细胞因子诱导杀伤细胞抗淋巴瘤细胞作用的研究

目的:探讨体外细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞对淋巴瘤细胞的杀伤作用。方法:采集健康人外周血单个核细胞(PBMC),经IL-2、CD3Mc-Ab、IL-1、IFN-γ诱导,制备CIK细胞,同时以淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)作为对照,流式细胞仪检测CIK细胞的免疫表型,LDH释放法检测其对淋巴瘤细胞株的杀伤活性。结果:CIK细胞与LAK细胞增殖在前期无明显差异,CIK细胞在培养14d后大量增殖,21d后扩增能力显著高于LAK细胞(P<0.05);表型分析表明CIK细胞主要由CD3+和CD56+双阳性细胞构成;同一效靶比时,CIK细胞对淋巴瘤细胞株的杀伤活性明显高于LAK细胞(P<0.05)。结论:CIK细胞对淋巴瘤细胞株的杀伤作用强于LAK细胞,具有较强的抗淋巴瘤细胞活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞。

血清体积分数对人细胞因子诱导杀伤细胞增殖的影响

背景:细胞因子诱导的杀伤细胞的培养多采用体积分数10%的血清,但关于血清体积分数对其生长特性的影响少有报道。目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞在不同血清体积分数培养液中的增殖情况。方法:分别配制血清体积分数为10%,20%和30%+重组人白细胞介素2等细胞因子的完全培养液培养人细胞因子诱导的杀伤细胞,使用流式细胞仪分析血清体积分数对细胞周期的影响,通过MTT法检测细胞因子诱导的杀伤细胞在不同血清体积分数培养液中的增殖,并观察细胞因子诱导的杀伤细胞的生长状态。结果与结论:细胞因子诱导的杀伤细胞在体积分数10%血清培养液中增殖速率和增殖指数均最低,在体积分数30%血清培养液中最高,3组细胞的不同时间点的增殖速率差异均有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。结果证实,体外培养的细胞因子诱导的杀伤细胞的增殖具有血清体积分数依赖性,高血清体积分数培养液的促细胞因子诱导的杀伤细胞增殖效应明显。

自体外周血干细胞移植治疗家兔肢体缺血

目的 建立家兔肢体缺血模型并观察自体外周血干细胞移植的治疗效果.方法 连续4 d G-CSF7.5 μg/kg,每天皮下注射进行干细胞动员,分离外周血单个核细胞制成干细胞悬液.结扎离断腹股沟韧带至膝关节所有动脉分支并剔除股动脉,制备缺血模型,将干细胞悬液分10-12个点注射于手术切口两侧.结果 术后多普勒超声显示手术肢体的血液供应阻断,模型制备成功.4 w后实验组家兔缺血部位肌肉毛细血管密度平均为19.7个,对照组为12.4个,差异有统计学显著性意义（P〈0.05）.结论 自体外周血干细胞移植能促进新生血管生成,可有效改善肢体缺血.

树突细胞联合CIK杀伤肺癌细胞的实验研究

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与同源性树突细胞（DC）共同培养后增殖活性和细胞表型的变化，以及对SPC—A-1人肺癌细胞的杀伤作用.方法通过采集健康志愿者外周血分离单个核细胞（PMBC），根据黏附特性的不同将贴壁细胞诱导为成熟的DC，同时将非黏附细胞诱导分化为CIK，在培养第9d时将DC和CIK细胞按1：20混合共培养3d，同时以单纯CIK细胞为对照，运用LDH释放法检测对SPC—A-1的杀伤活性.结果DC—CIK共培养后的增殖速度快于单纯的CIK细胞，培养12d时CIK和DC-CIK的CD3^＋CD8^＋，CD3^＋CD56^＋双阳性率分别为51．2%±6．6%，21．4%±4．2%及70．7%±5．9%，39．6%±4．7oA，表达差异有统计学显著性意义（P〈0．001）.在5：1-20：1效靶比范围内，DC—CIK对肺癌细胞的杀伤活性高于CIK（P〈0．05），且随效靶比增加，杀伤活性增强.结论DC—CIK的增殖活性和杀伤活性均高于单纯的CIK细胞.

直肠癌患者外周血单核细胞诱导为树突细胞

目的用直肠癌患者外周血单核细胞通过体外培养的方法诱导为成熟树突细胞。方法 CS-3000血细胞分离机采集直肠癌患者外周血单核细胞悬液,Ficoll分离单个核细胞,用含10%FBS的RPMI-1640培养基培养,第0天加入GM-CSF1000 U/ml、IL-4 500 U/ml,第4天2/3量换液,补足GM-CSF、白介素(IL)-4,并加入肿瘤坏死因子(TNF)-α500 U/m l诱导其成熟,以后每隔3天2/3量换液。结果培养至第11天,收集培养的1×105～2×105个树突细胞经流式细胞仪检测表达CD83+(52.9±5.8)%,CD86+(79.2±8.1)%,HLA-DR(65.8±5.7)%,CD1a(51.3±6.4)%,及CD14+(4.72±2.16)%。结论直肠癌患者外周血单核细胞经GM-CSF、IL-4及TNF-α联合培养能诱导出成熟树突细胞。为直肠癌的免疫治疗提供了临床应用基础。

CIK与树突细胞联合对肾癌细胞的杀伤研究

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和树突状细胞(DC)共同培养后CIK细胞的增殖活性、表型变化及对肾癌细胞株769-P的杀伤作用。方法采集健康人的外周血单个核细胞(PBMC),置37℃、5%CO2培养箱2h,收集非粘附细胞诱导分化成CIK,粘附细胞诱导为DC,在培养7d后DC与CIK按1∶40的比例混合培养,分别在3d、6d收集细胞同时以单纯CIK细胞为对照,运用LDH释放法检测对769-P细胞的杀伤活性。结果 DC-CIK共同培养后增殖速度明显快于单纯的CIK细胞,培养第10天时单纯CIK的CD3+CD8+、CD3+CD5+6双阳性率分别为(50.4±1.8)%、(20.1±5.2)%,共培养3dDC-CIK的CD3+CD8+、CD3+CD5+6的阳性率分别为(67.2±5.2)%、(37.9±4.1)%,6dDC-CIK的CD3+CD8+、CD3+CD5+6的阳性率分别为(75.2±3.1)%、(48.3±2.9)%,表达差异具有统计学意义(P<0.05)。在1∶5～1∶40靶效比范围内DC-CIK对肾癌细胞的杀伤活性高于单纯CIK细胞,且随效靶比增强杀伤活性增强(P<0.05)。结论 DC-CIK的增殖活性和细胞毒活性均高于单纯CIK细胞。

人脐血间充质干细胞分离培养方法的优化

目的探索脐血来源的间充质干细胞体外分离培养的更优方法。方法无菌条件下抽取正常足月剖宫产胎儿的脐带血,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞。50份脐血分为对照组和改良组,每组25份,分别以1.5×107/ml的细胞密度接种于25 cm2培养瓶中。对照组贴壁3 d后弃上清,去除未贴壁细胞,更换新鲜培养液;改良组贴壁0.5 h后弃上清,去除未贴壁细胞,更换新鲜培养液。结果对照组杂细胞较多,最终成功培养出8份脐血间充质干细胞;改良组杂细胞较少,最终成功培养出18份脐血间充质干细胞。经流式细胞仪检测脐血间充质干细胞的免疫表型,结果显示,所培养出的脐血间充质干细胞不表达或极弱表达CD34、CD106等造血细胞标志,稳定地高表达CD29、CD44、CD105等间充质细胞相关的表面抗原标记物。结论采取脐血单个核细胞贴壁0.5 h弃上清更换新鲜培养液可以明显提高脐血间充质干细胞的培养成功率,其结果优于脐血单个核细胞贴壁3 d弃上清更换新鲜培养液。