昆明地区无偿献血者HIV感染的流行特征

目的分析昆明地区无偿献血者中HIV的流行状况,为招募和选择无偿献血者提供依据。方法收集昆明地区2000年以来献血者的相关资料,对确认HIV阳性献血者进行统计分析。结果昆明地区无偿献血人群中HIV呈高流行态势,且逐年上升,包括大学生在内的无偿献血主要社会群体中,均发现了相当数量的感染者。结论昆明地区HIV已经从高危人群向普通人群传播,并呈现扩散趋势;做好献血者招募和选择,对确保输血安全非常重要。

应用浓缩红细胞和少白细胞红细胞制剂发生输血反应的调查分析

推广成分输血，提高输血疗效，减少输血反应，是当今输血技术的一大进步。浓缩红细胞(Red Blood Cell Concentrate，RCC)和少白细胞红细胞(Leukocyte-Poor Red Blood Cell，LP-RBC)是目前血站供给临床使用较多的血液成分制剂。随着血液质量的提高，临床上细菌性发热反应和ABO血型不合的溶血性输血反应已很少发生，约90％的输血反应系非溶血性、非细菌性输血反应，这些反应大多与输入的白细胞有关，因白细胞抗体的产生而造成输血失败。为此笔者对RCC和LPRBC制剂在临床使用时发生输血反应的情况进行调查分析，以了解两种血液成分与输血反应的关系。

昆明“3·01”暴恐事件血液保障及思考

2014年3月1日发生在昆明的暴力恐怖事件（以下简称＂3·01＂暴恐事件）引起了全世界的关注,牵动了全国人民的心,可以说昆明＂3·01＂暴恐事件就是一场血腥的屠杀平民事件,造成当日31人死亡,141人受伤,由于事件本身的特殊性,一时间临床医疗急救用血突然暴增,面对这突如其来的灾难,我们采取了果断应对措施,保证了临床医疗急救用血的需要,取得了一些经验。

建立云南省采供血集中检测体系的构想

借鉴发达国家开展血液集中检测的经验,结合云南省实际情况,按照国家新颁布的《血站管理办法》提出的集中检测要求,对即将开展的血液样品集中检测进行初步设计,分析全省采供血系统中现实状况,提出建立符合云南省实际的集中化检测体系的基本设想。

酶处理细胞检测低效价Rh抗体的研究

目的探讨用不同的试验方法来检测低效价Rh抗体。方法采用盐水法、抗球蛋白法、聚凝胺三步法对不同效价的抗-D、-E、-C、-c、-e试剂对酶处理和非酶处理细胞进行检测,观察各自的灵敏度。结果在上述3种方法中,经酶处理的细胞能够检测出低效价的Rh抗体,聚凝胺方法比抗球蛋白方法更灵敏。结论在抗体筛选、交叉配血、新生儿溶血病等的检测中只使用非酶处理细胞来检测,可能会出现假阴性的结果,漏检部分含有低效价的Rh系统抗体。

云南汉族人群KIR基因多态性研究

目的分析云南汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(K IR)基因的多态性及基因型和单倍型特点。方法从献血者中随机选择150名无亲缘关系的云南汉族健康志愿者,采用序列特异性引物PCR法(PCR-SSP)对其进行KIR基因低分辨率检测,并根据Hsu等[5]的标准进行基因型和单倍型分析。结果在云南汉族人群中共检出目前已知的17个KIR基因,其中3DL3、2DL4、3DP1和3DL2框架基因存在于所有个体。2DL1、2DL3、2DP1、3DP1*003、3DL1、2DS4*001/002基因较为常见,而2DL2、2DL5A、2DL5B、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4*003、2DS5、3DS1和3DP1*001/002基因频率较低。在云南汉族人群中共检出31种基因型,最常见基因型为AJ(2,2)和AF(1,2)型,频率分别为26.67%和17.33%。同时检出15种单倍型,以单倍型2最为常见,频率为47.3%。此外,还发现2种新基因型目前在其他人群中尚未见报道,3种基因型无法根据Hsu等[5]的标准模式分析出单倍型。结论云南汉族人群K IR基因分布表现出中国汉族人群K IR多态性的一些共同特点,同时具有其独特的KIR基因频率、单倍型频率和基因型频率分布。

弓形虫SYBR-Green1荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的建立SYBR-Green1荧光定量PCR检测弓形虫的方法,并进行实验室方法学评价。方法常规PCR扩增弓形虫RH株高度保守的B1基因部分序列,经TA克隆后转化入大肠埃希菌JM109中。提取重组质粒,PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR-Green1荧光定量PCR标准曲线,并做重复性试验,对桂弓、B36虫株及恶性疟原虫、血吸虫基因组DNA、30份孕产妇标本1、221份无偿献血者标本进行检测。结果用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数0.997,平均试验间变异系数0.81%,检测桂弓、B36虫株均为阳性,而检测血吸虫、恶性疟原虫基因组DNA均为阴性;孕产妇检测阳性率16.7%,平均拷贝数为1.19×105cop-ies/μl;无偿献血者阳性率为0.74%,平均拷贝数为1.17×105copies/μl。结论成功建立了检测弓形虫B1基因的SYBR-Green1荧光定量PCR方法,较常规PCR技术更快捷、敏感、准确,适合临床实验室及无偿献血者的筛查使用。

昆明、洛阳两地献血者人群HBV携带者的HBV基因型分布

目的调查昆明、洛阳两地献血者人群HBV携带者HBV基因型的分布情况。方法采用多对型特异性引物,以套式PCR的方法对两地367份献血者HBsAg筛查阳性样本分型,根据HBV前s1基因和s基因区域内的保守序列设计出10条引物(2条外引物、8条内引物),并将其中8条内引物分为Ⅰ、Ⅱ组,分别扩增A、B、C和D、E、F型HBV基因片段;将第2轮PCR产物做琼脂糖电泳,根据PCR产物片断大小判定基因型;分型结果以s基因直接测序法验证。结果昆明279份样本中成功分型214例,分型成功率76.7%,其中B型69例(32.2%),C型103例(48.1%),B、C混合型41例(19.2%);D型1例(0.5%);洛阳献血者的88份样本中成功分型72例,分型成功率81.8%,其中B型10例(13.9%),C型46例(63.9%),B、C混合型16例(22.2%)。经s基因测序法验证,该分型方法准确可靠。结论昆明、洛阳两地献血者人群中HBV携带者HBV基因型均以C型为主,并有一定比例的B型和B、C混合型,仅在昆明献血者中发现1例D型,未见A、E、F型。

冰冻红细胞解冻后残留甘油含量测定方法初探

目的 建立快速测定冰冻红细胞中残留甘油含量的方法。方法根据GPO PAP法测定甘油三脂的部分原理 ,将甘油用甘油激酶及三磷酸腺苷 (ATP)磷酸化 ,再以磷酸甘油氧化酶 ,氧化三磷酸甘油 ,生成H2 O2 ,并以4 氨基安替比林 (4 AAP)与 4 氯酚显色 ,显色程度与甘油含量成正比。结果含甘油 2 0 0 /L与 1 2 0 0 /L的样本批内CV值分别为 4 .4 9%、3.5 3% ,日间CV值为 4 .6 % ;甘油含 75 0～ 2 0 0 0 /L样本的回收率为 96 %～ 1 0 3% ;甘油浓度在 2 5 0～ 2 0 0 0 /L有较好的线性关系 ,r =0 .9999,Y =0 .0 0 0 5 6 2X +0 .0 0 0 7。结论甘油磷酸氧化酶法测定冰冻红细胞中残留甘油含量 ,具有方法简单、快速、特异、灵敏之特点 ,结果客观、准确。

中国汉族Rh(-)个体D基因完整者与C基因的关联调查

目的观察中国汉族非血缘关系随机个体和家系的Rh阴性D基因完整者与C基因间的关系。方法用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)扩增技术,扩增Rh血型C/E基因,D基因的外显子,检测192例RhD阳性个体,166例RhD阴性个体的血样品。结果192例RhD阳性个体,均有D基因8个外显子。在166例RhD阴性个体中,100例有ce/ce或ce/cE基因型的个体RHD外显子阴性;66例有Ce/Ce或Ce/ce基因型的个体中,34例RHD外显子完整,19例RHD外显子部分完整,13例RHD外显子阴性。结论中国人RhD阴性个体D基因完整者与C基因间可能存在联系,其在中国各民族、各地区Rh阴性个体中的发生频率和机制有待于进一步调查。

基因分型技术应用于疑难ABO血型的分型

目的研究基因分型技术在疑难ABO血型鉴定中的应用。方法采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(PCR-SSP)基因分型方法,对医院送检的16例患者疑难ABO血型抗原进行基因分型。结果 16例ABO基因分型分布为5例O1O1、1例O1O2、3例BO1、4例A1O1型、3例A1A。结论作为一种辅助方法,ABO血型基因分型技术可应用于检测ABO疑难血型。

云南省无偿献血者弓形虫感染状况

目的了解云南省无偿献血者弓形虫感染情况,为制定科学的防治措施提供依据。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测献血者血清弓形虫IgM和IgG抗体,对血清学阳性和随机选取的200份血清学阴性血样进行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,并对两种方法的检测结果进行相关性分析。结果云南省无偿献血者弓形虫IgM、IgG阳性率分别为0.47%和20.15%,IgM与FQ-PCR阳性结果的相关性有显著性,IgG与FQ-PCR阳性结果的相关性无显著性。结论云南省无偿献血者弓形虫IgG阳性率较国内其他地区高,考虑成本因素,可采用检测弓形虫IgM的方法进行献血者筛查。

罕见抗-Di^b1例及Diego稀有血型基因筛查的意义

目的国内外有患者由于输血产生抗-Dib和由于抗-Dib产生新生儿溶血的报道,通过临床发现1例罕见抗-Dib的病例,探讨Diego稀有血型基因筛查的意义。方法用血清学方法进行血型检测,盐水法、凝聚胺法和抗球方法进行抗体筛查和鉴定,抗球蛋白法测定效价;用PCR-SSP方法进行Diego血型Dia和Dib基因筛查。结果患者,女,63岁,全血细胞减少,冠心病。A型,RhD阳性,既往3次妊娠,流产1次,现输血2次后出现发热反应。血清学用盐水法患者血清与谱细胞不凝集,凝聚胺法和抗人球方法凝集均为2+,抗体鉴定为抗-Dib阳性,效价256。

采供血机构HIV筛查方法和策略的应用及评价

目的对采供血机构使用第4代HIV检测试剂后出现的检测结果变化进行分析,探讨适合献血者HIV筛查的新策略。方法按照《全国艾滋病检测技术规范(2004版)》规定的要求对本中心64003名献血者进行检测,采用统计学方法分析223例第3代和第4代试剂检测的阳性结果。结果使用第4代试剂,献血者HIV初筛阳性人数有较大增加。经统计学检验其与第3代试剂差异有统计学意义,而且造成了较多的血液报废和结果确认的困难。结论有必要对现有的筛查策略进行调整,探索和建立适应新的检测技术和方法的筛查策略。

云南汉族血小板献血者HLA-A、B和HPA基因多态性的分析

目的研究云南地区汉族血小板献血者HLA-A、B基因和HPA1-17基因多态性,建立已知型血小板献血者基因数据库。方法分别采用PCR-SSOP和PCR-SSP方法对1 000名云南地区无血缘关系的汉族血小板献血者做HLA-A、B和HPA1-17系统基因分型,计算基因型频率、基因频率,并与其他人群进行比较。结果在云南地区人群中共检出HLA-A位点14个,HLA-B位点35个。A*02(35.81%)、A*11(35.42%)和A*24(17.72%)3个等位基因为云南汉族人群HLA-A座位的主要等位基因;B*46(12.87%)、B*40(60)(10.83%)和B*15(62)(9.78%)3个等位基因为云南汉族人群HLA-B座位的主要等位基因。每个样本均检测到HPA-1a、2a、4a-14a、16a、17a基因;HPA-4a、7a-14a、16a、17a呈现单态性,未检测出相应的等位基因HPA-b;对于HPA-1、2、5、6主要以a/a纯合子居多,a/a基因型频率分别是0.989、0.960、0.990、0.980,没有b/b纯合子出现。在HPA1-17中,具有最高杂合度的是HPA-15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.392、0.360、0.248;HPA-3在其次,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.339、0.467、0.194。经χ2检验,结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。结论云南地区汉族血小板献血者HLA-A、B和HPA1-17基因频率与南方汉族接近,也呈现其自身特点。应建立本地区的血小板供者分型数据库。