多油辣木PKM-1卡那霉素耐受性研究

【目的】筛选合适的抗生素浓度是植物基因工程的重要环节,研究多油辣木PKM-1愈伤组织诱导及分化植株阶段卡那霉素耐受性,确定相应阶段合适的筛选浓度,为开展辣木基因工程遗传改良奠定基础。【方法】设置5种卡那霉素浓度梯度,研究多油辣木无菌苗上胚轴、嫩叶以及由上胚轴诱导的愈伤组织,对不同卡那霉素浓度的响应。【结果】培养基中卡那霉素50 mg·L^(-1)时,上胚轴细胞团膨大变缓,出愈率下降;70 mg·L^(-1)时细胞团膨大明显受到抑制,上胚轴诱导愈伤组织阶段的耐受性范围为50~70 mg·L^(-1)。培养基中卡那霉素30 mg·L^(-1)时,嫩叶膨大变缓;50 mg·L^(-1)时,嫩叶膨大完全受到抑制,基本不再形成愈伤组织,部分嫩叶褪绿变白,嫩叶诱导愈伤组织阶段的耐受性范围为30~50 mg·L^(-1)。培养基中卡那霉素20 mg·L^(-1)时愈伤组织分化增殖开始受到影响;30 mg·L^(-1)时基本不增殖,愈伤组织分化植株的耐受性范围为20~30 mg·L^(-1)。【结论】多油辣木PKM-1植株分化阶段对卡那霉素的敏感程度高于愈伤组织增殖阶段,nptII为筛选标记遗传转化多油辣木PKM-1,愈伤组织筛选阶段适宜的卡那霉素用量为50 mg·L^(-1),分化植株阶段可降低至30 mg·L^(-1),研究结果为采用卡那霉素筛选遗传转化辣木奠定了基础。

农杆菌介导法获得辣木PKM-1转双价抗虫基因(sck+Cry1-Ac)愈伤组织

[目的]辣木生产中鳞翅目害虫辣木瑙螟危害日益严重,为提高辣木抗虫性,使用农杆菌介导法将抗虫基因导入辣木,以期获得抗虫转基因转化子。[方法]利用内质网定位修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)和苏云金芽孢杆菌基因(Cry1-Ac)筛选标记基因nptⅡ;利用农杆菌EHA105介导遗传转化辣木PKM-1的叶片和茎段,以卡那霉素筛选获得抗性植株;采用PCR和NPTⅡImmunoStrip检测确定nptⅡ基因的整合与表达。[结果]辣木叶片和茎段无需预培养可直接进行农杆菌转化,最佳转化条件为:工程菌液OD_(600)值为0.2,侵染时间为2 min,共培养时间为2 d;乙酰丁香酮添加与否对获得抗性愈伤率的影响不明显;200 mg/L提门叮可有效抑制农杆菌生长;卡那霉素抗性愈伤组织PCR检测表明:标记基因nptⅡ已成功整合到辣木PKM-1基因组中;NPTⅡImmunoStrip检测表明NPTⅡ蛋白水平得以表达。[结论]获得了辣木PKM-1卡那霉素抗性愈伤组织,为辣木抗虫分子育种提供了材料。

辣木基质对云南羊肚菌栽培特性的影响

辣木为多年生乔木,茎秆含有丰富的营养物质,为充分利用云南当地辣木资源,培育优质羊肚菌,以云南梯棱羊肚菌(YD1)和六妹羊肚菌(YD4)菌株为材料,在培养基质中添加60%的辣木茎秆,比较羊肚菌菌核、菌丝生长状态,并于大棚栽培测定产量。辣木茎杆作为基质培养梯棱羊肚菌和六妹羊肚菌,均能使菌核发生更早(2 d)、成熟的更快(3 d~4 d),并能加速菌丝生长;统计产量后发现,辣木茎秆可提高梯棱羊肚菌的产量,达1089.6 kg·hm^(-2),带来更高经济效益;而添加辣木茎秆基质栽培六妹羊肚菌,其蛋白质含量提高0.27%、粗脂肪含量提高1.71%,可以增加其营养品质。结果为安全、高效、高品质人工栽培羊肚菌的基质配方提供了更多选择。

云南元谋辣木引种试验初报

研究旨在为明确境外辣木在云南元谋的适应性。对来自埃塞俄比亚、卢旺达、老挝和印度共6份辣木资源,进行了种子发芽和育苗移栽等研究,获得种子发芽率、成苗率,株高、茎粗、冠幅等。结果表明,供试的6份材料发芽率差异极显著,19-1(埃塞俄比亚)发芽率最高达83.33%,19-2(卢旺达)发芽率最低为5.33%;高成苗率的是19-2和19-1,分别为88.57%和85.67%,19-3(老挝)成苗率最低为29.26%;株高、茎粗的生长曲线均为“慢-快-慢”,冠幅生长曲线为“快-慢-快-慢”,其中,对照‘PKM1’株高、冠幅最大,分别为228.8 cm和144.86 cm,19-1茎最粗,直径为42.00 mm;鲜叶产量:CK>19-1>19-2>19-5>19-3>19-4,干叶产量:CK>19-1>19-2>19-5>19-4>19-3;种子产量:CK>19-3>19-5>19-4>19-2。初步得出19-1(埃塞俄比亚)是较好的叶用型种源,19-3(老挝)可作为果用型潜力品种。