UHPLC-TOF-MS结合网络药理学与实验验证探讨左金丸治疗抑郁症作用机制

基于入血成分、网络药理学与实验验证研究策略,探讨左金丸治疗抑郁症的作用机制。采用UHPLC-TOF-MS对左金丸含药血清进行定性分析。采用PharmMapper、GeneCards等数据库获取入血成分及疾病相关靶点,取交集后构建蛋白互作(PPI)网络,筛选核心靶点并进行GO功能和KEGG通路富集分析。采用Cytoscape 3.7.2软件构建“化合物-靶点-通路”网络,预测左金丸抗抑郁的作用靶点与信号通路,并构建CUMS抑郁模型小鼠对关键靶点进行验证。结果显示,共鉴定左金丸入血成分21个,主要为生物碱类化合物。化合物-疾病共有靶点155个,PPI网络分析筛选出核心靶点67个。KEGG富集与PPI网络分析发现,左金丸可能通过AMPK/SIRT1、NLRP3、insulin等靶点与通路发挥抗抑郁作用。动物实验结果表明,左金丸可显著改善CUMS抑郁模型小鼠的抑郁样行为,显著降低海马区和血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平,激活AMPK/SIRT1信号,并降低NLRP3的蛋白表达水平。综上可得,左金丸可能主要通过激活小鼠海马区AMPK/SIRT1信号通路,抑制NLRP3激活及神经炎症,从而发挥抗抑郁作用。

LC-MS/MS测定大鼠血浆中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的浓度及苍术-香附提取物在大鼠体内的药动学研究

目的建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测大鼠血浆中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ浓度,研究苍术-香附提取物灌胃后大鼠体内3种活性成分的药动学特征。方法以苯海拉明为内标,血浆样品采用乙酸乙酯液-液萃取法处理,采用ACQUITY UPLC BEH-C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈-体积分数0.05%甲酸水,通过电喷雾离子源进行正离子扫描,多反应监测技术(multiple reaction monitoring,MRM)检测模式。检测离子:m/z 231.2→185.1(白术内酯Ⅰ)、m/z 233.2→187.1(白术内酯Ⅱ)、m/z 249.2→231.1(白术内酯Ⅲ)、m/z 256.2→167.1(苯海拉明)。利用DAS 3.2.2软件计算药动学参数。结果白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的线性范围分别为0.3150~20.00、0.3150~20.00、3.150~200.0 ng·mL^(-1),方法学的各项指标均符合要求。苍术-香附提取物灌胃给药后的3种活性成分的药-时曲线呈双峰现象,t_(1/2)分别为(12.593±3.27)(14.868±5.51)(9.736±4.08)h;t_(max)分别为(0.458±0.29)(0.389±0.13)(0.347±0.08)h;ρ_(max)分别为(7.719±4.93)(13.43±3.50)(153.702±23.51)ng·mL^(-1);AUC_(0-t)分别为(42.592±19.45)(64.132±15.12)(1042.156±168.43)ng·h·mL^(-1)。结论该LC-MS/MS操作简便,灵敏度高,满足了严格的方法学验证,可用于苍术-香附提取物在大鼠体内药动学研究。

UPLC-Q-TOF-MS/MS法定性与HPLC法定量分析岩黄连总碱成分

目的:定性分析岩黄连总碱化学成分,并对其中8个含量较高的生物碱类成分进行定量分析。为研究岩黄连总碱的药效物质基础提供依据,也为岩黄连总碱质量控制提供参考。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)定性分析岩黄连总碱化学成分,并用高效液相色谱法(HPLC)同时测定岩黄连总碱中原阿片碱、非洲防己碱、延胡索乙素、黄连碱、脱氢卡维丁、巴马汀、小檗碱和白屈菜红碱的含量。结果:岩黄连总碱提取物中共鉴定出38个生物碱类成分,其中原小檗碱类13个,小檗碱类9个。此外,定量分析的8个成分在各自范围内线性良好(r>0.999 2),加样回收率96.70%~103.8%,RSD 0.68%~1.97%。结论:该方法专属性好,准确性高,可用于岩黄连总碱提取物的定性、定量分析。