地塞米松诱导同系新西兰仔兔先天性腭裂的转录组异质性

目的 研究地塞米松诱导同系新西兰仔兔先天腭裂的转录组异质性,进一步探究先天性腭裂发生的分子机制。方法 妊娠第14天到第17天给20只新西兰孕兔肌肉注射地塞米松(每天1.0 mg),观察每只孕兔所有子代腭部表型。选取生产了8只胚胎、腭裂胚胎与非腭裂胚胎为4∶4的孕兔,分为腭裂组(CP)与非腭裂组(NCP),收集其腭部组织进行转录组测序分析。结果 CP组与NCP组相比,共有225个差异基因(Q<0.05),其中120个基因上调,105个基因下调。差异性表达基因的GO和KEGG富集分析表明,异三聚体G蛋白复合物、细胞外基质、转录因子复合物、基底膜的GO分类呈显著富集;GABA能突触、吗啡成瘾、逆行内源性大麻素信号、谷氨酸突触、含血清素的神经突触、肌动蛋白细胞骨架的调节、Apelin信号通路等在KEGG通路中显著富集。实时荧光定量分析法验证表明,与NCP组相比,CP组ARHGEF6 (P<0.05)、ABI2 (P<0.001)基因表达水平下降,APC基因表达水平上升(P<0.001)。结论 参与腭突中肌动蛋白细胞骨架调节的基因ARHGEF6、APC、ABI2的表达水平异常可能和地塞米松诱导新西兰兔先天性腭裂的形成相关。

地塞米松诱导新西兰兔先天性腭裂的非靶向代谢组学研究

目的应用非靶向代谢组学技术比较地塞米松干预后的腭裂胚胎、非腭裂胚胎与正常胚胎在腭突发育期间胎盘组织的差异。方法将12只孕兔(40周龄,体质量4.5~5.0 kg的雌性新西兰兔)按照随机数表法分为地塞米松组(8只)和对照组(4只),在妊娠第13到16天每日分别给两组孕兔后腿四头肌肌肉注射1次1.0 mg地塞米松和1 ml生理盐水,并于妊娠第21天处死孕兔,剖腹取其子代,按照子代腭部表型分为3组,分别为地塞米松腭裂组、地塞米松非腭裂组(经地塞米松未诱导腭裂)和正常对照组,再收集胎盘组织样本。应用液相色谱—三重串联四级杆液质联用仪获取胚胎胎盘组织样本的相应图谱,主成分分析法描绘3组胚胎胎盘组织代谢产物在胚胎腭突发育阶段的代谢差异。结果地塞米松腭裂组、地塞米松非腭裂组和正常对照组之间存在明显的代谢差异,差异代谢物共133种(VIP>1,P<0.05),涉及的重要代谢通路包括维生素B6代谢、赖氨酸代谢、精氨酸合成代谢、半乳糖代谢。正常对照组、地塞米松非腭裂组和地塞米松腭裂组中的维生素B6(分别为0.960±0.249、0.856±0.368、1.319±0.322)、半乳糖(分别为0.888±0.171、1.033±0.182、1.127±0.127)、赖氨酸(分别为1.551±0.924、1.789±1.435、0.541±0.424)和尿素(分别为0.743±0.142、1.137±0.301、1.171±0.457)差异均有统计学意义(F=5.90,P=0.008;F=5.59,P=0.009;F=4.26,P=0.025;F=5.29,P=0.012)。结论基于胎盘组织代谢物建立的统计模型表明,3组胚胎胎盘组织的代谢物表达具有差异;地塞米松诱导腭裂形成可能与维生素B6代谢、赖氨酸代谢、精氨酸合成代谢、半乳糖代谢高度相关。