甘蓝型黄籽油菜自交系转化体系的建立

利用黄籽甘蓝型油菜自交系建立和优化了遗传转化系统。首先构建了由质粒pCNR与Δ6-脂肪酸脱氢酶基因插入到植物的高效表达载体pCAMBIA2301G。利用在Murashige和Skoog培养基（含有200μmolL–1乙酰丁香酮）培养5~7d的下胚轴外植体与农杆菌株LBA4404共培养63~69h（pCNR）,再于芽诱导培养基上培养3个月诱导芽再生。在最佳条件下,平均转化效率约为1.3%。转化植株的GUS分析和PCR分析结果表明,外源基因成功导入甘蓝型油菜。Southern杂交表明,这些转化子含有目标基因1~2个拷贝。用气相色谱分析转基因植物种子的脂肪酸,γ-亚麻酸含量达8.2%。

卡拉霉素在转基因黄籽油菜中的应用

为筛选出黄籽油菜遗传转化中卡拉霉素或卡拉霉素（kanamycin ，Kan or km ）最佳质量浓度，首先将油菜子叶接种在不同质量浓度Kan（0～180 mg／L）的分化培养基上，结果发现Kan质量浓度小于60 mg／L有利于绿苗分化。然后在不同质量浓度Kan的分化培养基上对农杆菌侵染的下胚轴进行筛选，结果表明初代培养Kan质量浓度以20～40 mg／L为宜，同样质量浓度继代培养后可获得抗性愈伤和转基因阳性苗。最后利用Kan抗性对转基因黄籽油菜后代进行研究，苗期到薹花期生长的植株进行叶片涂抹法筛选，Kan最适质量浓度为4 g／L ，时间为4～10 d；T1代抗性分析、GUS染色分析、T1代籽粒的PCR检测说明转基因在T1代、T2代可遗传并出现分离。β葡萄糖苷酸酶基因（GUS）和聚合酶链式反应（PCR）验证叶片涂抹进行Kan抗性筛选的方法准确性高，可达100％。

甘蓝型黄籽油菜花药培养中若干因素影响研究

以生长在非控温控光下 9个甘蓝型黄籽油菜 (Brassicanapus)为供体 ,进行花药培养。结果表明 ,甘蓝型黄籽油菜愈伤组织诱导频率受花蕾长度、蔗糖浓度、培养基等因素影响。取材以 2mm～ 3mm的花蕾效果最好 ,培养基则是含6 %～ 10 %蔗糖浓度的B5培养基最好。并发现愈伤组织分化时 ,B5培养基附加 6 - 8A4.0mg/L和NAA0 .2mg/L效果较好。

细胞工程课程教学改革探索

为提高细胞工程教学质量和效果,针对综合性重点大学的生物技术专业的学生,对细胞工程课程教学现状进行问卷调查,并提出相应教学模式和教学方案的特别设计,以期解决教学现状中出现的问题,为培养适应现代社会需要,且具有创新能力高素质人才提供保障。

野生型拟南芥叶片愈伤组织诱导的研究

[目的]研究野生型拟南芥叶片愈伤组织的诱导。[方法]以野生型拟南芥叶片为外植体,通过将其切段后接种在添加有不同浓度6-BA和NAA的MS培养基上,研究了拟南芥愈伤组织的诱导和再生植株。[结果]6-BA对于愈伤组织诱导不可缺少,但其浓度太高易产生玻璃化;NAA单独使用利于生根,配合6-BA使用利于分化芽;获得最适愈伤组织诱导培养基为MS+0.50 mg/L 6-BA+0.10mg/L NAA,愈伤组织诱导率可达100%。[结论]为进一步开展拟南芥的遗传转化或细胞培养奠定了基础。

Study on the Callus Induction of Wild Arabidopsis thaliana Leaves

[Objective] The callus induction of wild Arabidopsis thaliana leaves was studied.[Method] As explants,leaf segments of wild A.thaliana were inoculated in MS medium including 6-BA and NAA with different concentration,and studying the callus induction and regenerated plant of A.thaliana.[Result]6-BA was necessary for callus induction,but higher concentration resulted into vitrification easily;single use of NAA was beneficial to rooting,and bud differentiation was easy in the medium with NAA and 6-BA;the optimum medium of callus induction was MS ＋0.5 mg/L 6-BA ＋0.10 mg/L NAA,with the callus induction frequency of 100%.[Conclusion]Our study could lay a foundation for the genetic transformation and cell culture of A.thaliana.

组织培养技术在油菜育种中的应用研究进展

阐述了组织培养技术在油菜育种中的研究进展,说明了它的重要性和必要性,并提出了今后组织培养技术在油菜育种方面的前景.

甘蓝型黑籽油菜遗传转化中预培养环节的优化

[目的]对甘蓝型黑籽油菜遗传转化中预培养环节进行优化。[方法]利用甘蓝型黑籽油菜下胚轴为外植体,对油菜下胚轴的预培养及其浸染后影响再生和分化情况进行研究,分别从苗龄、激素两方面讨论了下胚轴再生与分化频率的影响。[结果]苗龄、激素与遗传转化之间存在密切的联系。在农杆菌介导的油菜下胚轴预培养最佳体系是:4 d苗龄的外植体在农杆菌侵染前进行5 d预培养,预培养基是MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L。绿色抗性愈伤组织获得GUS瞬时表达,PCR鉴定再生植株为转基因植株。[结论]该研究获得了最佳的预培养条件,为建立一个高效的遗传转化体系奠定基础。

甘蓝型油菜种子萌发期耐苯磺隆种质筛选与综合评价

本研究旨在探讨不同基因型甘蓝型油菜种子萌发期耐除草剂苯磺隆特性,建立其筛选的评价体系,选育萌发期耐苯磺隆的甘蓝型油菜品种(系)。采用苯磺隆耐性度量值(T值)、平均隶属函数值(ASF值)、加权耐性系数(WTC值)等指标及相关分析、频数分析、主成分分析、灰色关联度分析、聚类分析和逐步回归分析相结合的方法,鉴定萌发期耐性。通过11份供试材料相对根长的方差分析,确定了油菜萌发期耐苯磺隆种质资源筛选及评价研究的最佳苯磺隆浓度为25 mg kg^(–1)。在此浓度胁迫下,241份甘蓝型油菜的根长、芽长、率、发芽势、鲜重5个指标均存在显著性差异。根据T值的聚类分析,将供试种质划分为5个苯磺隆耐性级别,其中Ⅰ级3份、Ⅱ级30份、Ⅲ级198份、Ⅳ级6份、Ⅴ级4份。对苯磺隆耐性较强的甘蓝型油菜品种(系)为希望106、SWU95和WH-33,可作为甘蓝型油菜苯磺隆耐性育种和耐性机制研究的重要资源。根长、鲜重、发芽率可作为评价油菜种质资源萌发期耐性的指标性状。

诸葛菜小孢子培养及其单倍体减数分裂染色体配对观察

诸葛菜是一种极有价值的观赏、蔬菜、饲料和油料作物种质资源。为建立诸葛菜小孢子胚状体诱导再生植株技术,并为诸葛菜染色体组的起源与进化研究提供相关数据资料,本研究通过对诸葛菜游离小孢子的培养,研究了热激培养时间和活性炭浓度对胚状体产量的影响,并采用常规压片法对诸葛菜单倍体减数分裂染色体配对行为进行了观察。结果表明,添加活性炭和热激培养对胚状体诱导是必需的。在直径6 cm培养皿中培养4 mL密度为1花蕾花粉mL^-1的小孢子NLN悬液时,每皿添加1 mg活性炭和32℃热激3 d的培养条件下子叶形胚状体和总胚状体产量最高,分别为每花蕾0.92±0.18个和1.32±0.25个。子叶形胚状体在1/2 MS培养基上萌发率为27.73%。花粉植株中自然加倍率为25%,加倍植株染色体数为24,单倍体植株染色体数为12。诸葛菜单倍体减数分裂染色体的平均配对构型为n=12=6.352Ⅰ+2.008Ⅱ+0.384Ⅲ+0.12Ⅳ,具有二价体及三价体和四价体的细胞比例高达96%,少量细胞的12条染色体联会形成3个四价体,说明诸葛菜很可能是起源于染色体基数x=3的同源八倍体。本试验结果对于诸葛菜新材料新品种选育和基础研究具有重要参考价值。

甘蓝型黄籽油菜原生质体的游离和纯化

以西南农业大学选育的渝黄1号和SH212个甘蓝型黄籽油菜品种为材料,切取其无菌苗的子叶和下胚轴分离纯化原生质体。种子萌发时低温处理可明显提高原生质体活力;光照处理对子叶原生质体活力有较大影响;酶液配比对原生质体产率影响较大;用“过滤-离心-漂浮法”进行纯化,用21%蔗糖,800转/min纯化效果较好。

白菜型油菜×羽衣甘蓝种间杂种的性状表现

人工合成甘蓝型油菜是拓宽油菜遗传育种种质资源的有效途径,也是研究芸薹属物种起源与演化重要的手段之一。对红籽白菜型油菜和黄籽羽衣甘蓝的人工合成杂种进行各种性状调查,研究结果表明:杂种具有亲本互补酯酶同工酶酶带,植株形态相似于甘蓝型油菜,具有较强的营养体杂种优势;植株高度自交不亲和,和几个近缘种杂交亲和性较差,籽粒颜色为红色;杂种和白菜型亲本移栽大田后,同时感染病毒病,但是杂种表现较强的耐病性。

根癌农杆菌介导转化甘蓝型油菜子叶GUS基因瞬间表达

为提高根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化甘蓝型油菜外源基因的瞬间表达率和优化遗传转化体系,利用根癌农杆菌共培养法转化甘蓝型油菜(Brassica napusL.)湘油15带柄子叶,通过组织化学染色法检测GUS基因瞬间表达情况,研究了预培养基、蔗糖浓度、无机盐浓度和乙酰丁香酮对GUS基因瞬间表达的影响。结果表明,预培养基为MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L、菌悬液为MS+蔗糖30g/L+乙酰丁香酮100μmol/L或1/2MS+蔗糖60g/L+乙酰丁香酮100μmol/L时GUS基因瞬间表达率较高,达到约40%。

羽衣甘蓝×芥菜型油菜种间杂种再生和染色体加倍

以羽衣甘蓝和芥菜型油菜种间杂种(ZH201)(2=3x=ABC=27)为试验材料,以花序轴,果柄和子房为外植体,采用不同处理对其进行再生研究;对获得的再生试管苗用秋水仙素和二甲基亚砜进行处理,比较不同因素对染色体加倍的影响;对获得的三倍体和六倍体植株进行形态学和细胞学比较.结果表明:杂种植株再生频率从高到低依次为果柄、子房、花序轴,将外植体直接接种到分化培养基(MS+0.2 NAA+3.0 mg/L 6-BA 3.0 mg/L+5.0 mg/L AgNO3+0.6 mg/L GA3)上再生频率最高.在染色体加倍处理方面,以100 mg/L秋水仙素处理根尖24 h效果最好,获得的六倍体植株与三倍体相比,花朵颜色较深,花瓣较大,花药饱满,荚果能够正常生长,获得部分种子.在细胞学上,三倍体植株在花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ存在着大量单价体,后期Ⅰ、后期Ⅱ发现有大量染色体落后现象.六倍体植株中在花粉母细胞减数分裂后期Ⅰ、后期Ⅱ也发现有染色体落后现象,但是落后染色体比三倍体少.

激素对油菜子叶再生及转基因瞬间表达的影响

以甘蓝型油菜"湘油15"子叶为外植体,以MS为基本培养基,采用正交试验设计,研究了预培养基2,4-D和6-BA浓度、分化/共培养基NAA和6-BA浓度对子叶芽再生频率和转GUS基因瞬间表达率的影响.结果表明,激素对芽再生频率和转基因瞬间表达率都有重要影响,但激素对芽再生和转基因瞬间表达的影响效应具有不一致性.激素对芽分化的影响程度从大到小依次为再生培养基NAA、预培养基6-BA、预培养基2,4-D、再生培养基6-BA,推导的对于芽再生的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 1.0 mg/L和6-BA1.0 mg/L、再生分化培养基NAA0.2 mg/L和6-BA3.0 mg/L;激素对GUS基因瞬间表达的影响程度从大到小依次为共培养基NAA、共培养基6-BA、预培养基6-BA、预培养基2,4-D,推导的对于瞬间表达的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 0mg/L和6-BA0.2 mg/L,共培养基NAA0.05 mg/L和6-BA3.0 mg/L.推导的对于芽再生频率×GUS基因瞬间表达率的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 1.0 mg/L和6-BA1.0 mg/L,共/分化培养基NAA0.05 mg/L和6-BA3.0 mg/L.

芥菜型油菜和芥蓝种间杂种的获得及其性状表现

种间杂交是拓宽遗传种质资源,创制新物种、新材料的重要手段。利用芥菜型油菜和芥蓝种间杂交人工创制其种间杂种,并对其形态学、细胞学特点进行分析。结果表明：不同的杂交组合30 d后的子房残留数和获得幼胚数差异明显,杂交组合是影响种间杂交结子（幼胚）的重要因素;通过形态学鉴定出真杂种36份,均表现为较强的营养体杂种优势。真杂种减数分裂均为异常,在减数分裂后期具有不同程度的染色体丢失现象;无性系染色体数目部分为27条,部分为27-34条。真杂种花粉育性可染率在0-47.87%,自交结实率介于0-3.65%之间。

植物组织培养实验教学初探

本文总结分析了笔者15年来从事植物组织培养实验教学与科研工作经验．结合马铃薯、甘薯、生姜、魔芋等的植物组织培养实验教学研究，探讨了优化实验内容、革新实验教学方法，完善实验技术体系，使学生系统掌握了培养基的配制、灭菌方法、接种技术和工厂化繁殖植物种质资源的无菌操作技术，大大提高了教学质量，全面培养了学生的综合能力。

甘蓝型黄籽油菜种皮色泽QTL作图(英文)

甘蓝型黄籽油菜具有低纤维、高蛋白及高含油量的优点, 因而已成为广大油菜育种工作者研究的重点之一。利用甘蓝型黑籽品系油研 2 号作父本,甘蓝型黄籽品系 GH06为母本,获得 132 个单株的 F2群体;以 AFLP 和 SSR 为主要分析方法,构建了包括 164 个标记的甘蓝型油菜遗传连锁图谱,其中包括 125 个 AFLP 标记、37 个 SSR 标记及一个 RAPD 和一个 SCAR 标记,分布在 19 个连锁群上,覆盖油菜基因组 2 549.8 cM,标记间平均距离 15.55 cM。利用多区间作图法,对种皮色泽 QTL 进行分析,在第 5 及第 19 连锁群上各检测到一个 QTL 位点,分别解释表型变异 46%及 30.9%。

甘蓝型油菜茎秆纤维组分含量和木质素单体G/S近红外模型构建

【目的】探索近红外光谱分析技术在甘蓝型油菜茎秆纤维组分含量及木质素单体G/S测定中应用的可能性。【方法】采集近红外光谱,根据马氏距离GH(Global H)筛选出103份纤维组分含量材料和75份木质素单体G/S材料作为定标样品,采用Van Soest法和GC-MS法对茎秆纤维组分含量和木质素单体比例进行测定,统计结果表明定标样品化学测定值变异范围较大,3次重复差异较小,可用于近红外模型构建。运用不同光谱预处理方法和化学计量学方法建立校正模型,对比各模型性能参数,筛选出最优定标模型并用检验集对模型进行验证。【结果】采用修正偏最小二乘法(MPLS)建立模型最佳。中性洗涤纤维(neutral detergent fiber,NDF)、酸性洗涤纤维(acid detergent fiber,ADF)、酸性洗涤木质素(acid detergent lignin,ADL)与木质素单体G/S的交叉验证相关系数(1-VR)分别为0.864、0.861、0.872和0.920,定标相关系数(RSQ)分别为0.892、0.891、0.907和0.953。用检验集对模型进行验证,NDF、ADF、ADL及木质素单体G/S模型的外部检验相关系数(RSQ)分别为0.837、0.818、0.870和0.935,其预测标准差(SEP)为0.680、0.636、0.348和0.054。【结论】试验所建模型质量较好,能快速测量茎秆纤维组分含量和木质素单体G/S,可为油菜抗病抗倒伏育种研究提供技术支持。

利用mRNA差异显示技术寻找甘蓝型油菜黄籽基因

以两组不同来源的甘蓝型黄籽油菜近等基因系为材料,利用mRNA差异显示技术对90对随机引物和锚定引物组合进行筛选,获得1个能稳定重复出现的差异cDNA片段。以该差异片段为探针经Northern杂交验证了上述结果,推测该差异片段可能和种皮色泽差异形成有关。对该差异片段进行了克隆、测序,并根据此序列设计了2个嵌套特异引物,利用PCR-Walking技术延伸该差异片段,对该延伸序列进行克隆、测序及序列同源性分析。同时对mRNA差异显示技术应用过程中的相关问题进行了探讨。