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HCV血清分型方法的建立及其评价 被引量:7
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作者 杨锡琴 修冰水 +6 位作者 王国华 陈堃 宋晓国 李卓 严艳 张贺秋 彭瑞云 《传染病信息》 2012年第2期91-92,103,共3页
目的建立HCV血清分型方法,评价其在慢性丙型肝炎(丙肝)抗体阳性标本中的分型率及血清型与基因型的相关性。方法克隆表达HCVCore、非结构蛋白(non-structural protein,NS)4两个区段的型别特异性表位嵌合抗原,并应用酶联免疫竞争抑制法建... 目的建立HCV血清分型方法,评价其在慢性丙型肝炎(丙肝)抗体阳性标本中的分型率及血清型与基因型的相关性。方法克隆表达HCVCore、非结构蛋白(non-structural protein,NS)4两个区段的型别特异性表位嵌合抗原,并应用酶联免疫竞争抑制法建立血清分型方法。分别应用酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应法检测200例慢性丙肝患者的血清抗体和HCVRNA,并用建立的方法进行血清分型。同时采用该方法检测90例乙型肝炎患者、11例戊型肝炎患者和16例其他肝病患者的血清,评价其特异性。结果在200例慢性丙肝患者的血清标本中,基因1b型128例,2a型72例,型别特异性抗体阳性157例,分型率为78.50%,与基因型一致率为98.09%。而在另外117例乙型肝炎、戊型肝炎和其他肝病患者的血清中,均未检测出HCV型别特异性抗体。结论建立的HCV血清分型方法具有较高的分型率和特异性,可用于HCV抗体的血清学分型和预测干扰素疗效。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 血清分型 基因型
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人乳腺珠蛋白单克隆抗体制备及生物特性鉴定 被引量:1
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作者 杨锡琴 吕晓娟 +6 位作者 王国华 黄焰 宋晓国 陈堃 修冰水 冯晓燕 张贺秋 《中国实验诊断学》 2012年第11期1965-1968,共4页
目的构建重组hMAM蛋白,通过杂交瘤技术获得特异性的抗hMAM的单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法克隆表达hMAM 8-93AA、20-52AA、43-70AA、56-82AA、67-93AA区段的抗原,以纯化的pBV220/hMAM(8-93AA)为免疫原,杂交瘤技术筛选出能稳定分泌... 目的构建重组hMAM蛋白,通过杂交瘤技术获得特异性的抗hMAM的单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法克隆表达hMAM 8-93AA、20-52AA、43-70AA、56-82AA、67-93AA区段的抗原,以纯化的pBV220/hMAM(8-93AA)为免疫原,杂交瘤技术筛选出能稳定分泌抗hMAM单克隆抗体的细胞株。采用Western blotting和免疫组织化学染色方法鉴定其表位和特异性。结果获得6个高纯度的重组抗原,通过pBV220/hMAM(8-93AA)免疫小鼠后,获得2株稳定分泌抗hMAM抗体的杂交瘤细胞株。Western blotting结果显示MAb1、MAb2分别是识别hMAM20-52AA、hMAM52-67AA片段的特异性单克隆抗体。免疫组织化学染色结果显示该抗体仅在乳腺组织中呈阳性反应,在其他肿瘤组织中不反应。结论通过杂交瘤技术成功制备了两株稳定分泌且高特异性的抗hMAM不同位点的单克隆抗体细胞株,为进一步研制高灵敏的乳腺癌早期检测试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳腺珠蛋白 杂交瘤技术 单克隆抗体
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HCV患者年龄、抗体和HCV RNA与血清分型的关系
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作者 杨锡琴 修冰水 +5 位作者 冯晓燕 王国华 陈坤 宋晓国 朱翠侠 张贺秋 《临床输血与检验》 CAS 2015年第2期100-102,共3页
目的采用建立的丙型肝炎病毒(HCV)血清分型技术,探讨HCV患者年龄、抗体(S/CO)和HCV RNA与血清分型的关系。方法收集HCV慢性感染患者血清200例,定量检测HCV RNA、抗-HCV,同时进行血清分型,并进行统计分析。结果 200例慢性丙肝患者的... 目的采用建立的丙型肝炎病毒(HCV)血清分型技术,探讨HCV患者年龄、抗体(S/CO)和HCV RNA与血清分型的关系。方法收集HCV慢性感染患者血清200例,定量检测HCV RNA、抗-HCV,同时进行血清分型,并进行统计分析。结果 200例慢性丙肝患者的血清抗-HCV抗体均为阳性,S/CO〉3.5,HCV RNA滴度在1.12×103~9.29×107 copies/ml。其中血清1型102例,2型58例,混合型2例,分型率为81.00%。采用Student t检验分析年龄、抗体S/CO、HCV RNA与分型之间的关系,t值分别为1.842 9,0.446 7,1.778 2,P均〉0.05,无统计学意义。结论 HCV患者年龄、抗体(S/CO)和HCV RNA滴度对血清分型结果没有影响。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 血清型 HCV RNA 抗体(S/CO)
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型别特异性丙型肝炎病毒嵌合抗原在血清分型中的应用
4
作者 杨锡琴 修冰水 +7 位作者 李卓 王国华 宋晓国 陈堃 冯晓燕 何竞 白冠中 张贺秋 《临床输血与检验》 CAS 2011年第4期297-300,共4页
目的克隆表达型别特异性丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原,并用于HCV血清分型检测。方法分别对HCV 1b、2a的C区和NS4区进行表位预测,选取优势表位序列连接后,于PGEX-4T-2载体中克隆表达嵌合的HCV 1b、2a抗原,应用竞争抑制酶联法对44份HCV... 目的克隆表达型别特异性丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原,并用于HCV血清分型检测。方法分别对HCV 1b、2a的C区和NS4区进行表位预测,选取优势表位序列连接后,于PGEX-4T-2载体中克隆表达嵌合的HCV 1b、2a抗原,应用竞争抑制酶联法对44份HCV 1b和18份2a血清进行血清分型检测。结果 62例血清样品中50例能分型,其中1b型34例,2a型16例,其分型率为80.6%(50/62),与基因型的符合率为90.0%(45/50)。结论丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原用于HCV的血清分型检测,具有较高的准确率和分型率,可用于HCV血清分型检测。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 血清分型 竞争抑制酶联法
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结核分枝杆菌融合抗原38F和64F诊断活动性肺结核的价值 被引量:3
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作者 郄霜 张立 +8 位作者 戴振华 赵平 杨锡琴 郭兰芹 修冰水 陈堃 王国华 张贺秋 冯晓燕 《中国防痨杂志》 CAS 2013年第9期643-648,共6页
目的探讨结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对活动性肺结核患者血清中IgG、IgM和IgA抗体检测的诊断价值。方法利用结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38F和64F,通过ELISA法对223例活动性肺结核患者进行结核分枝杆菌特异性IgG、IgM和IgA抗体... 目的探讨结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对活动性肺结核患者血清中IgG、IgM和IgA抗体检测的诊断价值。方法利用结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38F和64F,通过ELISA法对223例活动性肺结核患者进行结核分枝杆菌特异性IgG、IgM和IgA抗体水平检测。223例活动性肺结核患者分为三组,第一组为涂片和培养共同阳性组(86例),第二组为涂片阴性且培养阳性组(51例),第三组为涂片和培养共同阴性组(86例)。结果223例活动性肺结核病患者,第一组IgG、IgM和IgA的联合检出率为79.07%(68/86);第二组IgG、IgM和IgA的联合检出率为62.75%(32/51);第三组IgG、IgM和IgA的联合检出率为69.77%(60/86)。全部样本血清学方法的检出率为71.75%(160/223)。结论结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对于活动性肺结核具有较高的辅助诊断价值,并且IgG、IgM和IgA抗体联合检测可以提高检出率。 展开更多
关键词 结核 诊断 抗体 细菌 细菌蛋白质类 血清学试验
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丙型肝炎病毒核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性的调控作用 被引量:3
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作者 赵璐 张嵘 +6 位作者 张旭辉 杨锡琴 修冰水 蒋淑芳 冯晓燕 张景海 张贺秋 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2015年第3期256-259,共4页
目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性的调控作用。方法对于瞬时转染p IRES-Core/Neo载体的L02细胞采用双荧光素酶报告基因系统检测核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性影响,并提取2株细胞的核蛋白和RNA,分别以Wester... 目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性的调控作用。方法对于瞬时转染p IRES-Core/Neo载体的L02细胞采用双荧光素酶报告基因系统检测核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性影响,并提取2株细胞的核蛋白和RNA,分别以Western blot试验和实时荧光定量PCR检测2种转录因子的表达量。结果双荧光素酶报告基因检测在L02-Core和L02-Neo细胞中转录因子ETF和TxRE的活性比值分别为2.981和3.063。Western blot试验灰度值分析2株细胞的核蛋白提取物中这2种蛋白表达量的比值分别为1.510和2.717。实时荧光定量PCR检测这2株细胞中ETF和TxRE的核酸水平比值分别为4.123和3.703。结论在表达HCV核心蛋白的L02细胞中,转录因子ETF和TxRE转录表达水平及转录活性均较高,HCV核心蛋白可能具有增强转录因子ETF和TxRE转录活性的作用。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 转录因子 ETF TxRE 转录活性 L02细胞 双荧光素酶 PCR
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三阴性乳腺癌细胞CAL-51对多西他赛的耐药机制 被引量:1
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作者 范雅文 张旭辉 +6 位作者 修冰水 杨锡琴 刘志强 段翠密 张贺秋 张嵘 冯晓燕 《国际药学研究杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期915-921,共7页
目的通过比较分析多西他赛(多西紫杉醇,docetaxel)对三阴性乳腺癌细胞系CAL-51和非三阴乳腺癌细胞系T47D的杀伤敏感性差异,探讨CAL-51对多西他赛耐药的可能机制。方法 MTT法测定不同剂量多西他赛对CAL-51和T47D细胞生长的影响并计算IC_(... 目的通过比较分析多西他赛(多西紫杉醇,docetaxel)对三阴性乳腺癌细胞系CAL-51和非三阴乳腺癌细胞系T47D的杀伤敏感性差异,探讨CAL-51对多西他赛耐药的可能机制。方法 MTT法测定不同剂量多西他赛对CAL-51和T47D细胞生长的影响并计算IC_(50)值;瑞氏-吉姆萨染色分析多西他赛作用后对两种细胞形态的变化;流式细胞仪(FCM)分析多西他赛对细胞周期的分布及凋亡情况的影响;荧光定量PCR检测分析多个基因在两种细胞中的差异表达;Western印迹法检测抗凋亡蛋白Bcl-2和胱天蛋白酶(caspase)家族蛋白在两种细胞中表达水平的差异。结果 T47D细胞经多西他赛处理后,形态出现显著变化;流式细胞检测显示,多西他赛能明显诱导非三阴乳腺癌细胞系T47D凋亡,与三阴性乳腺癌细胞系CAL-51相比具有显著性差异(P<0.01);定量PCR结果显示,CAL-51中抗凋亡基因Bcl-2高表达,与T47D相比具有显著性差异(P<0.05);蛋白质印迹法显示加药后两种细胞皆能活化内源性凋亡途径,但下游效应caspase的活化途径有所不同。结论多西他赛诱导2种细胞产生凋亡的内源性途径有所不同,Bcl-2的高表达可能是CAL-51细胞对多西他赛耐药的机制之一。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 非三阴乳腺癌 多西他赛 耐药性
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新型布尼亚病毒抗原ELISA检测方法建立及初步评价 被引量:1
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作者 陈堃 何竞 +6 位作者 修冰水 王国华 宋晓国 朱翠侠 杨锡琴 冯晓燕 张贺秋 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第5期19-21,共3页
目的 建立发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原检测方法,并进行初步临床评价.方法 克隆表达新型布尼亚病毒核蛋白(NP),分别免疫家兔和小鼠,制备多抗和单抗,以单抗包被酶联反应板,多抗偶联辣根过氧化物酶(HRP),建立双抗体夹心免疫... 目的 建立发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原检测方法,并进行初步临床评价.方法 克隆表达新型布尼亚病毒核蛋白(NP),分别免疫家兔和小鼠,制备多抗和单抗,以单抗包被酶联反应板,多抗偶联辣根过氧化物酶(HRP),建立双抗体夹心免疫酶联方法,将获得的NP蛋白进行系列稀释,制作标准曲线,评价其检测灵敏度.分别检测48份临床发热伴血小板减少综合征和48份健康献血员血清.结果 建立的发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原检测方法检测灵敏度为1 pg/ml,48份临床疑似病人检出阳性7例(14.58%),48份健康血清样品1例阳性,特异度98%.结论 建立发热伴血小板减少综合征新型布尼亚病毒抗原检测方法可用于发热伴血小板减少综合征新型布尼亚病毒早期检测. 展开更多
关键词 发热伴血小板减少综合征 新型布尼亚病毒 双抗体夹心酶联免疫方法
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基于化学发光肠道病毒71型IgM抗体检测试剂的研制及初步应用 被引量:1
9
作者 陈堃 宋晓国 +6 位作者 张向颖 杨锡琴 王国华 冯晓燕 何竞 张贺秋 修冰水 《检验医学与临床》 CAS 2011年第24期2945-2946,2948,共3页
目的在肠道病毒71型(EV71)重组外壳蛋白VP1的基础上建立以化学发光为基础的IgM抗体检测技术,并与普通TMB显色酶联免疫吸附法比较,评价其临床应用前景。方法采用抗IgM单克隆抗体及辣根酶标记的重组VP1抗原,在此基础上建立EV71-IgM捕获法... 目的在肠道病毒71型(EV71)重组外壳蛋白VP1的基础上建立以化学发光为基础的IgM抗体检测技术,并与普通TMB显色酶联免疫吸附法比较,评价其临床应用前景。方法采用抗IgM单克隆抗体及辣根酶标记的重组VP1抗原,在此基础上建立EV71-IgM捕获法化学发光检测技术,并对比化学发光检测技术与普通酶联检测技术在45份EV71抗体阳性和30份阴性血清中的反应情况。结果化学发光法、普通酶联免疫吸附法、市售EV71-IgM检测试剂分别能与38份、19份、26份EV71抗体阳性血清发生阳性反应,灵敏度分别为84.4%、42.2%和57.8%;化学发光法灵敏度显著高于其他两种,差异有统计学意义(P<0.05);3种检测方法与阴性血清均无阳性反应。结论在EV71-VP1重组抗原的基础上建立的EV71-IgM捕获法化学发光检测技术具有很高的灵敏度,并有很好的临床应用前景。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 VP1基因 化学发光
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GABRP基因在基底样三阴乳腺癌中的差异表达 被引量:1
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作者 王晶晶 张旭辉 +10 位作者 修冰水 杨锡琴 应晓敏 刘志强 段翠密 范雅雯 邰艳红 张博 房涛 冯晓燕 张贺秋 《临床与病理杂志》 2017年第5期948-954,共7页
目的:探索GABRP基因在基底样三阴乳腺癌(basal-like Triple negative breast cancer,BLTNBC)中的表达,为临床提供预后诊断分子标志物。方法:通过生物信息学分析比较GABRP基因的表达;采用定量PCR方法检测GABRP基因在乳腺癌细胞系及104例... 目的:探索GABRP基因在基底样三阴乳腺癌(basal-like Triple negative breast cancer,BLTNBC)中的表达,为临床提供预后诊断分子标志物。方法:通过生物信息学分析比较GABRP基因的表达;采用定量PCR方法检测GABRP基因在乳腺癌细胞系及104例乳腺癌石蜡样本中的差异表达,并采用相关性分析、卡方检验及Fisher精确概率法分析GABRP基因与细胞增殖、淋巴结转移、ER及HER-2基因表达的相关性。结果:生物信息学分析和定量PCR结果显示GABRP基因在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)及BLTNBC中显著性高表达(P<0.05);在non-TNBC,TNBC,BLTNBC中,其表达与细胞增殖、HER-2表达无明显相关性(P>0.05),而在BLTNBC中与淋巴结转移状态有明显相关性(P<0.05),在non-TNBC中与ER表达有明显相关性(P<0.05)。结论:GABRP基因可作为BLTNBC的有潜力的预后诊断分子标志物。 展开更多
关键词 GABRP 三阴性乳腺癌 基底样三阴乳腺癌
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结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的提纯及活性初步鉴定 被引量:1
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作者 戴振华 郭兰芹 +7 位作者 冯晓燕 张立 郄霜 杨锡琴 修冰水 陈堃 彭瑞云 张贺秋 《生物技术通讯》 CAS 2014年第2期230-233,共4页
目的:提取纯化结核分枝杆菌(MTB)脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)。方法:MTB菌体彻底破碎后,去脂,去蛋白,上清液经苯酚萃取,酒精沉淀,得到LAM;以提取的LAM作为包被抗原检测血清中的LAM抗体。结果和结论:提取到LAM抗原,免疫印迹表明... 目的:提取纯化结核分枝杆菌(MTB)脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)。方法:MTB菌体彻底破碎后,去脂,去蛋白,上清液经苯酚萃取,酒精沉淀,得到LAM;以提取的LAM作为包被抗原检测血清中的LAM抗体。结果和结论:提取到LAM抗原,免疫印迹表明,LAM迁移范围相对分子质量为25x10^3-40x10^3,主要集中在35x10。处。在64例肺结核患者中,有43例LAM-ELISA检测阳性(敏感性为67.19%);在67例健康志愿者中,有64例LAM-ELISA检测阴性(特异性为95.52%)。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 脂阿拉伯甘露聚糖 提纯
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新型布尼亚病毒抗体检测方法的建立及初步应用 被引量:1
12
作者 陈堃 何竞 +6 位作者 修冰水 王国华 宋晓国 朱翠侠 杨锡琴 冯晓燕 张贺秋 《生物技术通讯》 CAS 2014年第1期100-101,共2页
目的:建立新型布尼亚病毒IgG抗体ELISA检测方法。方法:用基因工程重组表达的新型布尼亚病毒NP抗原包被酶联板,建立间接ELISA法检测新型布尼亚病毒IgG抗体,并进行特异性和灵敏度评价,健康人群中检测结果计算临界值(均值+3标准差)。检测7... 目的:建立新型布尼亚病毒IgG抗体ELISA检测方法。方法:用基因工程重组表达的新型布尼亚病毒NP抗原包被酶联板,建立间接ELISA法检测新型布尼亚病毒IgG抗体,并进行特异性和灵敏度评价,健康人群中检测结果计算临界值(均值+3标准差)。检测70例发热伴血小板减少综合征患者恢复血清和69份健康人血清样品。结果:在70份患者血清样品中,检测出新型布尼亚病毒IgG抗体阳性51例,阳性率为72.14%(51/70);69份健康人血清样品中,检测出1份阳性,特异性为98.6%(1/69)。结论:建立的新型布尼亚病毒IgG抗体ELISA检测方法特异性强、灵敏度高,可用于新型布尼亚病毒感染的检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 新型布尼亚病毒 IGG抗体 酶联免疫检测方法
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结核分枝杆菌Rv3871抗原优势肽段的克隆表达及抗原性鉴定 被引量:1
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作者 郄霜 戴振华 +6 位作者 杨锡琴 修冰水 陈堃 郭兰芹 冯晓燕 张庆波 张贺秋 《生物技术通讯》 CAS 2014年第3期357-360,共4页
目的:为了提高结核病诊断试剂的特异性和敏感性,克隆表达结核分枝杆菌H37Rv株RD1区Rv3871抗原优势肽段,并应用ELISA法对其抗原性进行初步鉴定。方法:利用Biosun生物信息学软件对Rv3871抗原进行表位分析,通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv基因... 目的:为了提高结核病诊断试剂的特异性和敏感性,克隆表达结核分枝杆菌H37Rv株RD1区Rv3871抗原优势肽段,并应用ELISA法对其抗原性进行初步鉴定。方法:利用Biosun生物信息学软件对Rv3871抗原进行表位分析,通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Rv3871抗原优势肽段编码基因,在大肠杆菌HB101中进行表达,采用间接ELISA法初步评价其抗原性。结果:Rv3871-1肽段检测的敏感性为32.5%(13/40),特异性为97.2%(35/36);Rv3871-2敏感性为45%(18/40),特异性为100%;Rv3871-3敏感性为37.5%(15/40),特异性为91.6%。结论:结核分枝杆菌RD1区Rv3871抗原优势肽段Rv3871-2有较高的特异性和敏感性,有望作为候选抗原用于结核病患者的血清学检测。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv3871抗原 优势肽段
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新诊断2型糖尿病患者GADA 和 ZnT8A 自身抗体检测意义研究 被引量:4
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作者 赵长胜 董倩 +6 位作者 张海涛 杨锡琴 赵照 王国华 赵琰枫 张贺秋 冯晓燕 《现代检验医学杂志》 CAS 2015年第3期50-52,共3页
目的:分析新诊断2型糖尿病患者中谷氨酸脱羧酶自身抗体(GADA)和锌转运子8自身抗体(ZnT8A)阳性情况。方法通过 ELISA 法检测2014年5月-10月收集的101例新诊断2型糖尿病患者血清样本 GADA 和 ZnT8A 水平。结果GADA 阳性率为21.78%,... 目的:分析新诊断2型糖尿病患者中谷氨酸脱羧酶自身抗体(GADA)和锌转运子8自身抗体(ZnT8A)阳性情况。方法通过 ELISA 法检测2014年5月-10月收集的101例新诊断2型糖尿病患者血清样本 GADA 和 ZnT8A 水平。结果GADA 阳性率为21.78%,ZnT8A 阳性率为17.82%,两种自身抗体共同阳性率为8.91%,且 GADA 和 ZnT8A 阳性与否与患者的性别(t=-0.724,-0.550;0.903,1.359,P 值均>0.05)、年龄(r =-0.185,-0.158;0.367,0.084,P 值均>0.05)、血糖(r=0.290,0.110;-0.264,-0.047,P 值均>0.05)、胆固醇(r=-0.047,0.004;0.154,-0.138,P 值均>0.05)、三酰甘油(r =-0.092,-0.054;-0.217,-0.023,P 值均>0.05),以及低密度脂蛋白(r =-0.045,-0.027;0.202,-0.025,P 值均>0.05)水平不存在明显相关性。结论为了早期诊断成人迟发型自身免疫性糖尿病患者,应该对新诊断的2型糖尿病患者及时进行自身抗体的筛查。 展开更多
关键词 新诊断2型糖尿病 成人迟发型自身免疫性糖尿病 谷氨酸脱羧酶自身抗体 锌转运子8自身抗体
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培养学生良好的心理品质
15
作者 杨锡琴 《中国石化教育》 2001年第2期39-40,共2页
关键词 素质教育 心理品质 自主教育 志向教育 乐观教育 心理健康教育 合作教育 发展教育 挫折教育 班主任工作
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CpG联合铝佐剂对HCV免疫原体液免疫作用的影响 被引量:3
16
作者 湛娜 修冰水 +7 位作者 王国华 陈堃 白冠中 宋晓国 朱翠霞 戴振华 杨锡琴 张贺秋 《生物技术通讯》 CAS 2011年第6期777-780,共4页
目的:探讨胞苷酸鸟苷寡脱氧核苷酸(CpG ODN)联合铝佐剂对丙型肝炎病毒(HCV)重组免疫原的体液免疫作用。方法:采用高交叉HCV-HVR1和E1重组蛋白与CpG ODN、铝佐剂组合,免疫BALB/c小鼠后以ELISA、酶联免疫斑点测定、流式细胞术、免疫沉淀... 目的:探讨胞苷酸鸟苷寡脱氧核苷酸(CpG ODN)联合铝佐剂对丙型肝炎病毒(HCV)重组免疫原的体液免疫作用。方法:采用高交叉HCV-HVR1和E1重组蛋白与CpG ODN、铝佐剂组合,免疫BALB/c小鼠后以ELISA、酶联免疫斑点测定、流式细胞术、免疫沉淀等方法检测相关体液免疫指标和免疫血清多抗的交叉反应性。结果:CpG联合铝佐剂激发了最高的特异性抗体滴度;佐剂通过提高抗体分泌细胞数量、增加脾脏中记忆B细胞数量、增加脾淋巴细胞IL-6、IL-10分泌浓度实现体液免疫增效;CpG则能提高免疫效率,联合铝佐剂时显著提高浆细胞数量;12份HCV阳性血清中有10份可与多抗HVR1 IgG发生免疫沉淀。结论:CpG和铝佐剂联合应用具有协同作用,多抗HVR1 IgG具有较好的交叉反应性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 体液免疫 免疫佐剂 胞苷酸鸟苷寡脱氧核苷酸
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结核分枝杆菌抗体双抗原夹心ELISA检测方法的建立及初步应用 被引量:2
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作者 蒋纾芳 郭兰芹 +10 位作者 宗克亮 杨锡琴 刘志强 赵照 修冰水 段翠密 陈堃 张旭辉 张嵘 冯晓燕 张贺秋 《生物技术通讯》 CAS 2015年第5期678-681,共4页
目的:建立2种结核分枝杆菌(Mtb)抗体的双抗原夹心ELISA检测方法,并初步评价其在Mtb血清学临床辅助诊断中的应用价值。方法:采用Mtb融合抗原38k D+ESAT6+CFP10作为包被抗原,分别以辣根过氧化物酶(HRP)和生物素(Bio)标记的38k D+ESAT6+CF... 目的:建立2种结核分枝杆菌(Mtb)抗体的双抗原夹心ELISA检测方法,并初步评价其在Mtb血清学临床辅助诊断中的应用价值。方法:采用Mtb融合抗原38k D+ESAT6+CFP10作为包被抗原,分别以辣根过氧化物酶(HRP)和生物素(Bio)标记的38k D+ESAT6+CFP10作为标记抗原,建立2种Mtb双抗原夹心ELISA法,即HRP-ELISA法和Bio-ELISA法;采用所建立的2种方法对结核患者和健康对照血清进行检测。结果:经过一系列的反应条件优化,确定HRP-ELISA法和Bio-ELISA法的最佳抗原包被浓度分别为2、0.25μg/m L,最适加样量均为100μL血清原液,最佳标记抗原稀释率分别为1∶500、1∶2000,检测的灵敏度分别为43.66%、52.11%,特异性均为100%。结论:建立了2种Mtb双抗原夹心ELISA法,它们均适用于Mtb血清学的临床辅助诊断。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 融合抗原38k D+ESAT6+CFP10 双抗原夹心ELISA
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玻璃粘连蛋白血清学检测对乳腺癌早期诊断价值的初步研究 被引量:2
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作者 郝文德 张旭辉 +9 位作者 冯晓燕 杨锡琴 修冰水 段翠密 韩小伟 进淑娟 刘志强 阙海萍 张贺秋 黄焰 《生物技术通讯》 CAS 2015年第2期215-218,共4页
目的:探讨玻璃粘连蛋白血清学表达与乳腺癌早期诊断的相关性。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量测定62例乳腺癌(0-Ⅰ期癌22例,Ⅱ-Ⅲ期癌40例)和8例乳腺良性病变患者血清玻璃粘连蛋白水平,分析玻璃粘连蛋白表达在良性与各期乳腺癌... 目的:探讨玻璃粘连蛋白血清学表达与乳腺癌早期诊断的相关性。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量测定62例乳腺癌(0-Ⅰ期癌22例,Ⅱ-Ⅲ期癌40例)和8例乳腺良性病变患者血清玻璃粘连蛋白水平,分析玻璃粘连蛋白表达在良性与各期乳腺癌中的变化规律,同时比较CA153、CA125、CEA的表达情况。结果:0-Ⅰ期乳腺癌组血清玻璃粘连蛋白的表达水平(231.45±30.54μg/m L)显著高于良性对照组(197.84±24.31μg/m L)和Ⅱ-Ⅲ期乳腺癌组(209.34±31.25μg/m L),差异均有统计学意义(P<0.01);玻璃粘连蛋白血清表达水平与乳腺癌组织学分级、年龄、肿瘤大小、月经状况、ER、PR、Her-2及Ki-67表达无关(P>0.05);而血清CA153、CA125、CEA表达水平随着临床分期升高而升高,其中CA153的表达存在统计学差异(P<0.05)。结论:血清玻璃粘连蛋白水平在早期阶段乳腺癌(0-Ⅰ期)显著高于良性和中期(Ⅱ-Ⅲ期)乳腺癌患者,提示玻璃粘连蛋白可能是一项有潜力的乳腺癌早期诊断指标,而血清CA153、CA125、CEA表达则主要与乳腺癌病情发展相关。 展开更多
关键词 玻璃粘连蛋白 血清标志物 乳腺癌 早期诊断
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艰难梭菌毒素C蛋白的克隆表达和抗体制备
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作者 王建霞 王宏伟 +5 位作者 杨锡琴 黄忱 罗芸 金大智 冯晓燕 张贺秋 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期760-765,共6页
目的克隆艰难梭菌毒素C(tcdC)基因并构建TcdC蛋白的原核表达载体,制备多克隆抗体。方法从艰难梭菌标准株(ATCC43255)基因组DNA中扩增获得tcdC基因的部分片段,连接到原核表达载体并转化到大肠杆菌中,诱导表达GST-TcdC/L和IL1-TcdC/L融合... 目的克隆艰难梭菌毒素C(tcdC)基因并构建TcdC蛋白的原核表达载体,制备多克隆抗体。方法从艰难梭菌标准株(ATCC43255)基因组DNA中扩增获得tcdC基因的部分片段,连接到原核表达载体并转化到大肠杆菌中,诱导表达GST-TcdC/L和IL1-TcdC/L融合蛋白,前者用作免疫抗原,后者用作检测抗原。采用SDS-PAGE法鉴定融合蛋白的表达,并通过Ni柱纯化IL1-TcdC/L融合蛋白,Q柱纯化GST-TcdC/L融合蛋白。将纯化的GST-TcdC/L融合蛋白于兔背部皮内多点注射,每只1 mg,4周1次,共3次。最后1次免疫后2周,采血分离血清。用IL1-TcdC/L蛋白包被酶联板,采用ELISA法检测多抗血清效价;Western蛋白印迹法检测多抗特异性,结果 SDS-PAGE结果表明,所表达的2个融合蛋白与预期分子质量一致。ELISA结果显示,制备的TcdC多克隆抗体效价>1:6.4×10~4。Western蛋白印迹实验显示,制备的TcdC/L多克隆抗体能特异性识别艰难梭菌中的TcdC蛋白。结论成功克隆了艰难梭菌tcdC/L基因并进行了原核表达,成功制备了其多克隆抗体,为后续研究tcdC基因在艰难梭菌致病过程中的作用及机制奠定了基础。 展开更多
关键词 艰难梭菌 毒素C蛋白 多克隆抗体
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人羧基肽酶 H不同区段抗原的克隆表达及其初步应用
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作者 胡纪文 杨锡琴 +8 位作者 宗克亮 郭兰芹 宋晓国 王国华 刘喜明 朱翠侠 赵琰枫 冯晓燕 张贺秋 《现代检验医学杂志》 CAS 2015年第4期10-13,共4页
目的:构建人羧基肽酶 H 不同区段抗原的原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,初步验证人羧基肽酶 H 不同抗原区段在羧基肽酶 H 自身抗体检测中的应用价值。方法应用 RT-PCR 方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠埃希... 目的:构建人羧基肽酶 H 不同区段抗原的原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,初步验证人羧基肽酶 H 不同抗原区段在羧基肽酶 H 自身抗体检测中的应用价值。方法应用 RT-PCR 方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠埃希氏菌诱导表达重组蛋白,用重组蛋白作为包被抗原建立人羧基肽酶 H 自身抗体的间接 ELISA 方法,评价羧基肽酶 H 抗原在检测新诊断2型糖尿病患者抗羧基肽酶 H 自身抗体中的应用价值。结果获得了羧基肽酶 H 三种不同区段抗原,其中42~476氨基酸区段为较理想的抗原。以该全长抗原作为包被抗原检测95例新诊断2型糖尿病患者,羧基肽酶 H 自身抗体阳性率为8.42%。结论原核克隆表达的人羧基肽酶 H 42~476氨基酸区段抗原具有良好的抗原性,可作为成人隐匿性自身免疫性糖尿病鉴别诊断的候选抗原。 展开更多
关键词 人羧基肽酶H 自身抗体 新诊断2型糖尿病 成人隐匿性自身免疫性糖尿病
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