耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌耐药性、临床感染特征及mcr基因分析

目的分析耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)临床感染特征及耐药机制,为临床防治CRE感染提供参考。方法收集2021年7月—2022年6月某三甲医院临床分离的CRE菌株及患者资料,采用聚合酶链反应(PCR)检测菌株耐药基因,诱导试验验证mcr-9阳性菌株的诱导耐药性。结果共纳入167株CRE,以肺炎克雷伯菌(38.9%)和阴沟肠杆菌(35.3%)为主,呈现多重耐药表型,3株(1.8%)对多粘菌素B耐药。CRE以携带bla NDM(52.1%,87株)为主,其次为bla KPC(34.7%,58株)。根据碳青霉烯酶将CRE感染患者分为NDM组和KPC组。单因素分析结果显示,在入住ICU日数≥7 d、行气管插管、感染前使用碳青霉烯类药物等影响因素方面,KPC组高于NDM组,治愈率低于NDM组(均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,置入胃管、肺部疾病及恶性肿瘤为影响携带不同碳青霉烯酶基因CRE感染患者预后的独立危险因素(P<0.05)。多粘菌素B耐药菌株均为mgr B点突变,7株(4.2%)CRE携带mcr-9,且多数同时携带bla NDM。经多粘菌素B诱导后,4株mcr-9阳性CRE的MIC值较诱导前升高。结论该地区CRE以携带bla NDM、bla KPC为主,少数同时携带mcr-9和bla NDM,呈现多重耐药。临床应加强防控,预防其临床传播。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌临床分布、耐药特征及携带mcr基因分析

目的分析临床耐碳青霉烯类大肠埃希菌(carbapenem-resistance Escherichia coli,CREC)分布及耐药特征,检测其碳青霉烯酶合成基因及质粒介导的多黏菌素耐药(mobile colistin resistance,mcr)基因携带情况,为多重耐药菌防控提供参考。方法收集2020年7月~2021年6月期间安徽医科大学第二附属医院住院患者送检的各类临床标本分离非重复CREC菌株,微量肉汤稀释法进行药敏试验。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增及测序技术检测碳青霉烯酶基因及mcr系列基因。多黏菌素诱导试验检测mcr-9阳性菌株的诱导耐药特征,脉冲凝胶电泳(pulsedfield gel electrophoresis,PFGE)分析其同源性。结果共收集CREC菌株33株,主要分离自尿液标本(30.3%)、痰液标本(24.2%)、脓液/分泌物标本(18.2%)及血液标本(15.2%),菌株呈现多重耐药表型。PCR检测结果显示,23株CREC(69.7%)携带bla_(NDM)基因,8株CREC(24.2%)携带bla_(KPC)基因。有3株(9.1%)bla_(NDM)阳性CREC菌株同时携带mcr-9基因,PFGE分析显示3株细菌间无同源性。上述mcr-9阳性菌株经过1/2倍最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)多黏菌素B药物诱导6h后,对多黏菌素B的MIC值均升高。结论临床CREC呈现多重耐药,主要碳青霉烯酶基因为bla_(NDM)及bla_(KPC)。部分菌株同时携带bla_(NDM)及mcr-9基因,且呈现多黏菌素诱导耐药特征。实验室应加强监测,防控其流行播散。

血流感染肺炎克雷伯菌临床特征、毒力基因及分子流行病学研究

目的探讨血流感染肺炎克雷伯菌(KPN)的临床及分子生物学特征。方法收集2019年1月—2020年12月,血流感染患者血液分离的KPN。应用Microflex LT型质谱仪进行菌种鉴定,Vitek-2分析仪进行药敏试验,结果判定参照CLSI 2019版标准。检测KPN多位点序列分型、荚膜分型及毒力因子等。应用全基因组测序技术分析其中碳青霉烯类耐药KPN(CRKP)分子生物学特征。结果2年内共有72株KPN纳入研究,根据感染类型分为医院感染(HABSI)组(39株,54.2%)及社区感染(COBSI)组(33株,45.8%)。在入住ICU>10d、侵袭性诊疗、使用碳青霉烯类药物和死亡或放弃治疗方面,HABSI组患者的比例高于COBSI组(P<0.05)。HABSI组对常用抗菌药物的耐药率高于COBSI组。HABSI组菌株中共检出19株CRKP(26.4%),94.7%的CRKP携带blaKPC-2,主要为K64-ST11型,且存在高度亲缘关系,所有K64-ST11型CRKP均携带IncHI1B型质粒。结论血流感染患者血液分离的CRKP呈现多重耐药,K64-ST11型为其主要分子型别,携带多种质粒介导的毒力因子,且存在医院内感染的克隆播撒。

社区获得性致下肢气性坏疽ST660型肺炎克雷伯菌全基因组测序及毒力特征分析

目的对1株致下肢气性坏疽肺炎克雷伯菌(KPN)进行全基因组测序及毒力特性分析,为认识致社区获得性重症感染KPN分子毒力特征提供参考。方法患者于2018年3月13日进入急诊科治疗,主要临床症状为高热、左下肢气性坏疽及糖尿病酮症酸中毒。取患者脓液标本进行分离培养、菌株鉴定、高黏表型及药敏检测。对菌株进行全基因组测序并分析其多位点序列分型、荚膜分型、质粒分型、毒力及耐药基因。通过接合及消除试验分析质粒特征。血清杀菌试验及大蜡螟感染模型分析菌株毒力表型,双样本t检验比较待测菌株和对照菌株对大蜡螟幼虫半数致死率(LD50)差异。结果检出菌株KPN41053,仅对氨苄西林耐药,高黏表型阴性。KPN41053染色体总长5 377 071 bp,属于ST660型,荚膜型为K16;携带一个IncFIB(K)/HI1B型毒力质粒(207 506 bp),质粒包含多种毒力因子且序列与pLVPK高度相似,但其中rmpA和rmpA2均为假基因。该质粒接合试验阴性。通过质粒消除获得变异株KPN41053PC。毒力表型分析显示,KPN41053为血清抗性(6级),而KPN41053PC为血清中度敏感(3级),KPN41053对大蜡螟幼虫的lgLD50与高毒力对照株(ST23-K1型)差异无统计学意义(t=0.32,P=0.765),低于KPN41053PC(t=5.97,P=0.004)。结论 KPN41053为1株属于ST660型且高黏表型阴性的非典型高毒力KPN,毒力质粒为其关键毒力因子。KPN可导致糖尿病患者发生社区获得性气性坏疽。