家蚕蜕皮液羧肽酶A的表征及免疫荧光定位分析

蜕皮是许多变态发育昆虫的一种重要生理现象,昆虫通过蜕皮液中的酶对新旧表皮进行分离。已有相关蛋白组学的研究证明,家蚕蜕皮液中具有一种含量丰富的羧肽酶A(Bombyx mori-carboxypeptidase A,Bm-CPA),目前对其作用功能尚不清楚。为了更好地了解Bm-CPA在家蚕蜕皮发育过程的作用,本研究通过生物信息学分析、实时荧光定量PCR、抗体制备、免疫荧光染色和毕赤酵母表达等方法对Bm-CPA进行了研究。结果显示,Bm-CPA具有保守的M14锌羧肽酶结构域和糖基化位点,并且受蜕皮激素(20-hydroxyecdysone,20E)调控,在眠期和上簇期的表皮中大量表达;免疫荧光染色显示Bm-CPA在眠期的表皮中富集,Bm-CPA抑制剂会导致幼虫因无法蜕皮而死亡;通过毕赤酵母表达系统在体外成功获得大量的重组Bm-CPA蛋白。这些结果为深入了解家蚕蜕皮发育过程提供了一定的参考。

高浓度氧或HCl处理条件下家蚕胚胎早期比较转录组分析

本研究以阐明阻断蚕卵滞育机制为目标,通过获得连续时间点的转录组数据,深入解析滞育过程的分子变化。采用高通量测序技术对高浓度氧、HCl处理的滞育蚕卵(以下简称"处理组")和未处理的对照组,在产后26 h、32 h和44 h取样进行转录组测序,在产后26 h到32 h阶段,处理组和对照组的共同差异基因(DEGs) 233个,占整个数量的44.5%;32 h到44 h的阶段,处理组和对照组共同DEGs仅16个,占整体数量的6.7%,但是此时处理组的共同DEGs为93个,占整体数量的38.9%。进一步对筛选的DEGs进行GO和KEGG通路分析,GO分析表明DEGs在处理组中在氧化还原功能上得到了显著富集,但是在对照组中没有得到显著富集;KEGG分析发现在产后26 h到32 h,处理组和对照组的DEGs都在溶酶体等代谢通路上调富集,但在产后32 h到44 h,处理组的蚕卵代谢通路变化相似,都在甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸等代谢通路富集,而对照组在精氨酸和脯氨酸等代谢通路富集。综上,在产后初期,发育时间对蚕卵发育的影响大于处理的影响,然而到了后期处理的影响则逐渐突显。