苍耳等14种植物对植物病原菌的抑菌活性

以番茄灰霉菌、辣椒丝核菌、黄瓜枯萎菌、黄瓜黑星菌和番茄早疫菌为供试菌,用生长速率法和孢子萌发法对14种植物提取物的离体生物活性进行了测定。结果表明:在供试质量浓度为0.1 g/mL时,苍耳茎叶、百部根、龙葵对辣椒丝核菌和黄瓜枯萎菌的抑制率达到100%;黄花蒿、苦参根、狼毒根对5种供试菌的抑制率均在60%以上。苍耳根、苍耳茎叶、泽漆、苦参根、龙葵、黄花蒿、蒲公英提取物至少对1种供试菌孢子萌发抑制率大于90%。本试验中,苍耳茎叶和根提取物对供试菌的菌丝生长和孢子萌发均显示了很高的抑制作用。

二斑叶螨不同抗性品系最佳内参基因的筛选及CYP392E亚家族基因的表达分析

【目的】筛选二斑叶螨Tetranychus urticae敏感品系(SS)、抗阿维菌素品系(Av-R)和抗螺虫乙酯品系(Sp-R)中合适的内参基因,研究二斑叶螨不同抗性品系CYP392E亚家族基因表达水平的变化。【方法】采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术,对二斑叶螨α-tubulin,β-actin,ELFn,GAPDH,5.8S rRNA基因和SDHA共6个看家基因的表达稳定性进行分析以期筛选出合适的内参基因,并在此基础上进一步分析二斑叶螨不同品系P450酶系CYP392E亚家族基因的表达量差异。【结果】在二斑叶螨SS,Av-R和Sp-R品系中稳定性最高的内参基因为ELFn。以ELFn为内参基因,CYP392E7基因相对表达量在二斑叶螨Av-R品系中显著高于SS品系(P<0.05),为后者的2.18倍,而在Sp-R品系和SS品系中差异不显著;其余基因的相对表达量在2个抗性品系中均没有增加,Av-R品系的CYP392E4,CYP392E9和CYP392E10基因以及Sp-R品系的CYP392E1和CYP392E9基因相对表达量甚至显著下调,分别为SS品系的48%,74%,65%,63%和73%。【结论】在二斑叶螨SS,Av-R和Sp-R品系中ELFn为理想的内参基因,Av-R品系CYP392E4,CYP392E7,CYP392E9和CYP392E10基因相对表达量的显著变化可能与二斑叶螨对阿维菌素的抗性形成有关,Sp-R品系CYP392E1和CYP392E9基因也可能与二斑叶螨对螺虫乙酯的抗性形成有一定联系。

苍耳抑菌成分提取工艺

用4种不同的溶剂和连续回流、冷浸以及振荡3种方法对苍耳抑菌成分的提取工艺进行了研究,并以番茄灰霉病菌、辣椒丝核病菌、黄瓜枯萎病菌、黄瓜黑星病菌和番茄早疫病菌为供试真菌进行了抑菌效果比较,.结果表明,丙酮、甲醇分别为苍耳茎叶和苍耳根的最佳提取溶剂,而连续回流提取法为最佳提取方法.

瑞香狼毒根中抑菌成分提取工艺

用5种不同的溶剂和连续回流、冷浸以及振荡3种方法对瑞香狼毒根进行了提取研究。结果表明,乙醇为瑞香狼毒根的最佳提取溶剂,连续回流提取法为其最佳提取方法。

两种方法在二斑叶螨电压门控钠离子通道基因突变检测中的应用

靶标突变是二斑叶螨对拟除虫菊酯类药剂产生高抗性的重要原因,而用于靶标突变检测的方法较多,有必要寻找一种经济、灵敏且有效的方法进行突变检测。本研究根据二斑叶螨电压门控钠离子通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)基因上已报道的3个点突变(L1022V、A1215D和F1538I),采用PCR产物直接测序和限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)两种不同的方法对二斑叶螨田间种群(WW-R和LZ-R)进行靶标VGSCs基因突变检测。PCR产物直接测序结果显示,与SS种群相比,WW-R和LZ-R种群VGSCs基因均存在两种氨基酸突变A1215D和F1538I,但没有发现存在F1022V突变,其中A1215D突变发生在结构域ⅡS6-ⅢS1连接处,F1538I突变发生在结构域ⅢS6螺旋处,而采用PCR-RFLP方法只检测出A1215D突变。两种不同的方法对田间采集的二斑叶螨种群VGSCs基因突变位点检测的比较,为抗菊酯类药剂二斑叶螨种群抗性分子监测技术的建立和抗性治理奠定了基础。

二斑叶螨抗甲氰菊酯种群解毒酶基因表达分析

基因 mRNA 水平相对表达量的显著变化是二斑叶螨对拟除虫菊酯类药剂产生抗性的重要机制。为了揭示二斑叶螨对甲氰菊酯抗性产生的解毒酶分子机理，本研究采用实时荧光定量 PCR（quantitative real time PCR，qRT－PCR）方法分析二斑叶螨实验室敏感（SS）和田间种群（LZ-R、GN-R、WW-R、TS-R 和 LX-R）主要解毒酶谷胱甘肽转移酶（glutathione s-transferases，GSTs）、细胞色素 P450单加氧酶（cytocheome P450 monooxygenases，P450s）及羧酸酯酶（carboxyl／cholinesterases，CCEs）基因 mRNA 水平相对表达量的差异。结果表明，二斑叶螨不同种群不同解毒酶基因的相对表达量不同。WW-R 和 TS-R 种群中 TuGSTd05以及 LX-R 种群中 TuGSTd01和 TuG-STd06基因表达量均显著上调，为 SS 种群的1．42～2．34倍，而 GN-R 种群中 TuGSTd04，LZ-R 种群中 TuGSTd05和 GSTd09表达量显著下调，为 SS 种群的0．41～0．70倍；P450s 基因 CYP406A1和 CYP4CL1表达量在 LZ-R、GN-R 以及 WW-R 种群中均显著上调，分别为 SS 种群的1．80～4．88倍，此外，CYP 387A1在 LZ-R 种群中显著上调2．19倍，而在 LX-R 种群中显著下调0．42倍；CCEs 基因 TuCCE-35表达量在 WW-R 和 TS-R 种群中显著上调，分别为 SS 种群的2．82和3．09倍，而 TuCCE-36基因在所有种群中的表达量均不显著。二斑叶螨不同种群中解毒酶基因 GSTs、P450s 和 CCEs 的显著上调或下调可能与甲氰菊酯的抗性形成有关。

天津口岸1999～2004年3月出入境人员HIV感染监测结果分析

目的 为了解天津口岸出入境人员HIV感染状况及发展趋势 ,研究制定切实有效的防控措施。方法 对天津口岸自 1 999～ 2 0 0 4年 3月出入境体检中检出 1 3例HIV感染者进行分析 ,从职业、性别、国籍、年龄、传播途径等方面进行统计分析。结果 在HIV感染者中 ,1 999年检出 1例、2 0 0 0年在来华留学生中检出 1例、2 0 0 1年在来华留学生中检出 4例、2 0 0 2年在来华留学生中检出 2例、2 0 0 3年检出 4例、2 0 0 4年 3月检出 1例。感染者主要是非洲来华学习进修留学生、船员和劳务人员。主要以性传播为主 ,也有输血感染的病例。结论 天津口岸出入境人员HIV感染率呈上升趋势 ,因此 ,加大天津口岸HIV监测与防控力度是十分必要的。

黄花棘豆水提液对燕麦的化感作用及其机理研究

以燕麦种子和幼苗为受体,采用室内培养皿法、室内盆栽法和生化分析法,研究了甘肃天祝草地有毒植物黄花棘豆水浸提液对燕麦种子、幼苗的化感作用及其作用机理.结果表明:(1)黄花棘豆水提液均可抑制燕麦种子萌发和幼苗生长,且化感抑制作用随着水提液浓度的增大显著增强;燕麦幼苗根在高浓度的黄花棘豆水提液作用下表现出畸形.(2)随着水提液浓度的增大,根尖有丝分裂逐渐减弱及分裂高峰时间逐渐推迟,种子淀粉酶活性也逐渐下降.(3)燕麦幼苗茎叶部和根部的可溶性糖、可溶性蛋白和叶绿素的含量随着水提液浓度的增大以及作用时间的延长逐渐降低,丙二醛含量则逐渐升高.(4)随着黄花棘豆水提液浓度的增大,其对燕麦幼苗过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的抑制作用逐渐增强,随着作用时间的延长抑制作用逐渐减弱.研究发现,黄花棘豆水提液通过降低燕麦幼苗渗透调节物质含量,抑制保护性酶活性,增加膜脂过氧化伤害,导致根尖细胞分裂缓慢,抑制燕麦种子萌发和幼苗生长,从而表现出化感作用,且化感作用随着浓度的增加而增强.

二斑叶螨对螺螨酯抗药性及对18种杀螨剂交互抗性

采自甘肃兰州兴隆山公园的二斑叶螨(Tetranychus urticae Koch),用雌雄单系培养敏感品系(S),用螺螨酯处理二斑叶螨种群培养抗性品系(SP-R),用室内生测法对二斑叶螨S和SP-R品系进行室内毒力测定。结果表明,二斑叶螨对螺螨酯抗性发展初期较慢,中期稳定,后期较快,选育至26代抗性指数(RI)达58.83。SP-R对甲氰菊酯、氯氰菊酯有一定的交互抗性,RI分别为11.54和10.03;对苯丁锡、四螨嗪、苦皮藤生物碱、阿维菌素、氯氟氰菊酯、哒螨.四螨嗪、哒.水胺硫磷、三唑锡、三氯杀螨醇、哒螨灵、氧化乐果无交互抗性(1<RI<5.00);对浏阳霉素、毒死蜱、噻螨酮、柴油、哒螨灵、唑螨酯可能存在负交互抗性(RI<1)。

二斑叶螨多重抗性品系最优内参基因的筛选及CYP392A亚家族基因的表达分析

【目的】筛选出二斑叶螨Tetranychus urticae Koch抗甲氰菊酯、阿维菌素及螺螨酯混剂的实时定量PCR最优内参基因。【方法】选取5.8S rRNA,α-tubulin,TBP,β-actin,ELFn,RPL13a,GAPDH和SDHA 8个候选内参基因,以Ge Norm,Best Keeper和Normfinder 3个软件分析这8个基因在二斑叶螨多重抗性品系中的表达稳定性,并以筛选的内参基因分析二斑叶螨P450酶系CYP392A亚家族基因的表达水平。【结果】经Ge Norm,Best Keeper和Normfinder 3个软件综合评价确定ELFn基因为二斑叶螨敏感品系(susceptible strain,SS)和多重抗性品系(multipesticide resistant strain,Mp-R)各发育阶段的最优内参基因。以ELFn为内参基因对二斑叶螨CYP392A亚家族16个基因表达量进行分析,结果表明:经多重抗性选育40代后,Mp-R品系卵期CYP392A1表达量显著上调;CYP392A16基因在各发育阶段表达量极显著高于SS品系相应发育阶段;其他基因表达量在敏感品系和抗性品系之间差异不显著。【结论】筛选出了SS和Mp-R品系中各发育阶段最佳内参基因为EFLn;Mp-R品系CYP392A亚家族16个基因的表达量在幼螨和若螨阶段低于卵与成螨阶段,其中CYP392A16基因在二斑叶螨多重抗性的形成中起主要作用。该结果为二斑叶螨多重抗性研究奠定了一定基础。

黄花棘豆甲醇提取液对油菜、燕麦、反枝苋和狗尾草萌发和幼苗生长的影响

通过室内生测法,研究了不同浓度的黄花棘豆甲醇提取液对油菜、燕麦、反枝苋和狗尾草萌发和幼苗生长的影响。结果表明:黄花棘豆植株地上部分和地下部分的甲醇提取液对4种受体的萌发和幼苗生长均有影响,显著抑制了4种受体萌发和生长。同时随着浓度的降低,其抑制作用逐渐减弱,表现出较强的浓度效应。其中浓度为0.100 g/mL的黄花棘豆甲醇提取液对油菜、燕麦、反枝苋和狗尾草的种子萌发、幼苗生长和根生长抑制作用最为明显。

抗甲氰菊酯二斑叶螨种群对12种杀螨剂的抗药性及交互抗性

采用生物测定方法对室内选育的抗甲氰菊酯二斑叶螨种群和天水、静宁采集的抗性二斑叶螨即天水抗性种群（Tianshui-Resistance,Tsh-R）和静宁抗性种群（Jingning-Resistance,Jn-R）对12种杀虫杀螨剂交互抗性和抗药性进行了研究.结果表明：室内用甲氰菊酯药剂筛选二斑叶螨38代,抗性达到247.35倍;甲氰菊酯种群对三氯氟氰菊酯、苦皮藤生物碱、氯氰菊酯、三唑锡和四螨嗪有明显的交互抗性,抗性指数（RI）分别为19.53、19.02、12.13、8.80和5.13,而对克螨特、哒螨.四螨嗪、阿维菌素、哒螨灵、噻螨酮、毒死蜱的交互抗性指数均在5以下.Tsh-R和Jn-R二斑叶螨抗性种群对甲氰菊酯有很高的抗药性,RI值分别为103.76和92.30;对三氯氟氰菊酯、苦皮藤生物碱、氯氰菊酯、克螨特也有一定程度的抗药性,RI值的范围为5.04~29.76;对四螨嗪、哒螨.四螨嗪、阿维菌素、哒螨灵、噻螨酮、毒死蜱、三唑锡有轻微或无抗性,RI值均小于5.00.

黄花蒿化感物质对受体燕麦化感作用机理的初步研究

测定了不同浓度的黄花蒿水提取物对燕麦植株体内几种酶活性（12-60 h）的影响.结果表明：黄花蒿水提取物可抑制燕麦体内多酚氧化酶（PPOD）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）等抗性酶的活性,提高苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性.

黄花蒿对4种受体植物的化感作用研究

采用室内生物测定法,以小麦、燕麦、黄瓜和萝卜为受体,研究了黄花蒿对受体植物的化感作用,结果显示:黄花蒿水浸提液对小麦、燕麦的化感综合效应(SE)为56.29、57.17;其地上部淋溶物对小麦和黄瓜表现为抑制作用,对燕麦和萝卜表现为促进作用;其茎叶挥发物对4种受体植物根长生长有较强的抑制作用;其残体分解物前10d对受体有很强的抑制作用,根系分泌物对小麦和燕麦抑制作用较强,对萝卜和黄瓜表现为促进作用。结果表明,黄花蒿5种不同途径来源的化感物质对4种受体植物都有不同程度的化感作用,且黄花蒿主要是通过地上部淋溶、挥发向环境中释放化感物质,其次是通过根系分泌物对授体植物产生化感作用。

苍耳提取物对番茄灰霉病菌抑制机理的研究

以番茄灰霉病菌为供试材料,对苍耳提取物的抑菌机理进行了研究.结果表明:苍耳提取物对番茄灰霉菌的菌丝生长、分生孢子的形成和萌发都具有较强的抑制作用,当处理浓度为30 mg/mL时,苍耳提取物对番茄灰霉菌菌丝生长的抑制率达78.1%,对分生孢子形成和萌发的抑制率分别为85.1%和77.4%.苍耳提取物能引起番茄灰霉菌菌丝细胞膜透性发生变化,造成菌丝体内含物的渗漏,从而导致液体培养基电导率增加.用苍耳提取物处理番茄灰霉病菌后,可使菌丝体可溶性蛋白含量下降.

二斑叶螨多重抗性品系解毒酶基因表达模式解析

【目的】二斑叶螨(Tetranychus urticae)是一种重要的农业害螨,由于个体小、繁殖快等特点,极易产生抗药性,论文从生理生化和分子水平探讨二斑叶螨m RNA水平相对表达量的变化,旨在明确二斑叶螨对混剂的多重抗性机制,为该螨的综合治理提供依据。【方法】在温度(25±l)℃,相对湿度60%±5%,光周期L﹕D=16 h﹕8 h的室内条件下,于盆栽豇豆苗上饲养不接触任何药剂的二斑叶螨敏感品系(SS)和用螺螨酯、甲氰菊酯、阿维菌素以其单剂的致死中浓度(LC50)为汰选浓度混合连续汰选的多重抗性品系(Mp-R);Mp-R品系用药4—5次待其种群扩增后,参照FAO推荐的叶片残毒法进行室内毒力测定一次,计算其LC50,求出抗性倍数(RR),并记为一个汰选周期;连续汰选3个周期后,逐渐增加汰选浓度,用Polo Plus软件求其毒力回归方程、LC50、抗性指数及卡方值;采用生化分析法测定选育50代的二斑叶螨SS与Mp-R品系卵、幼螨、若螨、雄成螨、雌成螨的谷胱甘肽S转移酶(GSTs)、羧酸酯酶(Car Es)、多功能氧化酶(MFOs)的活性,以ELFn为内参基因,采用RT-q PCR技术以比较Ct值的方法计算二斑叶螨Mp-R品系中10个与抗性相关的解毒酶基因的表达量。【结果】在室内经50代抗性选育,二斑叶螨对阿维菌素、甲氰菊酯及螺螨酯的LC50分别达到1 103.55、5 993.33和2 345.62 mg?L-1,抗性倍数分别为603.03、167.65和51.77倍。卵中Mp-R品系MFOs比活力显著高于SS品系,GSTs、Car Es比活力差异不显著;其他发育阶段Mp-R品系的GSTs、Car Es比活力显著高于SS品系,MFOs比活力则差异不显著;Mp-R品系雌成螨的GSTs、Car Es比活力显著高于其他发育阶段,卵的MFOs比活力显著高于其他发育阶段。与敏感品系相比,二斑叶螨Tu GSTd05、Tu GSTd06与Tu GSTd09基因表达量在Mp-R品系各发育阶段显著上调1.80倍以上,Tu GSTd01表达量在若螨期显著上调1.63倍,其他发育阶段差异不显著;CYP392E10表达量在卵中极显著上调5.87倍,幼螨、若螨阶段显著上调2.15倍和2.09倍,成螨阶段表达量差异不显著;CYP392A6在卵、幼螨与若螨阶段表达量均显著上调1.89、1.64和1.59倍,在成螨阶段表达量差异不显著。CYP392A16在各发育阶段均极显著上调,卵中上调6.97倍,幼螨中上调8.20倍,若螨中上调8.88倍,雄成螨上调7.34倍,雌成螨上调8.59倍。CYP392D 8在卵、幼螨和雄、雌成螨中表达量均显著上调2.18、2.00、2.03和2.41倍,在若螨阶段表达量差异不显著;Tu CCE35在若螨及雄、雌成螨中表达量显著上调1.58、1.86和2.65倍;Tu CCE36在卵和雄、雌成螨中表达量显著上调1.73、1.89和2.14倍。【结论】与敏感品系相比,二斑叶螨Mp-R品系10个与抗性相关的解毒酶基因表达量在其不同发育阶段均有不同程度的变化。CYP392A16表达量在各发育阶段上调较大,可能参与了二斑叶螨多重抗性的形成;其余基因表达量均未见大幅度上调,这些基因是否参与了对3种药剂的代谢还需进一步验证。

12种有毒植物的化感效应比较研究

以油菜、燕麦、反枝苋和狗尾草为受体,采用室内生物测定法和盆栽法,研究了甘肃天祝天然草地12种有毒植物的化感作用.结果表明:离体条件下,黄花棘豆、臭蒿、节烈角茴香和露蕊乌头植株水浸液对4种受体植物化感作用较强,其综合化感效应值(M)分别为-0.7815、-0.6859、-0.6670和-0.6432;其次是密花香薷、醉马草、美丽凤毛菊、甘肃马先蒿、迷果芹和异叶青兰,其M值均低于-0.4;对受体植物化感作用较弱的是乳白香青(M值为-0.3439)和铁棒锤(M值为-0.2625).黄花棘豆植株对盆栽的油菜、燕麦、反枝苋和狗尾草幼苗生长有较强的抑制作用,综合化感效应M值分别为-0.5296、-0.3562、-0.5201和-0.5884.可见黄花棘豆表现出较强的化感作用,具有一定的开发利用价值.

二斑叶螨对螺螨酯抗性和敏感种群相对适合度的研究

[目的]研究二斑叶螨对螺螨酯的抗药性与适合度的关系,为该螨的抗性治理提供科学依据。[方法]在室内温度(25±1)℃,相对湿度(70±5)%,光照14 h条件下通过构建实验种群生命表,比较二斑叶螨对螺螨酯抗性种群(R)和敏感种群(S)的生长发育和繁殖特征参数,用净增殖率(R0)来确定抗性种群的生物适合度。[结果]二斑叶螨抗性种群的若螨期和全世代较敏感种群分别延长0.92 d和0.82 d;雌螨存活时间较敏感种群缩短3 d;二斑叶螨对螺螨酯抗性种群的相对适合度为敏感种群的0.76倍,存在适合度缺陷。[结论]在生产上应注意对螺螨酯的合理使用,以延缓其抗性进程,实现可持续治理。

二斑叶螨对甲氰菊酯抗药性选育及其对17种常用杀螨剂的交互抗性

采用玻片浸渍法,用甲氰菊酯对二斑叶螨敏感种群进行抗性选育,经过19代的汰选,获得抗性指数为88.37倍的抗甲氰菊酯二斑叶螨种群.对17种常用杀螨剂的交互抗性测定结果表明,该种群对三氯氟氰菊酯、甲基异柳磷、双甲脒和苦皮藤生物碱有明显交互抗性,抗性指数分别达12.21、11.91、39.54、10.82;对氧化乐果、苯丁锡、唑螨酯、氯氰菊酯及三唑锡交互抗性次之,抗性指数分别为6.35,7.54、6.878、9.79、6.65;而对哒螨灵、三氯杀螨醇、克螨特、阿维菌素、噻螨酮、四螨嗪、哒螨.四螨嗪及哒.水胺硫磷(抗性指数<5.00倍)等杀螨剂无明显的交互抗性.

顶孢霉菌对小菜蛾的毒力及体内保护酶活力的影响

采用浸渍法和酶活力测定方法研究了顶孢霉菌对小菜蛾的毒力及对小菜蛾体内蛋白质含量和保护酶活力的影响.结果表明:在接种后的第5d,顶孢霉菌对小菜蛾的致死中浓度(LC50)为5.32×106个.mL-1,其毒力回归方程为y=2.66+0.35x;顶孢霉菌侵染3龄小菜蛾后,处理组蛋白质含量降低,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)及过氧化氢酶(CAT)3种保护酶活性下降,处理组前期,3种保护酶活性与对照差异不明显,但后期处理组酶活性明显低于对照.处理组由于顶孢霉菌的侵染,导致小菜蛾有机体丧失免疫能力,SOD、POD和CAT活性下降,并随着时间延长,保护酶活力下降愈明显.