ATG2B、TGFBR1在非小细胞肺癌中的表达及预后价值

目的探究自噬相关基因2B(ATG2B)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及二者与NSCLC患者预后的关系。方法回顾性选取2018年10月至2019年10月中山大学附属第八医院收治的100例NSCLC患者术中切除的NSCLC组织及癌旁组织作为标本,收集并记录NSCLC患者性别、肿瘤直径、分化程度、病理分型、TNM分期、淋巴结转移等临床资料;免疫组织化学检测癌组织及癌旁组织中ATG2B、TGFBR1表达;Kaplan-Meier法分析NSCLC组织中ATG2B、TGFBR1表达与NSCLC患者预后的关系;多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果NSCLC组织中ATG2B、TGFBR1阳性率分别为74.00%、68.00%,均较癌旁组织(16.00%、12.00%)明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。低分化、TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移及器官转移的NSCLC患者ATG2B、TGFBR1阳性表达比例高于中高分化、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移及器官转移的NSCLC患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织ATG2B阴性表达患者3年生存率为65.38%,高于ATG2B阳性表达患者(31.08%)(Log Rank=11.808,P<0.05),NSCLC组织TGFBR1阳性表达患者3年生存率为26.47%,低于TGFBR1阴性表达患者(68.75%)(Log Rank=21.768,P<0.05)。生存组低分化、TNM为Ⅲ期、淋巴结转移及器官转移的比例明显低于死亡组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示TNM分期、淋巴结转移与ATG2B、TGFBR1表达水平均是NSCLC不良预后的危险因素(P<0.05)。结论ATG2B、TGFBR1在NSCLC患者癌组织中高表达,且二者均是NSCLC患者预后不良的危险因素。

miR-933调控KLF6基因影响非小细胞肺癌的作用研究

背景与目的:miRNA被认为参与肿瘤的发生、发展过程,但miRNA与肺癌的关系仍不完全清楚,探讨miR-933调控Kruppel样锌指转录因子6(Kruppel-like zinc finger transcription factor 6,KLF6)对肺癌细胞系增殖、迁移侵袭和诱导凋亡的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQPCR)检测正常支气管上皮细胞BEAS-2B细胞、肺癌细胞系A549、H460细胞中miR-933的表达。采用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测KLF6 mRNA表达和蛋白水平。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和EdU法检测细胞增殖,采用transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,采用AnnexinⅤ-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色法检测细胞凋亡。结果:肺癌细胞系转染miR-933mimic组KLF6mRNA表达水平明显上调(P<0.05)。与阴性对照组相比,高表达miR-933能增加A549、H460细胞KLF6蛋白的相对表达水平(P<0.05)。过表达miR-933可抑制A549、H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力,差异均有统计意义(P<0.05)。转染miR-933mimc后,A549和H460细胞的凋亡率均显著高于各阴性对照组(P<0.001)。结论:miR-933通过调控KLF6基因的表达,诱导肺癌细胞的凋亡,抑制肺癌细胞的增殖,降低肺癌细胞的迁移和侵袭能力,影响肺癌的发生、发展。

lncRNA SNHG12/miR-320a/β-catenin分子轴调控肺癌细胞的生长和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG12对肺癌细胞生长和侵袭的影响及作用机制。方法QRT-PCR检测肺癌细胞株(A549、H1299和PC9)和正常支气管上皮细胞HBE中SNHG12和miR-320a的表达。双荧光素酶报告基因实验检测SNHG12、β-catenin和miR-320a的靶向关系。以A549细胞为研究对象,实验分组:control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG12组(转染si-SNHG12)、si-SNHG12+si-β-catenin组(共转染si-SNHG12和si-β-catenin)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-320a组(转染miR-320a mmics)、miR-320a+pcDNA3.1组(共转染miR-320a mimics和pcDNA3.1)、miR-320a+SNHG12组(共转染miR-320a mimics和SNHG12过表达载体)。采用MTT法、Transwell小室及AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞活力、侵袭数及凋亡率,蛋白质印迹法检测Cyclin D1、MMP-2和Survivin蛋白的表达。结果肺癌细胞中SNHG12的表达明显高于正常支气管上皮细胞,而miR-320a的表达明显低于正常支气管上皮细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-320a能够降低SNHG12-WT和β-catenin-WT细胞的相对荧光素酶活性,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-SNHG12组细胞活力、Cyclin D1、MMP-2、Survivin蛋白水平降低,细胞侵袭数减少,凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-320a组、miR-320a+pcDNA3.1组细胞活力降低,细胞侵袭数减少,凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-320a+pcDNA3.1组比较,miR-320a+SNHG12组细胞活力升高,细胞侵袭数增多,凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与si-SNHG12组比较,si-SNHG12+si-β-catenin组Cyclin D1、MMP-2、Survivin蛋白水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA SNHG12可通过调节miR-320a/β-catenin分子轴抑制肺癌细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。

miR-671-5p对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移及侵袭影响及其作用机制

目的探讨miR-671-5p调控非小细胞肺癌细胞系增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)和非小细胞肺癌细胞系(A549和H460)中miR-671-5p及其靶基因Kruppel样锌指转录因子6(KLF6)mRNA表达量。miR-671-5p mimic转染A549和H460细胞,设置阴性对照序列,蛋白质印迹法检测KLF6蛋白表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法、EdU法和Transwell小室法分别检测非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果与BEAS-2B细胞比较,miR-671-5p在A549和H460细胞中高表达,表达量分别为1.646±0.026和1.638±0.027,差异有统计学意义,F=153.900,P<0.001;KLF6在A549和H460中的mRNA表达量降低,分别为0.233±0.005和0.382±0.003,差异有统计学意义,F=2 077.000,P<0.001;转染miR-671-5p mimic后,A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强(均P<0.05),KLF6的mRNA和蛋白表达水平受到抑制,其中A549和H460细胞KLF6蛋白水平分别下调至0.252±0.011(t=23.970,P<0.001)和0.290±0.017(t=16.140,P<0.001)。结论 miR-671-5p可能通过调控KLF6基因促进非小细胞肺癌细胞系的增殖、迁移及侵袭,进而影响非小细胞肺癌的发生和发展。