前列腺癌CK5^+CK8^+细胞的分选及其分子生物学特性

目的在人前列腺癌细胞系中分选CK5^+CK8^+细胞,了解其分子生物学特性。方法流式细胞术在人前列腺癌细胞系PC3和LNCaP中分选CK5^+CK8^+细胞,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法方法检测LNCaP细胞分选的CK5^+CK8^+细胞CK5、CK8、雄激素受体(AR)和前列腺特异抗原(PSA)的表达,细胞迁移实验检测CK5^+CK8^+细胞迁移能力,琼脂糖凝胶克隆形成实验检测CK5^+CK8^+细胞成瘤能力。采用t检验进行统计学分析。结果采用流式细胞术可以在PC3中分选出(21.3±4.6)%的CK5^+CK8^+细胞,在LNCaP中分选出(1.2±0.4)%的CK5^+CK8^+细胞。与非CK5^+CK8^+细胞相比,LNCaP中分选的CK5^+CK8^+细胞CK5 mRNA表达差异有统计学意义(t=10.435,P<0.001),CK8 mRNA表达差异无统计学意义(t=1.974,P=0.121),AR和PSA mRNA表达差异有统计学意义(t=4.317,3.232;P=0.016,0.037)。蛋白质印迹法检测得到类似结果。细胞培养7 d后,CK5^+CK8^+细胞和非CK5^+CK8^+细胞均可以在Transwell小室迁移生长,迁移细胞数分别为(60±7)个和(32±5)个,2者比较差异有统计学意义(t=6.031,P=0.004)。细胞培养14 d后,CK5^+CK8^+细胞和非CK5^+CK8^+细胞均可以在软琼脂糖凝胶中克隆性生长,阳性克隆数分别为(71±5)个和(27±3)个,差异有统计学意义(t=13.009,P<0.001)。结论人前列腺癌细胞系LNCaP和PC3都可以分选出CK5^+CK8^+细胞,LNCaP中CK5^+CK8^+细胞AR和PSA均有一定程度表达,迁移和成瘤能力增强。

基于SEER数据库Gleason评分7分前列腺癌临床预测模型的建立及验证

目的建立并验证针对Gleason评分(Gleason score,GS)7分前列腺癌(PCa)患者生存预后的临床预测模型。方法对SEER数据库中2010-2016年间初次诊断为GS 7分PCa患者的信息进行回顾性检索,并被随机分配到训练集(n=58405)和验证集(n=24858)。采用R Studio软件对所有变量进行单因素COX回归分析,并将P<0.05的变量纳入多因素COX回归分析中,使用R Studio软件将多因素COX回归分析中各项独立预后危险因素构建成Nomogram模型,采用C指数(C-index)和绘制Nomogram校准曲线来验证模型的准确性和判别能力。结果成功建立了基于年龄、种族、原发部位及肿瘤分期(TNM)、手术方式、是否放疗、婚姻状态等预后因素的Nomogram,C-index为0.735(95%CI 0.733~0.737),校准曲线与理想曲线一致性较高,经内部验证后具有较高的准确性与适用性。结论本研究通过SEER数据库确定了前列腺癌患者预后的独立危险因素,并且建立了个体化预测PCa患者生存预后的Nomogram。

雄激素受体对从前列腺癌LNCaP细胞分选出的CK5+CK8+细胞的作用及其调控机制

目的探讨雄激素受体(AR)对从前列腺癌LNCaP细胞中分选出的CK5+CK8+细胞的作用及其调控机制。方法采用流式细胞术从LNCaP细胞中分选CK5+CK8+细胞,使用慢病毒载体携带AR基因转入CK5+CK8+细胞。实验分为转入AR的AR CK5+CK8+组和转入空载体的V CK5+CK8+组,在1、10 nmol/L二氢睾酮(DHT)培养条件下,采用蛋白质印迹法检测AR、p-AKT和bcl-2蛋白的表达,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、细胞迁移实验和琼脂糖凝胶克隆形成实验检测AR对CK5+CK8+细胞生物学特性的影响。采用MTT法检测应用AKT信号通路活化抑制物LY 294002(LY)、γ-生育三烯酚(γ-TT)和(或)诱导AR表达的5-氮胞嘧啶(5-AZA)对CK5+CK8+细胞增殖的影响。结果AR基因转入CK5+CK8+细胞后,AR表达增强,p-AKT和bcl-2蛋白表达水平降低。在1、10 nmol/L DHT作用2、4、6 d后,AR CK5+CK8+组细胞较V CK5+CK8+组细胞增殖受抑制程度高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。DHT 1、10 nmol/L作用3 d后,AR CK5+CK8+组细胞较V CK5+CK8+组细胞迁移能力下降[迁移细胞数:(54±9)个比(113±21)个,(13±3)个比(34±6)个],差异均有统计学意义(t=4.450,P<0.01;t=5.157,P<0.01)。DHT 1、10 nmol/L作用3周后,AR CK5+CK8+组细胞较V CK5+CK8+组细胞成瘤能力弱[克隆数:(39±7)个比(105±16)个,(41±6)个比(86±6)个],差异有统计学意义(t=6.631,P<0.01;t=8.662,P<0.01)。5 nmol/L LY+10 nmol/L 5-AZA、5 nmol/L LY+5 nmol/Lγ-TT、10 nmol/L 5-AZA+5 nmol/Lγ-TT、2.5 nmol/L LY+5 nmol/L 5-AZA+2.5 nmol/Lγ-TT联合1 nmol/L DHT或10 nmol/L DHT作用2、4、6 d均能抑制CK5+CK8+细胞增殖(均P<0.05)。结论AR可以抑制从LNCaP中分选出的CK5+CK8+细胞增殖,导致细胞迁移和成瘤能力下降;其可能通过抑制AKT-bcl-2信号通路的活化而发挥作用。

建立针对PSA灰区前列腺癌的临床预测模型:一项针对SEER数据库的研究

目的探讨前列腺特异抗原(PSA)灰区前列腺癌(PCa)患者预后的独立预测因素,并为其建立个体化预测的列线图模型。方法回顾性检索2010—2016年PCa患者的临床资料,随机将其分为训练集(2/3)和验证集(1/3)。在多因素Cox回归分析的基础上,建立了独立危险因素的列线图。分别采用C指数(C-index)、ROC曲线及校准曲线来验证列线图预测准确性。结果共收集PCa患者82537例,其中训练集患者57777例,验证集24760例。多因素Cox分析显示,年龄、种族、婚姻状况、手术方式、是否放疗、是否化疗、病理分级及T分期是总生存期(OS)的独立危险因素。训练集OS的C指数(C-index)为0.741(95%CI:0.731~0.751),验证集为0.743(95%CI:0.725~0.761)。表明预测OS的列线图在训练集和验证集上都显示出较好的识别力。此外,ROC曲线及校准曲线验证了预测的生存概率与实际生存概率之间良好的一致性,并且其区分度优于传统病理分级系统。结论本研究基于SEER数据库建立了国内外首个可以个体化预测PSA灰区PCa患者预后的列线图模型;且经内部及外部验证,其预测性能良好。列线图模型的建立将有助于辅助临床医生更加精准地预测PCa患者预后结局,为PCa患者个体化管理提供依据。

超选择性前列腺动脉栓塞术治疗超大体积前列腺增生的疗效分析

目的探讨超选择性前列腺动脉栓塞术(PAE)治疗超大体积(≥120 ml)前列腺增生的安全性及临床疗效。方法回顾性分析2018年8月至2019年12月于山西医科大学第一医院采用超选择性前列腺动脉栓塞术治疗的18例超大体积前列腺增生患者的临床资料,比较术前与术后1、3、6个月患者的前列腺体积(PV)、前列腺症状评分(IPSS)、生活质量评分(QOL)、最大尿流率(Q_(max))及残余尿量(RUV)等各项指标的差异并观察手术的并发症。结果18例前列腺增生患者行PAE的手术时间为95~190 min,中位手术时间130 min。术后4例出现轻微的耻骨区疼痛和尿道烧灼感,2例出现一过性血尿,3例患者出现发热症状,12例患者于术后第3天成功拔除尿管,拔除尿管后均可自行排尿,其余6例患者拔除尿管时间为术后10~21 d,所有患者术后均未出现严重的并发症。术后1、3、6个月随访时患者的PV、IPSS、QOL、RUV较术前明显降低,Q_(max)较术前明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PAE治疗超大体积前列腺增生安全、有效,在临床上PAE可作为一种治疗超大体积前列腺增生的手术方式。

p21和REST基因与肥大细胞诱导前列腺癌细胞神经内分泌分化的相关性研究

目的初步探讨p21和元件-1沉默转录因子(REST)基因在肥大细胞诱导前列腺癌细胞出现神经内分泌分化过程中的表达变化及两者的相关性。方法利用孔径为0.4μm的TnmSWell小室将人前列腺癌细胞(PC-3)与肥大细胞(P815)进行共培养,倒置显微镜观察PC-3细胞的形态变化;CCK-8实验及平板克隆形成实验检测诱导前后PC-3的细胞活性及增殖能力变化;实时荧光定ft PCK法(KT-qPCK)检测诱导前后PC-3细胞中神经内分泌标志物[突触素(SYP)、嗜铬蛋白A(CHGA)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)]、p21、REST的mRNA表达变化:结果与P815细胞共培养后,PC-3细胞形态从梭形变为较长的、带有树突状结构的不规则形,且细胞间隙变大。CCK-8实验结果显示,PC-3+P815组细胞0D值低于PC-3组细胞(P<0.05),但是随着共培养时间的延长,PC-3+P815组细胞0D值先下降后上升。平板克隆形成实验结果显示,P815浓度为10^(4)/孔、共培养4 d的PC-3+P815组细胞克隆形成率低于PC-3组细胞(P<0.05)。RT-qPCR实验结果显示,P815浓度为10^(4)/孔、共培养4 d的PC-3+P815组细胞相对PC-3组细胞来说,NSE、SYP、CHGA表达显著上调(P<0.05),p21表达上调(P<0.05),KEST表达下调(P<0.05)。结论肥大细胞可能诱导前列腺癌细胞出现了神经内分泌分化,并且P21和REST基因与这一过程存在一定的相关性。