垂直转头的特点及应用

本文探讨了垂直转头中离心管的半径与体积关系,分离效率及在生物医学方面的应用。

用垂直转头密度梯度超速离心法快速分级分离多聚核糖体

目的 :测定多聚核糖体含量及多聚程度的分布。方法 :采用PRV - 5 0T垂直转头 40PA离心管 ,梯度为 15 % - 5 5 %连续蔗糖梯度。离心条件 :温度 10℃ ,转速 40 0 0 0r/min ,时间 9min。DGF -U型梯度仪液面跟踪法收集 ,同时与TH6 41摆平转头进行对比。结果 :采用垂直转头具有分离效果好 ,重现性强 ,操作简单 ,特别是离心管体积大 ,离心过程中产生的重定向作用使梯度容量大大增加 ,分离路径大大缩短 ,时间相应减少。结论 :为快速和大量制备、分析多种多聚核糖体提供一种良好方法。

用制备超速离心机角转子沉降平衡法研究生物大分子相互作用

分析超速离心技术（简称AUC）广泛应用于生物化学、生物物理学和药学研究中。本文报导在制备超速离心机中用角转子通过沉降平衡法测定大分子分子量及其大分子相互作用的一种非经验方法。获得的直接数据是大分子沿轴向的浓度分布，据此可以计算出大分子的分子量和相互作用系统的平衡常数。已经表明用该方法表征分子量在6000到600000Dalton范围内的大分子其浓度下限要比在分析超速离心机中低1000倍，也可在极高浓度下研究大分子特征。在各种速度下获得的涉及大分子相互作用的数据对研究配体结合和蛋白质亚单位结构有极高价值。文中也简述了用该技术研究去垢剂溶解的膜蛋白特性。

在地方病研究中用等密度法分离DNA实验条件的优化选择

地方病的病因、发病机理研究中,分子生物学已经成为研究的重要手段。分离得到纯净的DNA是其中的关键步骤之一。通过研究认为在相对短的时间内要达到理想的分离效果,应该对以下实验条件进行优化选择并严格控制:包括实验中影响分离本领的转头、梯度介质选择;为获得满意分离度应严格选择梯度的密度范围、梯度形状以及梯度的斜率;为了缩短分离时间,可采用重定向梯度、二次变速及Gmax等方法。并对形成DNA区带所需要的时间进行了讨论。

心肌细胞分离与培养的教学内容与方法探讨

培养心肌细胞是生物医学研究领域一项新实验技术,在心血管病理生理学研究中起着相当重要的作用。本学科自1998年为研究生开设《心肌细胞分离与培养》选修课,目的是使学生掌握心肌细胞分离培养的基本原理和方法并应用于科学研究中。讲义编写和讲授内容以原代细胞培养为线索,以大鼠心肌细胞分离和培养为实例,比较详尽地讲解和演示了实验的全过程。主要内容:(1)分离:①未成熟心肌细胞:准备→取材→酶解→离心→制备细胞悬液;②成熟心肌细胞:准备Langendroff装置→摘取心脏和插管→灌流→酶解→离心复钙。(2)培养:包括贴壁培养和悬浮培养。重点讲授纯化心肌细胞、酶选择、消化程度把握、各部位心肌细胞培养、2种培养方法差异与表达的特性、生长状态等。(3)建立相关疾病模型:如心肌肥厚、心衰等。(4)应用:包括心肌细胞超微结构、细胞内外离子转运通道、细胞凋亡、受体、蛋白质组学、药物学研究等。该方法稍加改良亦可用于鸡、小鼠、兔、狗等动物及人类胎儿和成人手术获得的心肌碎片的心肌细胞培养。通过多年探索,已基本完善了教学内容,提高了教学质量和教学水平。

分析超速离心机的多波长检测系统及其应用

分析超迷离心技术应用离心力场在对样品分级分离的同时借助光学系统检测离心池内大分子分布及相互作用。本文阐述用于分析超迷离心机的新型多波长检测器（MWL-AUC），它以现代CCD uv-vis分光仪为基础，几乎可用所有波长的光线同时检测同一半径处沉降样品的分布，通过沉降平衡和沉降速度试验能够获得更多信息源并应用于生物科学和工业多聚物的研究。

褪黑素对心理应激大鼠胃黏膜SOD、MDA和胃黏膜损伤的影响

目的 探讨褪黑素 (MT)对心理应激性胃黏膜损伤的保护作用及其机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为对照组 (C组 )、规则光组 (R组 )、不规则光组 (I组 )和褪黑素组 (M组 )。检测大鼠胃黏膜损伤指数 (UI) ,胃黏膜超氧化物歧化酶 (SOD)活性、丙二醛 (MDA)含量及血清皮质醇浓度。结果 C组大鼠胃黏膜光整完好 ,肉眼未见糜烂及溃疡。R和I组UI均高于C组 (P <0 .0 5) ,M组UI低于I组 (P <0 .0 5)。R、I组胃黏膜SOD活性降低 ,I组降低更明显 (P <0 .0 5) ;R、I组胃黏膜MDA含量升高 ,I组升高明显 (P <0 .0 5) ,但M组SOD升高 ,MDA含量下降 (P <0 .0 5)。R、I组大鼠血清皮质醇升高 ,I组明显升高 (P <0 .0 5) ;而M组血清皮质醇较I组降低 (P <0 .0 5)。

龙须菜藻胆蛋白抗突变与抗肿瘤作用的研究

初步观察了龙须菜藻红蛋白(PE)粗提物对环磷酰胺(CP)诱发小鼠染色体突变的抑制作用和对荷S180实体瘤小鼠的抑瘤作用。试验结果表明,藻红蛋白粗提物可使环磷酰胺诱发的小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核率明显降低,具有显著的抗突变作用,且呈现一定的剂量效应关系;其对小鼠S180实体瘤的抑瘤率为44%。

淫羊霍对环磷酰胺致大鼠附睾结构和功能改变的拮抗作用

目的:探讨淫羊藿对化疗药物引起雄性大鼠附睾损伤的逆转作用。方法:60d的雄性SD大鼠50只,随机分为对照组、化疗1组、化疗2组和中药1组、中药2组,每组10只,化疗组接受腹腔内注射环磷酰胺30mg/(kg.d),中药组除环磷酰胺外,同时给予淫羊霍配制液灌胃30mg/(100g.d)。化疗1组、中药1组和化疗2组、中药2组分别于用药10、20d后观察附睾上皮细胞超微结构的改变。结果:①电镜显示化疗1组、2组大鼠附睾上皮细胞主要损伤为细胞水肿,线粒体肿胀,部分空泡化,细胞核呈瘤细胞样改变,部分核染色质凝集边移,趋于凋亡。中药1组上皮细胞超微结构与对照组基本相似,中药2组上皮细胞仅有轻度损伤,除线粒体嵴结构不清,胞浆内有少量空泡,部分核膜内陷或外突外,其余结构类同对照组。②化疗2组与对照组比较精子数量[(10.63±3.82)×106/mlvs(15.59±4.01)×106/ml,P<0.01]、精子存活率[(60.03±7.54)%vs(76.71±10.11)%,P<0.01]和唾液酸含量[(13.62±7.81)mg/gprotvs(19.38±9.34)mg/gprot,P<0.05]显著降低;淫羊藿能明显升高精子存活率,化疗2组精子存活率显著低于中药2组[(60.03±7.54)%vs(69.90±12.58)%,P<0.05]。结论:淫羊藿可减轻化疗造成的附睾损伤,对生殖功能具有保护作用。

AngⅡ对成年大鼠心肌成纤维细胞分泌ET-1、NO功能的影响

目的 :探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对成年大鼠心肌成纤维细胞 (MFs)分泌内皮素 - 1(ET - 1)、一氧化氮 (NO)的影响。方法 :采用酶消化法和差速贴壁分离法获取MFs ,应用放射免疫分析法、硝酸还原酶法分别测定不同条件下培养的第二代心肌MFs培养液中的ET - 1、NO水平。结果 :一定浓度范围内的AngⅡ可按剂量依赖方式促MFs分泌ET - 1,血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)拮抗剂losartan可阻断AngⅡ的上述作用 ;AngⅡ可抑制心肌MFs分泌NO ,加losartan后再加AngⅡ培养发现 ,MFs分泌NO能力不但不降低 ,而且还高于对照组 (P <0 0 1)。结论 :AngⅡ可通过AT1R促成年大鼠心肌MFs分泌ET - 1,主要通过AT1R影响MFs分泌NO ,从而改变ET - 1/NO比值。AngⅡ可能通过影响MFs分泌的生物活性物质网络平衡关系改变 ,发挥其促心肌肥厚及心力衰竭效应。

留学生生理课程教学内容及方法的研究

将医学CAI课件应用于医学基础课的理论教学尤其是留学生的教学中,提高教学效率和质量,是近年来我校教学改革的热点.本文介绍了我校生理教研室在连续7年的留学生理论课教学中,通过不断实践、不断创新、不断改革,总结出了一套行之有效的全英语教学方法.该方法包括:①挑选教师,自编英语教材;②医学CAI课件的应用;③提问式和课堂测验式教学;④学生上讲台;⑤自学;该方法在提高教学质量上已显示出良好效应.

心肌成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ作用中活性氧水平及p22^(phox)的表达

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预心肌成纤维细胞时活性氧的改变及可能的产生途径,为防治心室重塑发展提供思路。方法培养出生2～3d大鼠心肌成纤维细胞,分为正常对照组,AngⅡ(10-7mol/L)组,APO(100μmol/L)组,APO+AngⅡ(APO100μmol/L培养1h后加入终浓度10-7mol/LAngⅡ)组。干预48h后应用荧光显微镜观测活性氧水平;免疫组织化学法检测p22phox蛋白表达。结果AngⅡ组活性氧荧光最强,APO+AngⅡ组明显减弱,对照组和APO组最弱。组化染色结果显示对照组和APO组几乎未见p22phox蛋白阳性表达;AngⅡ组细胞普遍阳性表达,显著高于其他3组;APO+AngⅡ组稍强于对照组和APO组,但无显著性差异。结论AngⅡ可能通过增强p22phox蛋白表达,导致NADPH氧化酶途径产生活性氧增多。

大鼠心房、心室M受体密度的增龄性变化

目的观察成年大鼠心房肌和心室肌M受体密度的增龄性变化.方法运用放射性配基受体结合法测定不同月龄(2～30个月)大鼠心房肌和心室肌M受体与其强阻断剂氚标记二苯羟乙酸奎宁酯(3H-QNB)的最大结合力(Bmax,可转化成密度值RT)及解离常数(Kd)值.结果①随着年龄的增长,SD大鼠心房肌M受体密度逐渐减少:从(259±9)pmol/g 蛋白下降至(174±13)pmol/g蛋白,且24个月以后的老龄鼠心房肌M受体密度减少更快.② M受体在各年龄段大鼠心室肌分布密度基本相当.③Kd值在各个年龄段大鼠心房和心室无明显差异.结论 M受体在大鼠心房的分布密度随着年龄的增长而减少,而在心室的分布密度与年龄的增长没有显著相关性,亲和活性在各个年龄段大鼠心房和心室差异不明显.

血管紧张素Ⅱ受体阻断对心肌成纤维细胞信号转导相关基因表达谱的影响

为了研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinII,AngII)受体在成年大鼠心肌成纤维细胞的信号转导机制,分离及培养成年Sprague-Dawley大鼠心肌成纤维细胞,采用免疫组化染色测定AngⅡ受体的蛋白表达。将细胞随机分为四组进行药物干预48h:AngⅡ组、AngⅡ+losartan组、AngⅡ+PD123319组和AngⅡ+losartan+PD123319组。抽提mRNA制备cDNA探针,与G蛋白耦联受体信号通路发现者基因芯片杂交,筛选表达差异的基因。发现血管紧张素Ⅱ1型(angiotensinIItype1,AT1)受体被losartan阻断后,AngⅡ刺激的心肌成纤维细胞血管紧张素Ⅱ2型(angiotensinIItype2,AT2)受体蛋白高表达;34个基因表达差异在2倍以上,30个下调,4个上调,其最大改变不超过20倍;9条信号通路被活化:cAMP/PKA、Ca2+、PKC、PLC、MAPK、PI-3K、NO-cGMP、Rho、NF-κB通路。当AT2受体被PD123319阻断时,64个基因表达差异在2倍以上,48个下调,16个上调;11条途径基础活化,其中7个基因的改变在30倍以上:Cyp19a1(37倍)、Il1r2(42倍)、Cflar(53倍)、Bcl21(31倍)、Pik3cg(278倍)、Cdkn1a(90倍)、Agt(162倍)。在AT1受体阻断的基础上再阻断AT2受体,46个基因表达差异在2倍以上,36个下调,10个上调;11条信号途径全部活化。其结果与单独阻断AT2受体信号途径基本一致。RT-PCR选取IL-1β和TNF-α进行验证,结果与芯片各组间的变化趋势基本相符。结果表明,在成年大鼠心肌成纤维细胞,AT2受体阻断明显不同于AT1受体阻断,在信号转导通路相关基因表达谱上,两者有显著差异。

肌肉振动对肢体制动引起的神经传导功能改变的影响

目的:观察制动及制动期间施加肌肉振动对肢体神经传导功能的影响。方法:选择骨折后石膏固定的一侧肢体制动患者24例,检测其制动前后胫神经传导速度、M波和H反射的潜伏期。结果:制动2周后,胫神经传导速度无明显改变(P>0.05),M波潜伏期和H反射潜伏期明显延长(P<0.05);制动期间给予肌肉振动,M波潜伏期和H反射潜伏期无明显改变(P>0.05)。结论:制动引起外周神经传导功能减慢,制动期间给予肌肉振动,能够对抗制动引起的外周神经功能的改变。

压力超负荷致心肌细胞增殖细胞核抗原和周期素D1的表达变化及其与心肌肥大的关系

目的观察压力超负荷所致肥大心肌中增殖细胞核抗原和周期素D1的表达变化,探讨其与心肌肥大的相互关系。方法采用腹主动脉缩窄法建立大鼠心肌肥大模型,在术后不同时间点用颈总动脉插管法动态测定心功能并观察左心室体重比及心肌细胞横径的变化,用免疫组织化学方法检测心肌细胞增殖细胞核抗原和周期素D1表达变化,分别计算其阳性细胞占总心肌细胞数的比率。结果腹主动脉缩窄术后各时间点左心室体重比及心肌细胞横径进行性增高(P<0.05),同时心功能也进行性增强(P<0.05)。增殖细胞核抗原和周期素D1阳性率术后1周时显著增高(P<0.01),随后逐步回降,6周时同对照组相比差异无显著性。结论心肌肥大中不仅有心肌细胞体积的增大而且早期伴有增殖指标高表达,这种增殖指标的高表达随着心脏对负荷的适应逐步回降至正常水平,而心肌细胞体积仍进行性增大。

AT2对成年压力超负荷性肥大心肌细胞TNFα、IL-1β及IL-6分泌的调控

目的观察AT2对肥大心肌细胞炎症因子合成的调控作用及AT1和AT2间的相互关系。方法采用腹主动脉缩窄法构建SD大鼠压力超负荷性心肌肥大模型。选用术后8周肥大的心肌细胞,将其分为AngⅡ组、AngⅡ+losartan组、AngⅡ+PD123319及AngⅡ+losartan+PD123319组。待实验结束,RT-PCR法检测细胞TNFα、IL-1β及IL-6的mRNA表达水平,放免法检测TNFα、IL-1β及IL-6的蛋白表达。结果与AngⅡ组相比,AT1拮抗剂losartan不影响TNFα和IL-1β的mRNA及蛋白表达。单独应用AT2拮抗剂PD123319及联合应用losartan和PD123319均可使TNFα和IL-1β的mRNA及蛋白表达水平下调。联合应用二者TNFα和IL-1βmRNA的表达水平介于单独应用losartan和PD123319组之间。与AngⅡ单独联用losartan或PD123319相比,同时联用二者可使IL-6mRNA的表达水平上调。结论AT2参与了肥大心肌细胞炎症因子的表达调控。AT1与AT2之间并非简单的拮抗关系。

血管紧张素Ⅱ2型受体对AngⅡ诱导成年大鼠心肌成纤维细胞分泌α-TNF和IL-1β的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡtype2 receptors,AT2)在成年心肌成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子α(α-TNF)和白介素1β(IL-1β)中的作用,明确AT2受体和AT1受体作用的差异。方法差速贴壁分离及培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,将细胞分为4组进行药物干预:对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、AngⅡ+氯沙坦(losartan)组、AngⅡ+PD123319组,应用放射免疫法检测各组细胞分泌α-TNF和IL-1β的水平。结果AngⅡ诱导使心肌成纤维细胞分泌α-TNF和IL-1β明显增加。与AngⅡ组相比,α-TNF在AT1受体阻断后下调了58.7%(P<0.05),AT2受体阻断后下调了65.9%(P<0.05);IL-1β在AT1受体阻断后下调了69.1%(P<0.05),AT2受体阻断后下调了78.7%(P<0.05)。结论AT2受体参与介导心肌成纤维细胞分泌α-TNF和IL-1β。

AT2参与调控肥大心肌细胞炎症因子的合成和分泌

目的观察血管紧张素Ⅱ二型受体(AT2)对压力超负荷性肥大心肌细胞炎症因子合成和分泌的影响。方法采用腹主动脉缩窄法构建成年SD大鼠压力超负荷性心肌肥大模型,选用缩窄术后8周的肥大心肌细胞,经AngⅡ及losartan或PD123319处理36h后,放免法检测培养上清液中IL-1β、TNF-α及IL-6的表达水平。结果随着浓度增大,AngⅡ可以诱导肥大心肌细胞TNF-α和IL-1β分泌。PD123319,而不是losartan,预处理可使TNF-α和IL-1β表达下调。实验中未能检测出培养液中IL-6含量。结论AngⅡ诱导压力超负荷性肥大心肌细胞炎症因子TNF-α和IL-1β的合成与释放主要受AT2的调控。

沙棘总黄酮对兔老化红细胞膜的影响

用邻苯三酚在碱性条件下造成兔老化红细胞膜模型研究了沙棘总黄酮对其的影响，结果表明与给沙棘总黄酮前比较吸收度明显下降，说明沙棘总黄酮对红细胞膜老化有明显的抑制作用。