BALB/c小鼠胚胎干细胞系的建立及其嵌合体小鼠的获得

目的:建立BALB/c小鼠胚胎干细胞系,并用于制作嵌合体小鼠。方法:从BALB/c小鼠囊胚内分离培养内细胞团块。建系后,进行C_(57)BL/6小鼠受体囊胚腔注射,制作嵌合体小鼠。结果:建立了我国第一株BALB/c小鼠胚胎干细胞系。该细胞系具有典型的ES细胞形态,碱性磷酸酶强阳性,核型正常以及具有分化为三种胚层组织的能力,并已产生5只嵌合体小鼠。结论:建立的BALB/c小鼠胚胎干细胞系具有胚胎干细胞的各种特点,可用于体内外诱导分化研究。在进一步观察生殖系嵌合情况后,决定是否可应用于基因打靶等转基因动物的制作。

三聚氰胺急性毒性及中药三金汤的清除作用

目的观察三聚氰胺急性毒性及中药三金汤对三聚氰胺的清除作用。方法昆明小鼠90只，分为7组灌胃三聚氰胺，2组对照，观察其对小鼠的毒性。昆明小鼠70只分为7组，三金汤预防高、中、低剂量组，三金汤治疗组、三聚氰胺模型组、2组对照，一次性给予三聚氰胺后，观察三金汤对小鼠肾和肺三聚氰胺的清除作用。结果昆明小鼠灌胃三聚氰胺的LD50为9366mg／kg，肾脏未见结晶，肾、肝、肺有炎性细胞浸润。三聚氰胺灌胃后在肾、肺含量分别为327ng／g、177．5ng／g，三金汤预防高剂量组清除三聚氰胺效果最佳，肾、肺三聚氰胺含量分别降低至58ng／g、28．2ng／g。结论本实验条件下，初步认定三聚氰胺属微毒或无毒；中药三金汤对小鼠体内三聚氰胺的清除作用以三金汤预防高剂量组的效果最佳。

子宫直肠陷凹子宫内膜异位症对Wistar大鼠生殖能力影响的研究

目的构建Wistar大鼠子宫直肠陷凹内膜异位症模型,对其病灶病理学形态及受孕率进行统计。方法采用异体移植方法在40只Wistar大鼠的子宫直肠凹陷处移植子宫组织,建立子宫直肠陷凹子宫内膜异位症动物模型,10只行假手术,8周后投放雄鼠,观察雌鼠的产仔率,于第15周取材剥取模型大鼠在位与异位子宫内膜组织,进行组织学观察。结果组织学上异位内膜的细胞形态呈增殖早期到分泌中期改变,和在位内膜呈增殖早期到分泌晚期改变发育不同步;模型组大鼠平均产仔数为6.02只,显著较假手术组8只及对照组为8.5只低(P<0.01)。结论 Wistar大鼠子宫内膜异位症内膜与在位内膜发育不同步,造成大鼠腹腔内环境异常,使受精卵着床变得更加困难,从而降低了大鼠的生殖能力。

免疫导向药物B_（159）－Dex－EPI与B_（159）－Dex－ADR抗肿瘤活性研究

作者应用氧化葡聚糖Ｔ_（１０）作为交联剂，将抗Ｂ淋巴细胞白血病单抗Ｂ_（１５９）分别与抗癌药物表阿霉素（ＥＰＩ）和阿霉素（ＡＤＲ）连接，制成免疫导向药物Ｂ_（１５９）－Ｄｅｘ－ＥＰＩ和Ｂ_（１５９）－Ｄｅｘ－ＡＤＲ，Ｂ_（１５９）与ＥＰＩ或ＡＤＲ的克分子比均为１：１２～１４。经活细胞免疫荧光法和细胞ＥＬＩＳＡ法测定，免疫导向药物保持了抗体活性。ＭＴＴ试验证实，两种免疫导向药物均具有明显的选择性杀伤作用，对非靶细胞毒性小；两种免疫导向药物对靶细胞的杀伤作用明显强于游离药物和正常鼠抗体结合物；Ｂ_（１５９）－Ｄｅｘ－ＥＰＩ的靶细胞毒性作用强于Ｂ_（１５９）－Ｄｅｘ－ＡＤＲ。

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应研究

目的 研究单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV1 TK)基因转染并联合抗病毒药更昔洛韦 (Ganciclovir ,GCV)对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应。方法 采用基因工程技术构建带HSV1-TK基因的逆转录病毒重组体pLX SN TK ,采用脂质体介导入PA317包装细胞 ,建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株PA317 TK ;用该细胞上清液转导人胶质母细胞瘤细胞 ,用不同浓度GCV作用人胶质母细胞瘤细胞SW0 38 C2 TK和野生型SW0 38 C2 ,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测 72h后细胞存活率 ,并求出半杀伤浓度。结果 重组逆转录病毒载体pLXSN TK能有效地将TK基因导入SW0 38-C2细胞内 ,并使其获得对GCV的敏感性 ;体外细胞毒实验 :在 2 0 μmol LGCV存在的情况下 ,野生型细胞无明显改变 ,而实验组细胞明显死亡 ,半杀伤浓度IC50 为 0 8μmol L ,与SW0 38 C2相比 ,对GCV的敏感性提高了 6 0 0倍 ,旁杀效果也较明显。结论 SW0 38 C2转染TK基因后 ,能有效地被GCV杀灭。

人舌背表面的扫描电镜研究

用扫描电镜观察清除了细胞外物质后的人舌表面细微结构:丝状乳头遍布舌背,略呈前外-后中方向排列,轻度向后倾斜。菌状乳头在丝状乳头之间,顶部呈火山口状。叶状乳头在舌后部侧缘。轮廓乳头顶部也呈火山口状,外周有1～2条深沟环绕。表层细胞脱落后乳头表面仍见到细胞之间的连接,乳头表面的微皱折清楚。

局灶性脑缺血后鼠脑组织tPA基因表达及其与细胞凋亡

目的 探讨局灶性脑缺血后组织型纤溶酶原激活物 (t PA)基因的表达及其与细胞凋亡的关系。 方法 用原位杂交和免疫组织化学方法检测 t PA基因在大鼠局灶性脑缺血 (大脑中动脉阻塞 )后的表达 ,用 TUNEL 法检测缺血不同时间的细胞凋亡状况。 结果 脑缺血 6 h缺血中心部位的胶质细胞和梗死灶周边缺血半影区的神经元均观察到 t PA免疫反应性信号 ,在大脑皮层后肢体区、顶皮层区、海马区和齿状回可见凋亡细胞 ,但缺血 18h缺血侧神经元及胶质细胞未见 t PA免疫反应性信号 ,仅齿状回有凋亡细胞。 结论 t PA蛋白在脑缺血 6 h缺血侧表达增高 ,局灶性脑缺血后神经元死亡有细胞凋亡的参与 ,该凋亡可能与 t PA基因表达和缺血时间有一定关联。

同种异体移植子宫内膜异位症大鼠模型的建立

目的建立Wistar大鼠同种异体子宫内膜异位症模型。方法采用外科诱导法对24只Wistar雌性大鼠行异体子宫组织移植手术,30只行自体子宫组织移植手术。结果 Wistar大鼠造模12周后,异体移植成模率83.3%,与自体移植成模率76.7%比较差异有统计学意义(P<0.05);异体、自体模型异位内膜上皮细胞功能活跃,有类似正位子宫内膜的周期变化和生理特征;且造模后大鼠体液免疫反应敏感性与假手术对照组比较,C3、C4、IgG升高,IgM降低,差异有统计学意义,IgA没有明显变化;异体移植模型IgG比自体移植模型高,差异有统计学意义。结论应用Wistar大鼠进行同种异体移植手术可以成功的建立子宫内膜异位症模型。

大鼠深部浸润型子宫内膜异位症模型的建立和比较

目的建立SD、Wstar大鼠深部浸润型子宫内膜异位症模型,并进行比较研究。方法采用外科诱导法对10只SD、30只Wistar雌性大鼠行自体子宫组织子宫直肠凹移植手术。结果 SD大鼠成模率80.0%,Wstar大鼠成模率76.7%;SD大鼠手术死亡率(10.0%)比Wstar大鼠死亡率(23.3%)低(P<0.05);Wistar大鼠在成活的动物中可达到100%的成模,且形成的移植物体积较SD大鼠大(P<0.05)。结论应用SD和Wistar大鼠采用子宫直肠凹种植子宫内膜均可成功地建立深部浸润内异症模型。

不同剂量化学纯三聚氰胺诱发SD大鼠尿结石的比较

目的:探讨建立不合并肾损害的尿结石模型。方法:100只雄性SD大鼠,随机分5组,空白对照组、化学纯三聚氰胺0.4～0.7 g.kg-1.d-1组,连续给药20,30 d,观察比较结石形成率、肾功能损害情况。结果:0.4,0.5 g.kg-1.d-1化学纯三聚氰胺给药20,30 d,膀胱结石率最高,20 d分别为60%,50%,30 d分别为50%,60%,两组及与0.6,0.7 g.kg-1.d-1组、空白对照组比较有显著性差异(P<0.05);膀胱结石形成率与剂量、时间不成线形关系;各组比较仅0.4 g.kg-1.d-1组肾和膀胱指数、肌酐、尿素氮、尿酸与空白对照组比较,无显著性差异。结论:化学纯三聚氰胺0.4 g.kg-1.d-1给药20 d对肾脏几乎不造成损害,SD大鼠膀胱结石率达60%,可建立不合并肾损害的尿结石模型。

舌乳头血管铸型立体显微镜研究

作者利用甲基丙稀酸甲酯,成功地制作了人舌微血管铸型标本,在立位显微镜下详细观察了舌背四种乳头的微血管构筑。

Wistar大鼠内异症窗口期对α_vβ_3及VEGF基因表达的影响

目的研究子宫内膜异位症对Wistar大鼠胚胎种植期子宫内膜整合素α_vβ_3、血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达及雌、孕激素水平与不孕的关系。方法采用同种异体移植方法建立Wistar大鼠子宫直肠陷凹、腹壁外子宫内膜异位症动物模型36只,空白对照20只,建模成功后投放雄鼠,受孕4.5 d后麻醉采血,取模型大鼠在位子宫内膜组织,进行透射电镜观察,ELISA检测血清中雌激素、孕激素的含量,同时运用荧光定量PCR技术,定量分析整合素α_vβ_3以及VEGF基因在其子宫内膜中的表达。结果早孕各组大鼠子宫内膜α_vβ_3、VEGF基因的表达水平均高于模型组和空白未孕组;早孕能提高模型组α_vβ_3、VEGF基因的表达但均低于空白受孕组(P<0.05),且子宫直肠凹陷子宫内膜异位症模型大鼠的表达水平较腹壁外子宫内膜异位症模型大鼠低(P<0.05);子宫直肠凹陷子宫内膜异位症模型大鼠血清雌激素水平低于空白受孕组(P<0.05),但孕激素较空白受孕组高(P<0.05)。结论不同程度的子宫内膜异位症均能降低Wistar大鼠窗口期整合素α_vβ_3、VEGF基因的表达,使其达不到正常胚胎种植期的水平是导致不孕的重要原因。