香港中文大学化学病理学系的学科建设与管理

香港中文大学化学病理系与重医医学检验系是兄弟协作单位 ,同时创建于 1982年 ,过去数年紧密合作 ,协作举办了多次研讨班 ,培养研究生和检验医师 ,编著学术刊物 ,教授互访 ,相互借鉴 ,共同发展。现特邀系主任林伟基教授对该系的建设与发展作简介 。

应用基因芯片技术观察云芝丹参对鼻咽癌患者的免疫调节作用

目的为进一步研究云芝丹参的免疫调节功效,利用基因芯片技术筛选鼻咽癌患者服用云芝丹参后免疫功能指标的变化。方法收集鼻咽癌患者27例,设立中药组和安慰剂组,采用基因芯片技术检测鼻咽癌患者服用中药云芝丹参后免疫功能指标的变化,并与安慰剂组比较分析。结果用基因芯片技术检测中药组鼻咽癌患者服用云芝丹参胶囊后第7天,TNFR2基因表达水平较安慰剂组明显下调(P<0.05)。结论基因芯片技术是筛选肿瘤患者免疫功能指标变化的一种快捷、方便、灵敏的方法。

p38 MAPK在嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞释放MCP-1中的作用

目的:探讨支气管上皮细胞与嗜酸性粒细胞联合培养过程中炎性介质的释放及其机制.方法:应用流式细胞微珠实验(CBA)方法定量比较嗜酸性粒细胞、支气管上皮细胞及其联合培养上清液中单核细胞趋化蛋白(MCP)-1的释放以及p38MAPK抑制剂SB203580干预的影响;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析联合培养过程中嗜酸性粒细胞对支气管上皮细胞MCP-1基因表达的活化及SB203580对MCP-1表达的抑制作用.结果:经嗜酸性粒细胞活化后,支气管上皮细胞中MCP-1基因表达明显上调;嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞联合培养上清液中MCP-1蛋白质释放显著增加[(1266±127)ng/Lvs(134±25)ng/L,P<0.001];多聚甲醛固定后的嗜酸性粒细胞不能释放MCP-1,但其在与支气管上皮细胞联合培养过程中仍可增加支气管上皮细胞释放MCP-1[(773±48)ng/Lvs(107±15)ng/L,P<0.001];p38MAPK抑制剂SB203580可有效抑制嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞表达MCP-1基因,显著降低正常嗜酸性粒细胞和多聚甲醛固定嗜酸性粒细胞与支气管上皮细胞联合培养过程中MCP-1的释放[(1335±115)ng/Lvs(481±42)ng/L和(868±89)ng/Lvs(239±26)ng/L,P<0.001].结论:嗜酸性粒细胞可通过p38MAPK信号传导通路活化支气管上皮细胞表达MCP-1,调控过敏性气道炎症反应.

应用四色荧光标记流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的变化

目的探讨四色荧光标记流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测鼻咽癌患者服用云芝丹参胶囊后外周血淋巴细胞亚群:辅助性T淋巴细胞(CD4+),抑制性和细胞毒T淋巴细胞(CD8+),B淋巴细胞(CD19+),NK(CD16+CD56+)细胞的绝对数和百分率等的变化。方法收集鼻咽癌患者27例,设立中药组和安慰剂对照组,采用四色荧光标记流式细胞术对服用云芝丹参胶囊后的鼻咽癌患者外周抗凝全血的淋巴细胞亚群CD4+细胞、CD8+细胞、B细胞、NK细胞进行绝对计数和相对计数,并对两组结果进行比较分析。结果四色荧光标记流式细胞术结果显示:接受放射治疗的鼻咽癌患者在服用云芝丹参胶囊16周后,外周血T淋巴细胞的绝对数和百分率,以及Ts、Th细胞绝对数的下降均明显低于安慰剂组(P<0.05);中药组和安慰剂组NK细胞百分率的变化均显著增高(P<0.05);但两组NK细胞绝对值的变化不存在明显差异(P>0.05)。结论云芝丹参能明显减轻放射治疗对鼻咽癌患者的淋巴毒性。

TNF-α诱导支气管上皮细胞表达ICAM-1

目的:探讨支气管上皮细胞活化对ICAM-1基因和细胞表面ICAM-1蛋白质表达的影响。方法:用10ng/m l TNF-α作用于正常培养的支气管上皮细胞(BEAS-2B)12h,通过RT-PCR分析ICAM-1在BEAS-2B细胞中的基因表达和用流式细胞仪分析ICAM-1在BEAS-2B细胞表面蛋白质量。结果:TNF-α与BEAS-2B细胞共同培养12h,可上调BEAS-2B细胞ICAM-1基因的表达和增加BEAS-2B细胞表面的ICAM-1蛋白质量。结论:TNF-α可诱导BEAS-2B细胞ICAM-1基因和蛋白质表达。

云芝丹参的体外促增殖试验及其临床应用研究

目的通过云芝丹参的体外促增殖试验及对乳腺癌患者的临床应用研究，观察其对机体免疫调节活性的影响。方法采用MTT比色法、流式细胞分析法和ELISA法，分别检测云芝丹参对PHA刺激后的健康成人外周血单个核细胞增殖作用及服用云芝丹参胶囊后的乳腺癌患者外周血淋巴细胞亚群和血浆SIL-2R的浓度。结果体外实验，中低浓度的云芝丹参药液（6．25～200μg／mL）对健康成人PBMC有促增殖作用，高浓度（400μg/mL）时则产生抑制作用；而临床试验中，乳腺癌患者血浆sIL-2R浓度、CD8^＋细胞百分率均显著降低，而B淋巴细胞数量及百分率、CD4^＋／CD8^＋比值和Th细胞的百分率都明显升高。结论云芝丹参胶囊对正常人及乳腺癌患者都具有免疫增强作用。

支气管上皮细胞和嗜酸性粒细胞联合培养对IL-8释放的影响

目的:探讨支气管上皮细胞和嗜酸性粒细胞联合培养对细胞趋化因子白细胞介素(IL)-8分泌的影响。方法:人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞与人外周血嗜酸性粒细胞联合培养;应用流式细胞微珠实验(CBA)方法定量细胞培养上清液中细胞趋化因子IL-8的浓度;用RT-PCR方法分析经与嗜酸性粒细胞联合培养后BEAS-2B细胞中IL-8的基因表达。结果:与嗜酸性粒细胞联合培养后,BEAS-2B细胞中IL-8基因表达显著上调,细胞联合培养上清液中IL-8释放显著增加。结论:嗜酸性粒细胞与支气上皮细胞联合培养可活化支气管上皮细胞中IL-8基因表达和促进其蛋白质分泌。

p38 MAPK对嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞共培养时细胞因子释放的调控作用

目的了解嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞相互作用诱导细胞因子释放的p38MAPK信号转导通路。方法用CD16磁珠抗体分离外周血中嗜酸性粒细胞,以嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞(BEAS-2B)接触共培养为实验模型,观察SB203580对细胞培养上清液中细胞因子浓度的影响。细胞因子浓度采用ELISA和流式细胞微珠方法测定。结果SB203580能够有效抑制BEAS-2B细胞释放IL-6、IL-8(P<0.05)和嗜酸性粒细胞释放IL-8(P<0.01)。SB203580对嗜酸性粒细胞与BEAS-2B细胞接触共培养诱导的IL-6、IL-8和IP-10释放具有显著抑制作用(P<0.001)。结论嗜酸性粒细胞、BEAS-2B细胞单独或相互作用时均通过p38MAPK信号转导通路释放细胞因子。

应用流式细胞小球微阵列术法检测趋化因子的变化

目的探讨流式细胞小球微阵列术(cytometricBeadArray,CBA)检测类风湿性关节炎患者服用灵芝三妙散胶囊后趋化因子白细胞介素8(IL8),调节活化的正常T细胞表达和分泌的因子(RANTES),γ干扰素诱导的单核因子(MIG),单核细胞趋化蛋白1(MCP1),以及γ干扰素诱导蛋白10(IP10)的变化。方法收集类风湿关节炎患者65例,设立安慰剂组和中药组,采用CBA法检测类风湿性关节炎患者服用灵芝三妙散胶囊后的血浆和全血在体外用脂多糖(LPS)和植物凝血素(PHA)刺激后趋化因子IL8、RANTES、MIG、MCP1、以及IP10的含量,然后比较分析。结果用CBA法检测类风湿性关节炎患者在服用灵芝三妙散胶囊后,体外试验中药组的IP10变化的百分率比安慰剂组明显升高(P<0.05)。结论CBA法检测血浆趋化因子是一种简便、可靠、灵敏度高、精确的新方法。

屋尘螨1类变应原促进外周血嗜酸性粒细胞释放细胞因子的探讨

目的探讨屋尘螨1类变应原(DerP1)对嗜酸性粒细胞(E)释放炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α的影响。方法用CD16抗体磁珠法从新鲜人外周血分离E;5×105/mlE与5μg/mlDerP1共培养12h;用流式细胞小球微阵列(cytometricbeadarray,CBA)法定量细胞培养上清液中细胞因子。结果外周血E单独培养过程中仅有极少量IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α释放,但与5μg/mlDerP1共育时,培养上清液中上述5种细胞因子浓度显著增加(P均<0.001),IL-10增加约5倍,其他4种细胞因子均增加约100倍。结论DerP1对E释放炎性细胞因子具有很强的促进作用。

细胞因子检测的方法及其临床应用

本文简介了几种与白细胞介素密切相关的临床疾病，概述了目前常用的细胞因子检测方法，对细胞因子的应用作了首要的评价。

嗜酸性粒细胞对支气管上皮细胞中p38 MAPK信号转导通路的活化作用观察

目的探讨嗜酸性粒细胞在与支气管上皮细胞接触共培养过程中对后者炎性介质释放的影响。方法用CD16抗体磁珠法分离嗜酸性粒细胞,免疫印迹(Western blotting)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管上皮细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、激活转录因子(ATF)-2蛋白含量,微珠免疫沉淀结合免疫印迹法检测p38MAPK活性。结果经与嗜酸性粒细胞共同培养活化后,支气管上皮细胞中磷酸化p38MAPK蛋白含量及其活性均显著上升,p38MAPK信号转导通路链中下级底物蛋白质ATF-2(细胞内调控某些基因表达的转录因子)量也显著上升;多聚甲醛固定的嗜酸性粒细胞同样可以活化支气管上皮细胞,增加其细胞内p38MAPK蛋白质磷酸化。p38MAPK酶选择性抑制剂SB203580可有效抑制p38MAPK诱导其底物ATF-2磷酸化。结论嗜酸性粒细胞与支气管上皮细胞接触共培养过程中对炎性介质表达和释放的调控作用可能是通过活化支气管上皮细胞内p38MAPK信号传导通路未实现的。

支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞的不同培养方式对IL-6释放的影响

目的:以支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞共培养为实验模型,探讨不同培养方式对IL-6释放的影响.方法:将支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞分别单独培养、接触共同培养、分隔共同培养(用分隔膜将两种细胞分隔在上、下两个池中不接触培养,两池中的培养液可以自由通过分隔膜孔)和在Ma-trigel中共同培养.两种细胞在不同培养条件下释放的IL-6应用酶联免疫吸附试验方法定量.结果:支气管上皮细皮与嗜酸粒细胞在同一培养孔中分隔共同培养时其IL-6释放量远高于两种细胞分别在两个培养孔中独自培养后上清液中IL-6之和[(388±40)ng/Lvs(107±10)ng/L,P<0.001].而两种细胞在同一培养孔中(没有隔膜分隔)接触共同培养,其IL-6释放量又远高于其分隔培养[(1270±131)ng/Lvs(388±40)ng/L,P<0.001];将上述两种细胞在Matrigel中共培养,其IL-6释放又显著高于其在非Matrigel中的培养[(2076±165)ng/Lvs(1270±131)ng/L,P<0.01].结论:支气管上皮细胞与嗜酸粒细胞共同培养过程中可受到相互接触和其在培养过程中所释放的某些物质的活化,从而增加多功能细胞因子IL-6的释放.

MG-132活化人支气管上皮细胞表达IL-6

目的探讨核因子(NF-κB)抑制剂MG-132对支气管上皮细胞释放细胞因子白细胞介素(IL)-6的影响。方法人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞与MG-132(10μmol·L-1)共同培养12h,细胞核中NF-κB活性和细胞培养上清液中IL-6浓度用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法定量,BEAS-2B细胞总IL-6mRNA表达,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析。结果BEAS-2B细胞与MG-132共同培养过程中,BEAS-2B细胞IL-6mRNA上调,细胞培养上清液中IL-6释放量显著增加,而且IL-6增加量与细胞培养液中MG-132浓度呈正相关,但与NF-κB活性无关。结论MG-132可诱导BEAS-2B细胞释放IL-6,但不是通过NF-κB活化途径。

嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞释放IL-6

目的:探讨嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞后对其细胞因子白细胞介素(IL)-6分泌的影响。方法:正常和1%多聚甲醛固定的嗜酸性粒细胞分别与支气管上皮细胞(BEAS-2B)细胞联合培养,应用流式细胞微珠实验(CBA)方法定量细胞培养上清液中细胞因子的浓度,用RT-PCR方法分析经嗜酸性粒细胞活化后支气管上皮细胞中IL-6的基因表达。结果:经嗜酸性粒细胞活化后,支气管上皮细皮中IL-6基因表达显著上调,细胞培养上清液中IL-6蛋白质浓度升高,多聚甲醛固定后的嗜酸性粒细胞能够刺激支气管上皮细胞中IL-6基因表达和蛋白质释放。结论:嗜酸性粒细胞可活化支气管上皮细胞中IL-6基因表达和促进其蛋白质分泌。

支气管哮喘患者白细胞介素-4近侧启动子区克隆和序列分析

目的 探讨哮喘患者白细胞介素 4(IL 4)过度表达的可能调控机制。方法 选取 4例有明显家族史的过敏性哮喘患儿和 1例正常儿童 ,采用聚合酶链反应 (PCR)扩增IL 4近侧启动子片段 ,PCR产物经XbaI、HindⅢ限制性内切酶进行双酶切后 ,回收酶切片段 ,再与经过相同双酶切的载体Jx2相连接 ,制备重组质粒。然后经转化、筛选、酶切鉴定得到重组质粒pIL 4 Jx2 ,最后采用双脱氧终止法对重组质粒进行序列测定。结果 ①正常儿童IL 4近侧启动子序列与基因库序列相同。② 1例患儿 - 2 2 9位C被A所替代 ,该变异恰好位于正性调节元件 I之内。结论 过敏性哮喘患者IL 4近侧启动子区DNA片段被成功克隆 ,并发现 1例患者IL 4调控元件内一未曾报道过的变异位点 ,这有助于对哮喘者IL 4基因异常表达调控机制的研究。

糖缺失性转铁蛋白一一种酒精性肝损害的标志物

本文报道了一种酒精性肝损害的标志物——系糖块失性转铁蛋白（ＣＤＴ），一种在肝细胞中合成的转铁蛋白的分子亚型，本文对ＣＤＴ产生的病理、生理作了初步探讨，对ＣＤＴ的检测方法作了较详细的评价，对检测的特异性和敏感性作了探讨和应用的展望。

脂多糖诱导外周血嗜酸粒细胞释放炎性细胞因子的探讨

目的:探讨脂多糖(LPS)对嗜酸粒细胞释放炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:嗜酸粒细胞用CD16抗体磁珠方法从人新鲜外周血中分离;分别进行5×105/m1嗜酸粒细胞的单独培养和与LPS(1 μg/m1)共培养18h;应用流式细胞小球微阵列(Cytometric bead array,CBA)方法定量测定细胞培养上清液中细胞因子含量。结果:从外周血中新分离的嗜酸粒细胞单独培养过程中没有或仅有极少量上述炎性细胞因子释放,但新分离的嗜酸性粒细胞与LPS共培养18 h后,其培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α大量增加(P均<0.001),而IL-2、IL-4、IL-12和IFN-γ的含量无明显变化。结论:LPS对嗜酸粒细胞释放炎性细胞因子具有很强的选择性诱导作用。

抗毒补肺汤预防SARS的临床观察

目的观察抗毒补肺汤在急性重症呼吸综合征 (SARS)暴发期间对香港医务工作者的预防保护作用。方法在香港SARS肆虐期间 ,总共有 2 6 0 1名医务工作者接受了本研究中心派发的抗毒补肺汤 ,确信其中有 10 6 3名按要求连续 2周服用了该方药并寄回有效问卷 ,这部分人组成了中药组 ,另有未服本中药的 15 374名组成了对照组。通过这份问卷 ,可以了解受试者在研究开始的前 1天及第 14天、第 2 8天 ,其有关生活质量、感冒样症状、温病证候的变化。中药组有 37名接受了血清免疫学检验。结果中药组中无感染SARS者 ,而对照组中有 6 4名 (0 4 % )感染了SARS ,而且中药组自身前后对照 ,服药后在感冒样症状、温病证候、生活质量方面均得到显著改善。中药组 37份血清免疫学结果显示 ,服用中药后 ,机体免疫功能得到了改善与提高。结论抗毒补肺汤可能通过改善临床症状。