A549细胞的增殖能力。结论:Axin主要是通过负向调控Wnt通路抑制A549细胞的增殖。Axin可能成为未来治疗肺癌的新靶点。

Disabled-2基因去甲基化对肺癌细胞系Wnt通路及增殖能力的影响

目的:探讨Dab2启动子区的甲基化状态及其对Dab2表达的影响,对Wnt通路和肺癌细胞增殖能力的影响。方法:BSP检测去甲基化试剂处理前后BE1细胞启动子区Dab2甲基化状态;Real-time PCR检测去甲基化试剂处理前后Dab2 mRNA水平;Western blot检测去甲基化试剂处理前后Dab2变化和Wnt通路的变化;MTT法检测BE1细胞经去甲基化试剂处理后增殖能力的变化。结果:BE1细胞Dab2基因启动子区处于高甲基化状态,经去甲基化试剂处理后Dab2启动子区发生明显去甲基化(37%vs 10.3%,P<0.01),Dab2mRNA在去甲基化试剂处理后明显上调,Western blot检测显示BE1细胞经去甲基化试剂处理后Dab2蛋白表达明显上调,而Wnt通路关键分子β-catenin及其下游Cyclin D1表达下调,BE1细胞经去甲基化试剂处理后增殖能力明显下调。结论:Dab2基因启动子区高甲基化抑制肺癌细胞中Dab2转录水平和表达,Dab2基因去甲基化抑制Wnt通路,进而抑制肺癌细胞的增殖能力。

p53负向调控肺癌A549细胞Wnt通路活性并抑制其增殖和侵袭

目的:探讨野生型p53对Wnt通路的调节以及对肺癌细胞生物学行为的影响。方法:分别利用野生型p53质粒及siRNA,分别转染和干扰A549细胞中的野生型p53,而后用Western blot检测A549细胞中β-catenin和cyclin D1的表达,用荧光素酶报告基因法检测Wnt通路活性,用MTT和Transwell实验检测A549细胞的增殖和侵袭能力。结果:转染野生型p53后能够明显下调A549细胞中β-catenin和cyclin D1表达(P<0.01),抑制肺癌细胞的增殖和侵袭(P<0.05),而干扰p53可以明显地上调β-catenin和cyclin D1表达(P<0.01),增强肺癌细胞的增殖力和侵袭力(P<0.05)。结论:野生型p53负向调控A549细胞中的Wnt信号转导通路,抑制其增殖和侵袭能力。

Axin抑制A549细胞迁移能力及其机制的研究

目的:Wnt信号传导通路的异常激活在肿瘤发生和发展中起着重要的作用,而Axin可以通过参与形成降解复合体下调β-catenin负向调控Wnt通路,抑制肿瘤细胞的恶性生物学行为。本次实验的目的是研究Axin对肺癌细胞迁移能力的影响及可能的途径。方法:在已有野生型Axin质粒的基础上构建了突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变,用AxinΔβ-ca表示),并向A549细胞中转染野生型Axin和突变型Axin。Western blot法检测转染后Axin和β-catenin的表达。用各转染组细胞进行划痕实验和Tr-answell细胞迁移实验。结果:转染野生型Axin可以明显的下调A549中β-catenin的表达(P<0.01),抑制A549细胞的迁移能力(P<0.01),而转染突变型Axin和空质粒后A549细胞中β-catenin没有明显的变化,细胞的迁移能力未受到明显的影响。结论:体轴抑制因子Axin可以明显的抑制肺癌细胞的迁移能力。而这种作用可能与其负向调控Wnt通路有关。Axin可能成为临床治疗肺癌的新靶点。

Axin过表达下调β-catenin和TCF-4表达并抑制肺癌BE1细胞的增殖和侵袭

背景与目的Axin是Wnt通路的重要负性调节因子,其低表达和β-catenin、TCF-4的高表达与多种肿瘤有关。本研究旨在探讨axin在肺癌细胞中的表达与β-catenin和TCF-4的关系,及其对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法将axin基因转染入axin低表达的肺癌BE1细胞系,应用免疫荧光方法观察转染组和对照组细胞中axin的表达对β-catenin和TCF-4的影响;采用RT-PCR方法检测axin和β-catenin、TCF-4mRNA表达的变化;采用流式细胞术、MTT和Transwell检测肺癌细胞凋亡、增殖和侵袭能力的变化。结果肺癌BE1细胞转染axin基因后(BE1-axin),axin的mRNA和蛋白水平均明显增加,β-catenin蛋白表达明显减少,TCF-4的蛋白和mRNA表达均明显下降。同时,BE1-axin细胞的凋亡率增加,增殖和侵袭能力明显下降。结论Axin过表达能下调β-catenin的蛋白表达和TCF-4的转录,抑制肺癌细胞的增殖和侵袭能力,并诱导肺癌细胞凋亡。

RSF-1与肿瘤关系的研究进展及相关作用机制

重塑因子-1(Rsf-1)是位于人类染色体11q13.5区域的RSF基因的表达产物。Rsf-1是ATP依赖型染色质重塑酶中的一个亚单位,其作用为通过改变核小体的空间相对位置来影响DNA的转录情况。Rsf-1的高表达常见于卵巢癌、肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、胆囊癌、膀胱癌、结直肠癌、鼻咽癌以及宫颈癌等,其表达情况往往与肿瘤大小、肿瘤分期(TMN)、耐药以及患者的预后等情况密切相关。本文总结了以往报道中关于Rsf-1在不同部位的不同肿瘤中的表达情况及意义,并对Rsf-1可能的作用机制进行了归纳。

染色质解旋酶DNA结合蛋白与肿瘤关系的研究进展

染色质解旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)属于染色质重塑酶,其既能重塑染色质促进基因转录,又能正向调控p53/p19arf控制细胞增殖、凋亡和衰老。目前,已经在神经母细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌、肺癌等多种肿瘤中发现CHD5的缺失并发现其低表达与肿瘤的发生、发展、预后情况有关。在多种肿瘤中,CHD5基因出现单链或双链缺失,以及高甲基化现象,导致其表达下调。可见,CHD5通过遗传学和表观遗传学机制共同控制肿瘤进展,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。

肺癌组织中Atonal homolog 1与Disabled-2的表达及其临床意义

目的:分析Atonal homolog 1(Atoh1)和Disabled-2(Dab2)在肺癌组织中的表达及其与临床病理因素间的关系。方法:采用免疫组化方法检测Atoh1和Dab2在100例非小细胞肺癌中的表达情况。结果:在100例非小细胞肺癌中,Atoh1的细胞质和细胞核的平均阳性表达率分别为82.70%±19.06%和43.10%±27.16%,明显高于Atoh1在癌旁正常组织中的细胞质和细胞核的平均阳性表达率(71.80%±19.14%,18.77%±10.54%)。Atoh1在细胞核内的表达与肺癌的低分化(P=0.026)负相关,并且在肺腺癌(P=0.002)和女性患者(P=0.042)中阳性率较高。Dab2在细胞核内的表达与肺癌的原发灶T分期负相关(P=0.025),并且与肺癌的TNM分期相关(P=0.002)。Atoh1在肺癌中的细胞质表达与Dab2的细胞质表达显著相关(P<0.001)。结论:Atoh1在细胞核内的表达与肺癌的低分化负相关,Dab2在细胞核内的表达与肺癌患者TNM分期负相关。Atoh1和Dab2在肺癌组织中可能具有协同表达的现象。

Rsf-1在星形细胞瘤中的表达及其与临床病理因素的关系

目的:星形细胞瘤是中枢神经系统最常见的神经上皮性肿瘤,高级别的星形细胞瘤呈浸润性生长并且预后不良,重塑因子-1(Rsf-1)是位于人类染色体11q13.5区域的RSF基因的表达产物,在多种恶性上皮性肿瘤中都有异常高表达的现象,并且与多种肿瘤的恶性进展及不良预后相关,本文旨在研究Rsf-1在星形细胞瘤中的表达及其与患者临床病理因素的关系。方法:选取2006年至2012年间星形细胞瘤术后石蜡标本130例,WHO组织学分级Ⅰ-Ⅳ级,通过免疫组织化学染色检测Rsf-1在星形细胞瘤中的表达水平。应用卡方检验统计Rsf-1的表达与患者临床病理因素的关系,Kaplan-Meier分析Rsf-1的表达与患者预后的关系。结果:Rsf-1在部分的星形细胞瘤中异常高表达(63/130),并且其高表达与肿瘤大小、WHO分级及Ki-67指数呈正相关(P<0.01),而与年龄、性别和肿瘤的发生部位没有明显关系(P>0.05),Kaplan-Meier曲线表明Rsf-1的高表达与星形细胞瘤患者不良预后呈正相关(P<0.001)。结论:Rsf-1的在星形细胞瘤中异常高表达,并且与肿瘤大小、WHO分级、Ki-67指数及不良预后等关系密切,Rsf-1可能在星形细胞瘤的发生发展中发挥作用。

曲古霉素A对胶质瘤细胞系U251增殖与侵袭的调节作用

目的:探讨曲古霉素A(Trichostatin A,TSA)处理对胶质瘤细胞系U251增殖和侵袭的调节作用。方法:分别将浓度为200ng/ml、400ng/ml和800ng/ml的TSA加入胶质瘤细胞系U251中。Western blot法检测乙酰化组蛋白H3和H4表达。MTT法检测不同浓度处理组中细胞的增殖能力。Transwell细胞侵袭实验检测不同浓度处理组和对照组中细胞侵袭能力。结果:TSA处理后的U251细胞中乙酰化组蛋白H3和H4表达明显上调(P<0.01)。MTT结果显示U251细胞经TSA处理后的增殖能力明显减弱(P<0.01),且具有剂量依赖性。Transwell细胞侵袭实验显示TSA处理后,U251细胞的侵袭细胞数明显减少(P<0.01),也具有剂量依赖性。结论:TSA可以比较有效地抑制胶质瘤细胞系U251的增殖和侵袭能力,为临床治疗胶质瘤提供了新思路。

MicroRNA-34a对多种肿瘤细胞迁移的影响及其作用机制探讨

MicroRNA-34a是p53信号通路的核心成分,在多种肿瘤中表达下调,被认为是一种抑癌的microRNA,并且与肿瘤干细胞有着密切的联系。MicroRNA-34a可直接抑制多种信息调控因子、细胞周期蛋白的表达,进而抑制细胞增殖、抑制细胞迁移和侵袭、促进细胞衰老和凋亡,从而达到抑癌效果。细胞迁移是肿瘤细胞侵袭和转移的先决条件,是肿瘤发生发展的重要过程。MicroRNA-34a的低表达常见于乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、胃癌、结肠癌、骨癌等,这种低表达往往与细胞迁移能力增强有关,最终加剧肿瘤转移扩散。本文总结了近期关于microRNA-34a对不同种类肿瘤细胞迁移的影响及其作用机制,并进行了分析与归纳。

Axin基因异常高甲基化对肺癌细胞生物学行为的调节

目的体轴抑制因子Axin是Wnt信号传导通路的关键抑制因子,本研究探讨部分肺癌细胞系中Axin表达下调的原因,及其表达下调对肺癌生物学行为的影响。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)对BE1和SPC-A-1细胞系中Axin基因启动子区和第一内含子区的甲基化状态进行了检测,应用RT-PCR方法检测了两细胞系中AxinmRNA表达。利用野生型Axin质粒转染两种细胞,并且应用MTT和Transwell细胞侵袭实验观察两种细胞系在转染后细胞生物学行为的变化。结果 BE1细胞中Axin基因的启动子区和第一内含子区为高甲基化状态,而SPC细胞为非甲基化状态,BE1细胞中AxinmRNA的表达明显低于SPC细胞系(P<0.05),5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine)作用于BE1细胞可以使高甲基化的Axin基因去甲基化并上调Axin的转录。转染野生型Axin可以明显抑制BE1细胞和SPC-A-1细胞的增殖和侵袭(P<0.05),其中BE1细胞受到的抑制程度更为明显。结论 Axin基因高甲基化可能是其在肺癌中表达下调的重要原因,过表达Axin可以明显抑制Axin高甲基化肺癌细胞的增殖和侵袭能力。

Axin抑制肺腺癌SPC-A-1细胞系侵袭的作用和可能机制

目的 Wnt通路的异常激活与恶性肿瘤的发生和进展关系密切,我们在前期研究中发现肺癌中也有Wnt通路异常激活的现象,而体轴抑制因子Axin是Wnt通路的抑制因子,本研究的目的是探讨Axin对肺癌细胞侵袭力的影响及其机制。方法构建野生型和突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变),转染人肺腺癌SPC-A-1(SPC)细胞,应用GSK-3βsiRNA阻断β-catenin的降解,Western bolt检测各处理组细胞中β-catenin和MMP-7的变化,Transwell检测各处理组细胞侵袭能力的变化。结果转染野生型Axin明显的下调β-catenin和MMP-7的蛋白表达以及SPC细胞的侵袭力(P<0.01),而GSK-3βsiRNA可以阻断Axin的这种功能,转染突变型Axin不能有效的下调β-catenin和SPC细胞的侵袭能力。结论 Axin抑制SPC细胞的侵袭力,可能与其下调β-catenin,负向调控Wnt通路有关,Axin可能成为临床治疗肺癌的新靶点。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肺癌细胞系BE1和LTEP-α-2中Axin基因表达及细胞增殖的影响

目的本研究的目的是探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza)对人肺癌细胞系BE1及LTEP-α-2的增殖和侵袭的调节及其可能的机制。方法两个细胞系均应用5-Aza进行处理,并应用MTT法检测两细胞系经5-Aza处理后细胞增殖能力的变化,Transwell法检测了两细胞系处理后侵袭能力的变化,Westernblot检测Axin、β-catenin、cyclin D1和MMP-7的表达。结果 5-Aza抑制BE1和LTEP-α-2细胞的增殖和侵袭能力(<0.05),与LTEP-α-2细胞系相比,BE1细胞系受抑制程度更为明显(<0.05)。5-Aza上调BE1细胞中Axin的表达,抑制β-catenin、cyclin D1和MMP-7的表达,但对LTEP-α-2细胞中Axin等的表达没有明显的影响。结论 5-Aza可以抑制肺癌细胞的增殖和侵袭,BE1细胞中的Axin基因可能存在异常高甲基化,高甲基化的Axin基因可能成为未来治疗肺癌的靶点。

非小细胞肺癌中Axin基因启动子区异常高甲基化与临床病理因素的关系

目的体轴抑制因子(Axin)是Wnt信号传导通路的关键抑制因子,其基因启动子区存在CpG岛,本研究的目的是探讨非小细胞肺癌组织中Axin基因启动子区是否存在异常高甲基化,以及高甲基化对Axin转录水平的影响,及其与肺癌患者临床病理因素的关系。方法应用巢式甲基化特异性PCR(Nested MSP)对98例肺癌组织及其配对癌旁正常肺组织中Axin基因启动子区的甲基化状态进行了检测,同时应用RT-PCR方法检测了肺癌组织及其配对癌旁正常肺组织中Axin mRNA的水平,并且通过卡方检验统计Axin基因启动子区高甲基化状态与肺癌患者临床病理因素的关系。结果部分非小细胞肺癌组织中Axin基因启动子区处于高甲基化状态(42/98),而其配对的癌旁正常肺组织中Axin基因处于半甲基化或非甲基化状态(56/98),高甲基化的肺癌组织中Axin mRNA的水平明显低于其配对癌旁正常肺组织及非高甲基化的肺癌组织中Axin mRNA的水平;Axin基因启动子区异常高甲基化与非小细胞肺癌患者的分化程度负向关,与TNM分期及淋巴结转移正相关。结论非小细胞肺癌中Axin基因启动子区高甲基化与Axin的转录水平和非小细胞肺癌的分化程度负相关,与TNM分期及淋巴结转移正相关。

肺癌组织Axin与DNMT1表达及其生物学意义的探讨

目的:分析Axin和DNA甲基转移酶1(DNMT1)在肺癌组织中的表达和相关性,及其与肺鳞癌和腺癌临床病理因素的关系。方法:采用免疫组化方法检测Axin和DNMT1在100例肺癌组织中的表达情况。结果:Axin在肺鳞癌和腺癌组织中表达明显减少,其细胞质表达与肺癌的分化程度相关(P=0.044),核表达与肺癌的组织学类型(P=0.001)和TNM分期(P=0.016)相关。DNMT1在肺癌组织中的表达明显增加,并与肺鳞癌和腺癌的组织学类型(P=0.005)、分化程度(P=0.038)、TNM分期(P=0.031)和淋巴结转移(P=0.032)显著相关。Axin在肺癌组织中的低表达与DNMT1高表达显著负相关(r=-0.222,P=0.027),而在肺腺癌组织中Axin的核表达也与DN-MT1的表达显著负相关,r=-0.308,P=0.026。结论:Axin在肺鳞癌和腺癌组织中的低表达与DNMT1的高表达显著相关。DNMT1的表达可以作为肺癌恶性程度和进展情况的指标之一。

肺癌组织Disabled-2与Axin的表达及临床意义

目的:分析Disabled-2(Dab2)和Axin在肺癌组织中的表达和相关性,及其与肺鳞癌和腺癌临床病理因素的关系。方法:采用免疫组化方法检测Dab2和Axin在110例肺鳞癌和腺癌组织中的表达情况。结果:在110例肺鳞癌和腺癌中,Dab2的表达(高表达21.82%、中等表达46.36%、低表达31.82%)低于癌旁正常肺组织(高表达58.24%、中等表达36.55%、低表达5.21%,P<0.001),并与肺癌的组织学分型有关,P<0.001。Dab2可在肺癌细胞核内表达,但表达率明显低于癌旁正常肺组织,并且与肺癌的分化程度相关,P=0.027。Axin的细胞质表达与肺癌的分化程度相关(P=0.032),而Axin的核表达与肺癌的腺癌组织学类型(P<0.001)和TNM分期(P=0.013)相关。Dab2在肺癌细胞质中的低表达与Axin的低表达显著相关(r=0.354,P<0.001),同时,Dab2的核表达也与Axin的核表达显著相关(r=0.399,P<0.001)。结论:Dab2在肺鳞癌和腺癌中表达明显减少。Dab2的核表达与肺癌的分化程度相关。Dab2和Axin在肺癌组织中可能具有协同表达的现象。

中枢神经细胞瘤的病理研究

目的对8例脑中枢神经细胞瘤病例进行研究,探讨其组织学、免疫组化和超微结构特点。方法对2000～2012年间8例脑室肿瘤进行组织学观察,用免疫组化检测几种重要的肿瘤标记物的表达,其中包括细胞角蛋白(广谱)CK、上皮膜抗原(EMA)、波形蛋白(Vimentin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经突触素(Syn)、S100和Ki67。结果对8例中枢神经细胞瘤进行组织学检查,结果显示该肿瘤具有一定的形态学特点,肿瘤细胞呈现片状排列或不规则的"菊形团"样排列,也可见肿瘤细胞围绕血管形成"假菊形团",肿瘤细胞形态单一,细胞多呈圆形,细胞核圆形或卵圆形,染色质细腻呈斑点状。免疫组化结果显示8例中枢神经细胞瘤CK、EMA和vimentin染色均为阴性,GFAP阳性者5例,Syn阳性者8例,S100阳性者4例,8例Ki67染色均为阳性,但比率较低,均为1%～3%。结论中枢神经细胞瘤具有较为典型的形态学特征和免疫组化染色特点,这些特点对中枢神经细胞瘤的诊断具有重要的提示作用。

星形细胞瘤中HMGN5的表达及与临床病理因素的关系

目的探讨高迁移率族蛋白N5(high mobility group N5,HMGN5)在星形细胞瘤中的表达及其与星形细胞瘤患者临床病理因素的关系。方法选取2007-2011年间星形细胞瘤术后石蜡标本117例,WHO组织学分级I-IV级,通过免疫组织化学染色检测HMGN5在星形细胞瘤中的表达水平。应用卡方检验统计HMGN5的表达与患者临床病理因素的关系,Kaplan-Meier分析HMGN5的表达与患者预后的关系。收集6例星形细胞瘤和2例正常脑组织标本,用Western blot检测HMGN5的表达。结果 HMGN5在部分星形细胞瘤中异常高表达(58/117),并且其高表达与肿瘤体积、WHO分级及Ki-67指数呈正相关(P<0.001),而与年龄、性别和肿瘤的发生部位没有明显关系(P>0.05)。Kaplan-Meier曲线表明HMGN5的高表达与星形细胞瘤患者不良预后正相关(P<0.001),Western blot结果显示HMGN5在肿瘤组织中的表达水平与WHO分级正相关。结论 HMGN5可能在星形细胞瘤的发生发展中发挥作用。