斑马鱼早期胚胎发育过程中IL-1β表达的特点

目的 探讨野生型斑马鱼胚胎早期发育中白细胞介素1β(IL-1β)的表达特点。方法 选取美国国家生物信息技术中心(NCBI)数据库中人类、斑马鱼、猪、绵羊、水牛、小鼠、大鼠、家兔以及豚尾猴9个不同物种IL-1β氨基酸序列进行同源性比对,采用分子进化遗传分析软件(MEGA X)绘制系统进化树;收集4组72受精后小时(hpf)斑马鱼胚胎、25枚/组,提取总RNA及合成互补脱氧核糖核酸(cDNA),构建pGEMT-IL-1β重组质粒并合成地高辛标记的IL-1β反义RNA探针;分别收集4、6、9、12、18、24、48及72 hpf斑马鱼胚胎、25枚/组,采用整胚原位杂交技术检测IL-1β在斑马鱼早期不同时间胚胎发育中的表达及分布状况。结果 IL-1β氨基酸序列在不同物种中相对保守;限制性内切酶双酶切重组质粒及测序结果显示,重组质粒构建无误;原位杂交实验结果表明,4 hpf斑马鱼胚胎中开始观察到IL-1β阳性杂交信号表达,6~12 hpf斑马鱼胚胎中观察到IL-1β阳性杂交信号持续表达,12 hpf斑马鱼胚胎中表达尤为明显,18 hpf斑马鱼胚胎躯干背侧、眼睛以及中后部中间细胞群等部位观察到不同程度的IL-1β阳性杂交信号表达,24 hpf斑马鱼胚胎全身躯干观察到IL-1β广泛表达,且头部及眼睛部位表达尤为明显,48~72 hpf斑马鱼胚胎观察到IL-1β表达逐渐从头部延伸至全身躯干且于肌肉组织中表达尤为明显。结论 斑马鱼IL-1β在进化过程中具有相对保守性,斑马鱼早期胚胎发育过程中IL-1β有不同程度的表达。