非肌肉肌球蛋白重链-9在骨肉瘤组织中的表达及其对细胞上皮间质转换和侵袭能力的影响

目的非肌肉肌球蛋白重链-9(MYH9)对肿瘤的发生发展具有重要的调控作用,文中旨在探讨MYH9在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞上皮间质转换(EMT)和侵袭能力的影响。方法收集52例骨肉瘤癌组织及距肿瘤边缘5cm处的癌旁组织,RT-PCR和免疫组化检测骨肉瘤癌组织和癌旁组织中MYH9的mRNA和蛋白表达水平。脂质体法转染U2-OS细胞MYH9 shRNA表达质粒,沉默MYH9表达,转染后将细胞分成3组:以正常的U2-OS细胞为对照组、以转染空质粒的U2-OS细胞为空载组和以转染MYH9 shRNA的U2-OS细胞为干扰组。采用RT-PCR检测转染后U2-OS细胞MYH9的mRNA水平,Western blot检测U2-OS细胞转染后MYH9以及EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的蛋白水平变化,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力变化。结果 RT-PCR检测结果表明,癌旁组织中MYH9 mRNA的相对表达量(1.526±0.148)较癌组织(3.547±0.195)明显减少(P<0.05);免疫组化检测结果表明,MYH9蛋白在肿瘤组织中主要表达于细胞质中,且MYH9蛋白在癌组织中表达显著高于癌旁组织,其阳性表达率分别为59.6%(31/52)和26.9%(14/52),差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果表明,沉默MYH9基因表达后,干扰组MYH9 mRMA相对表达量和蛋白水平较对照组和空载组明显降低(P<0.05)。与对照组相比较,干扰组骨肉瘤细胞U2-OS中E-cadherin蛋白明显上调,Vimentin蛋白出现下调。Transwell实验表明,48 h后各组均有穿出微孔滤膜的细胞,干扰组穿出微孔滤膜的细胞[(41.2±15.1)个]较对照组[(117.3±12.4)个]和空载组[(193.5±14.7)个]明显减少(P<0.05)。结论 MYH9蛋白在骨肉瘤组织中表达显著高于癌旁组织,沉默MYH9可以通过降低骨肉瘤细胞上皮间质转换来降低骨肉瘤的侵袭能力。

p73基因不同异构体模式对U2OS细胞顺铂敏感性的影响

目的研究骨髓瘤细胞中p73不同异构体表达模式对该细胞顺铂敏感性的影响。方法将化学合成的针对p53的si RNA序列转染至U2OS细胞,建立U2OS-p53细胞,以Western印迹法检测转染效率。采用溶剂对照、5、10、20、6和40μmol/L的顺铂处理处于对数生长期的U2OS-p53细胞。采用MTT比色法检测U2OS-p53细胞的生长率变化,采用流式细胞术分析U2OS-p53细胞凋亡变化情况,采用Western印迹方法检测U2OS-p53细胞中TAp73、DNp73、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果顺铂处理显著降低了U2OS-p53细胞生长率(P<0.01),促进了U2OS-p53细胞凋亡水平(P<0.01);TAp73和DNp73蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且TAp73的升高趋势强于DNp73,使得TAp73/DNp73蛋白表达比显著升高(P<0.01);Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01),但Bcl-2蛋白表达水平变化不明显(P<0.01),使得Bax/Bcl-2比值随之显著升高(P<0.01)。结论TAp73/DNp73比值的增加可显著提高U2OS-p53对化疗药物顺铂的敏感性,p73不同异构体表达模式将有可能作为骨髓瘤基因治疗的新靶点。

RNA干扰p21联合顺铂对U2OS细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰siRNA联合顺铂对骨髓瘤细胞U2OS增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的针对p21的siRNA序列转染至U2OS细胞,分为5组:空白对照组、阴性对照组、干扰组、顺铂组、联合组(干扰+顺铂)。采用MTT比色法、流式细胞术和分光光度法分别检测U2OS细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族成员Caspase-9、Caspase-3和Caspase-6的活化程度。结果 p21siRNA转染后,相对于顺铂处理组,联合组细胞死亡率明显升高(P<0.01);细胞周期各时相重新分布,G0/G1期细胞显著减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞则明显增多(P<0.01);Caspase-9、Caspase-3和Caspase-6的活化程度显著升高(P<0.01)。结论 p21靶向RNA干扰联合顺铂处理通过调节细胞周期进程而促进了细胞凋亡,p21可作为骨髓瘤基因治疗的后选新靶点。

加强高校信息安全教育探讨

随着信息化脚步的加快,信息安全问题也日益突显。在加大信息安全系统投入的同时,培养专业信息安全人才成为确保信息系统安全的关键。加强高校信息安全教学,可以加快信息安全技能型人才的培养。就当前信息安全教育方面存在的问题,从其内容、方法、途径等方面进行了探讨。

负压引流技术治疗大鼠股骨骨髓炎的实验研究

目的探讨负压引流技术(VSD)在大鼠股骨骨髓炎动物模型上的治疗效果,为VSD在临床上的应用提供前期的基础性实验研究。方法首先将金黄色葡萄球菌注射至大鼠股骨骨髓内复制大鼠股骨骨髓炎模型。然后待模型制备成功后,将大鼠均分为5组,分别为VSD治疗1、3、5和7 d组,以及模型组,VSD组采用VSD进行治疗,模型组进行普通的换药治疗。最后通过大体观察、体温、创面细菌计数,确定VSD负压治疗大鼠股骨骨髓炎的效果。结果造模过程中大鼠体温上升,体重下降,精神萎靡、进食减少,双下肢活动不便,感染局部红肿,1周后伤口局部出现渗液、流脓。经过VSD治疗后小鼠体温回复正常,创面无分泌物,并且随着治疗时间的延长,创面细菌数显著减少,且变得干燥、颜色红润,新鲜肉芽生长良好。结论金黄色葡萄球菌复制大鼠股骨骨髓炎模型成功,成功率为90%;VSD负压引流治疗效果非常显著。

IL-38通过调控PI3K/Akt/GSK3β/NFATc1信号通路抑制骨质疏松的机制研究

目的:探讨IL-38抑制骨质疏松的作用并研究其分子机制。方法:共纳入2014年6月~2016年12月我院收治的138例骨质疏松患者作为研究对象。另选取120例同期在我院骨科进行骨折手术的无骨质疏松患者作为对照。采用ELISA法检测实验对象血清IL-38水平。构建IL-38-C57BL/6J转基因小鼠,建立骨质疏松小鼠模型,将野生型、IL-38转基因小鼠分别设置为假手术组(Sham组)与卵巢切除组(Ovariectomy,OVX组)。术后8周取小鼠血清,检测碱性磷酸酶(ALP)、血钙及血磷水平。另取小鼠的脊柱与双侧股骨,通过病理切片分析股骨组织形态结构,用骨密度仪检测脊柱骨密度变化。将各组小鼠的骨髓基质细胞(BMSCs)进行分离并检测其体外增殖能力,Western blot检测各组BMSCs的PI3K、Akt、GSK3β与NFATc1的磷酸化水平。小鼠成骨细胞MC3T3-E1转染IL-38后,Western blot检测PI3K、Akt、GSK3β与NFATc1磷酸化水平的变化,流式细胞术检测IL-38对细胞凋亡的影响。结果:骨质疏松组患者的血清IL-38水平显著低于对照组(P<0.05)。野生型与IL-38转基因OVX小鼠的血钙、血磷水平均显著高于Sham组(P<0.05),而ALP水平显著低于Sham组(P<0.05)。另外,IL-38转基因OVX小鼠的血钙和血磷水平均显著低于野生型OVX小鼠(P<0.05)。股骨病理切片及脊柱骨密度分析显示,野生型与IL-38转基因OVX小鼠均出现骨组织形态结构破坏和骨密度下降,并且IL-38转基因OVX小鼠的骨组织形态结构破坏和骨密度下降情况均较野生型OVX小鼠显著减轻(P<0.05)。IL-38转基因OVX小鼠BMSCs的体外增殖能力显著高于野生型OVX组(P<0.05)。IL-38转基因OVX小鼠BMSCs的PI3K、Akt与NFATc1磷酸化水平均显著低于野生型OVX组(P<0.05),GSK3β磷酸化水平显著高于野生型OVX组(P<0.05)。MC3T3-E1细胞转染IL-38后PI3K、Akt与NFATc1的磷酸化水平均显著降低(P<0.05),GSK3β的磷酸化水平显著升高(P<0.05)。流式细胞检测显示转染IL-38后MC3T3-E1细胞的凋亡显著减少(P<0.05)。结论:骨质疏松患者的血清IL-38水平显著降低,IL-38可能通过调控PI3K/Akt/GSK3β/NFATc1信号通路促进BMSCs增殖、抑制成骨细胞凋亡,从而抑制骨质疏松的进展。

水稻旱秧床综合利用技术与效益

水稻旱秧床综合利用技术与效益朱建明赵明海杨钟华万恒支句容市稻区主要分布于我省宁镇丘陵地区。近三年，全市大面积推广了水稻肥床旱育秧技术，在加速水稻秧苗旱育化进程的同时，重视了旱秧田的综合开发利用，不但提高了旱秧田的综合经济效益，而且经多元多熟种植，一床...

美国甜玉米试种初析

美国甜玉米试种初析杨金龙陈笃江朱建明吕守怀谢绪定杨钟华谈海红邢宗顺１９９７年，句容市下蜀镇裕裸村和茅山镇茅山村首次从农业部引种了美国甜玉米一、二、三号品种。下蜀镇裕裸村属沿江洲地，地力中等偏上，茅山镇茅山村，地力偏差，两试点均无隔离条件。１甜玉米的生...

水稻地膜覆盖保水栽培的农艺特性及操作技术

节水农业是世界农业生产面临的难题,为探索水稻如何实现节水栽培,尤其是在水源紧缺的丘陵地区实现节水栽培,1999年在茅山镇实施了水稻地膜覆盖保水栽培试验。1 材料和方法采用大区对比的方法,试验点设在茅山镇茅山村下泊宫小组,试验田块面积1000ｍ2,为缺水高土旁田,土质?..

双低杂交油菜底施硼肥效果的研究

田间试验结果表明，在土壤有效硼含量0．25mg／kg的丘陵旱地上种植双低杂交油菜，底施硼肥具有明显的增产效果，要满足油菜丰产对硼素营养的需求，每亩底施硼砂需达到1kg的水平。

淫羊藿苷促进入骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究

目的探讨应用淫羊藿苷促进人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成软骨分化的可行性及效果。方法体外分离培养hMSCs，取第3代细胞实验。将hMSCs分别用无血清高糖培养基（H．DMEM）和含1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol／L淫羊藿苷的软骨诱导液（CM）诱导，显微镜下观察细胞形态变化，噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖。以5×10 9/L的细胞密度离心构建微团，诱导培养3周。逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA的表达。免疫组织化学、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达。结果5组微团分别由无血清H．DMEM、含1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol／L淫羊藿苷的CM诱导3周后，除H—DMEM组无Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达外，其他各组Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多糖的表达呈浓度依赖性增加，ImageProPlus6．0软件测得各组Ⅱ型胶原平均吸光度（A）值分别为0．0214±0．0035、0．1182±0．0105、0．1886±0．0184、0．2903±0．0261、0．3476±0．0287，各组差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论淫羊藿苷能促进hMSCs成软骨分化，软骨分化程度呈浓度依赖性增加。

生长分化因子5促进软骨细胞肥大成熟的实验研究

[目的]探讨生长分化因子5(GDF-5)在诱导成人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成软骨分化的同时,促进其肥大成熟的作用。[方法]体外分离培养hBMSCs,取第四代细胞实验。将细胞消化、悬浮,以5×106/ml的细胞密度进行高密度培养,分别用含0、500 ng/ml GDF-5的软骨诱导液(CM)诱导培养3、4周。免疫组化、甲苯胺蓝染色检测II型胶原、X型胶原和蛋白多糖的表达情况。荧光实时定量RT-PCR检测两组微团II型胶原、X型胶原和蛋白多糖mRNA的表达情况。[结果]实验组微团中的细胞体积较对照组稍大,细胞密度稍低。甲苯胺蓝和免疫组化染色结果显示各组微团均有Ⅱ型胶原、X型胶原和蛋白多糖的表达和分泌,且4周实验组的表达最为强烈。荧光实时定量RT-PCR检测示,干预后3周实验组II型胶原、蛋白多糖基因表达量明显高于3周对照组(P<0.05),但X型胶原基因表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05);干预后4周实验组X型胶原基因表达高于其余各组(P<0.05),Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因表达明显高于两对照组(P<0.05),但与3周实验组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]GDF-5在诱导细胞成软骨分化的同时,还可促进其成熟肥大。

微创小切口跟腱松解结合Ilizarov牵拉技术治疗外伤性跟腱挛缩

目的:探讨应用微创小切口跟腱松解结合Ilizarov牵拉技术治疗跟腱挛缩的临床疗效。方法:对2009年10月至2012年9月26例跟腱挛缩患者采用微创小切口跟腱松解结合Ilizarov牵拉技术进行治疗。结果:全部患者获得随访,平均随访时间达18个月,通过4-6个月牵拉矫形,患踝均矫形至或接近中立位,踝关节活动度从术前平均14°(10-20°)改善到38°(30-45°),患足行走负重满意。9例患者在牵拉过程中出现跖内侧皮肤疼痛,5例患者出现针眼无色渗液,无1例发生伤口或针眼感染、神经血管损伤或皮肤坏死等不良反应。结论:微创小切口跟腱松解结合Ilizarov牵拉技术是治疗跟腱挛缩的一种良好方法,值得推广。

钢板结合克氏针内固定治疗经尺骨鹰嘴肘关节骨折脱位

目的:探讨钢板结合克氏针治疗经尺骨鹰嘴肘关节骨折脱位的可行性及疗效。方法:对2008年8月至2010年12月一期后路采用钢板结合克氏针治疗25例经尺骨鹰嘴肘关节骨折脱位患者。男16例,女9例;年龄19-58岁,平均40.3岁。结果:23例患者得到随访,平均随访14个月,3例患者出现肘关节异位骨化,按Mayo标准评定肘关节功能,优7例,良13例,可3例,优良率达86.9%,所有患者对伤肘功能恢复状况表示满意。结论:一期后路采用钢板结合克氏针是治疗经尺骨鹰嘴肘关节骨折脱位安全有效的手术方法。

骨科患者感染的病原菌分布与耐药性研究

目的掌握医院骨科患者感染病原菌分布,降低和减少骨科患者发生感染的危险性,为临床治疗中抗菌药物的合理使用提供指导。方法选取2011年3月-2013年9月骨科病房患者1 000例作为观察对象,对患者伤口分泌物进行收集,严格无菌操作并立即送检,参考《全国临床检验操作规程》对患者送检的痰液、尿液、伤口渗出液等标本进行细菌分离培养纯化,对病原菌的检测和耐药性分析通过全自动微生物鉴定仪和K-B试验法进行,采用SPSS19.0进行统计分析。结果调查1 000例患者中共348例发生感染,感染率为34.80%;分离出426株病原菌,以革兰阴性菌为主,240株占56.34%;大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌对美罗培南和亚胺培南均无耐药菌检出,对青霉素类抗菌药物耐药率最高。结论骨科感染的影响因素多,不同细菌对同种抗菌药物的敏感性差异很大,因此应严格按照细菌培养结果和耐药试验结果合理应用抗菌药物,降低骨科患者感染率。

“自组装”工程化软骨修复体外关节软骨缺损的实验研究

[目的]探讨应用＂自组装＂工程化软骨修复体外关节软骨缺损的可行性及其转归。[方法]密度梯度离心法分离培养成人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,h MSCs）。将第3代h MSCs用含100 ng/ml GDF-5的软骨诱导液定向诱导,2周后重悬细胞,以5×10^6/ml的细胞密度接种于2%琼脂糖包被的24孔板,行自组装培养,2周后对标本行大体和组织学观察并采用生物化学法检测软骨相关的生物学特性。然后将部分标本植入到体外全层软骨缺损模型内,培养4周观察软骨缺损的修复效果,并比较修复前与修复后标本的软骨相关生物学特性变化情况。[结果]体外培养2周时预分化的h MSCs＂自组装＂形成一软骨样组织,组织学检测到软骨特异性成分阳性表达。全层软骨缺损修复模型体外培养4周后,大体和组织学可见缺损由工程化软骨所修复,交界面呈紧密黏附状,Ⅱ型胶原和蛋白多糖呈阳性表达,但弱于未移植组。生化结果显示移植组标本的细胞数、GAG和总胶原含量均低于未移植组（P〈0.05）。RT-PCR结果也反映出这一变化。[结论]＂自组装＂工程化软骨能有效地修复体外关节软骨缺损,并且能较稳定地维持软骨表型。

三报告基因标记骨肉瘤细胞及原位移植模型的建立

目的建立一种共表达绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)和荧光素酶三报告基因稳定标记的骨肉瘤细胞株,并利用该细胞株建立骨肉瘤原位移植裸鼠模型,用于监测体内肿瘤的生长以及药物的评价。方法用慢病毒作为载体,将同时携带荧光蛋白和荧光素酶的基因转到U2-OS骨肉瘤细胞中,筛选稳定细胞株,将细胞原位移植到裸鼠的胫骨,通过活体成像观察骨肉瘤在裸鼠体内的生长转移。结果荧光标签能稳定地在细胞中表达,通过活体成像可观察到骨肉瘤在裸鼠体内的生长转移。结论成功建立了一种实时监测骨肉瘤在小鼠体内生长转移的模型,为骨肉瘤的机制研究和体内药物评价提供了一种理想的平台。

黄芩素对高糖状态下小鼠成骨细胞凋亡和增殖及氧化应激的作用

本研究旨在观察黄芩素对高糖状态下小鼠成骨细胞凋亡和增殖及氧化应激的作用,现将结果报道如下。一、资料与方法1.一般资料:常规培养小鼠成骨细胞,以随机法分为对照组、高糖组以及黄芩素组。其中高糖组与黄芩素组加入35 mmol/L的葡萄糖,黄芩素组增加10μmol/L的黄芩素干预。比较各组细胞增殖能力以及凋亡率、氧化应激指标水平、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OC)以及碱性磷酸酶(ALP)蛋白表达水平。

补骨脂素对乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟的影响

骨质疏松症是一种全身性骨骼疾病,其特点是骨量低、骨微结构恶化、骨脆性增加、易骨折。为了改善骨质疏松,需要寻找合成代谢和口服药物的副作用最小的替代药物。补骨脂素是从中草药中提取的香豆素衍生物。然而,补骨脂素在成骨细胞功能中的作用及其分子机制尚不清楚。本研究发现,补骨脂素通过上调成骨细胞特异性标志基因(包括icollagen,骨钙素和骨唾液蛋白)的表达,增强碱性磷酸酶的活性,以剂量依赖的方式促进小鼠原代成骨细胞的成骨分化。本研究同时证明补骨脂素能上调BMP2和BMP4基因的表达,提高磷酸化smad1/5/8蛋白水平,激活BMP报告基因(12xbe-oc-luc)的活性以及增强BMP信号直接靶基因osx的表达。BMP2和BMP4基因的缺失消除了补骨脂素对成骨细胞标志基因col1、alp、oc和bsp表达的促进作用。结果表明,补骨脂素通过激活BMP信号促进成骨细胞分化,提示补骨脂素可能是治疗骨质疏松等骨丢失相关疾病的一种潜在的合成代谢剂。