基因损伤后蛋白分子Axin通过控制p53的活性阈值来决定细胞“命运”

遗传毒性应激后，基于p53的活性细胞可能会遭受周期延滞或调亡不同的“命运”。研究发现，细胞“命运”的决定依赖于Axin与Pirh2、Tip60、HIPK2和p53形成的不同复合物。细胞被次致死剂量的紫外线或阿霉素处理后．

真核表达载体pIRES2-EGFP-Axin的构建及其在神经胶质瘤细胞内的表达

目的:构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞系C6中进行表达。方法:用PCR的方法扩增Axin基因,构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,经NheI及SalI双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染C6细胞,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中Axin的表达。结果:构建了真核表达载体pIRES2EGFPAxin,用脂质体法转染神经胶质瘤细胞C6后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论:成功地构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究Axin对肿瘤的生物学作用以及Axin在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。

p38MAPK抑制剂SB-202190对大鼠胶质瘤C6细胞的双重作用

目的 探讨 p38MAPK抑制剂SB 2 0 2 190对C6细胞生物活性的影响。方法 采用透射电镜的方法和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法观察SB 2 0 2 190诱导胶质瘤细胞的凋亡 ;应用流式细胞仪检测细胞周期变化和是否有凋亡发生。结果 浓度分别为 10、2 0、4 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190能促进C6细胞的细胞周期从G1期过度到S期 ;但 6 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190却诱导C6细胞凋亡 ,凋亡率与时间呈正相关 ,透射电镜观察结果显示 ,凋亡细胞的体积缩小、细胞核浓聚缩小 ,染色质固缩聚集于核膜下 ,胞质浓缩 ,有的细胞染色质浓缩至核膜下成新月状 ;琼脂糖凝胶电泳呈现出特征性的DNA“梯状”带。结论 SB 2 0 2 190在低浓度时促进C6细胞增殖 ,高浓度时诱导细胞凋亡。

过度表达G蛋白调节子16促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖

目的 探讨 G蛋白调节子 16 (RGS16 )对大鼠胶质瘤C6细胞的生物学特性的影响 .方法 利用脂质体介导法将RGS16基因导入 C6细胞中 ,在倒置显微镜下观察细胞形态变化和贴壁情况 ;3H- Td R法检测 C6细胞在转染不同梯度p CMV5 - RGS16和 p CMV 5质粒后的增殖情况 ;免疫细胞化学法检测转染前后 RGS16蛋白的表达情况 ;流式细胞仪检测转染 p CMV5 - RGS16和 p CMV5质粒 36 h后细胞周期变化和细胞是否有凋亡发生 .结果 转染 p CMV5 - RGS16质粒 2 4 h后 30 %细胞贴壁性降低 ,突起收缩 ,细胞变圆 ;RGS16蛋白表达阳性 ;3H- Td R法检测显示 C6细胞增殖速度与转染p CMV5 - RGS16的量呈正相关 ;细胞周期结果显示 G1期细胞百分数减少 10 % ,而 S期细胞百分数增多 14 % ;未发现RGS16与凋亡有直接关系 .结论 RGS16可能促进 C6细胞的增殖 .

外源性RGS16基因稳定转染对胶质瘤C6细胞生长的影响

背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤C6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染C6细胞,经G418筛选后荧光显微镜观察细胞中增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorscentprotein,EGFP)的表达,RT-PCR证实RGS16的mRNA表达,免疫细胞化学方法检测细胞中RGS16蛋白表达。最后利用流式细胞仪、生长曲线、平板克隆形成等方法研究RGS16基因对胶质瘤细胞周期、生长及增殖的影响。结果:成功构建了稳定表达RGS16和表达空载体的细胞系C6-RGS16、C6-GFP。C6-RGS16、C6-GFP和C6经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为28.5%、18.9%和14.3%(P<0.05);生长曲线表明C6-RGS16生长的速度明显快于C6-GFP及C6,但其平板克隆形成率分别为12%、25%和25%(P<0.05)。结论:RGS16促进C6细胞周期从G1期向S期过渡,加快细胞生长速度,但是并不促进细胞克隆形成。

胶质瘤中Axin基因点突变检测及表达研究

目的 检测胶质瘤中Axin基因的点突变及其表达情况 ,初步探讨Axin与胶质瘤发生的关系。方法 采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术及DNA测序方法检测Axin基因外显子 8,9及 10在 2 8例胶质瘤中的突变情况 ;同时对上述胶质瘤及正常脑组织进行免疫组化染色。结果 在 2 8例胶质瘤组织中Axin的第 10个外显子共有 6例样本 (2 1.4 % ) 3处发生了错义突变 ;3例 3处发生了同义突变 ;2 8例胶质瘤中 8例 (2 8.6 % )Axin表达阳性 ,正常脑组织中神经元表达阳性 ,神经胶质细胞表达阴性 ,检测到突变的样本中 1例表达阳性。

凡纳滨对虾G蛋白Gα_s基因的克隆和功能鉴定

寻找并克隆凡纳滨对虾G蛋白α亚基基因,为对虾的生理调控研究提供理论基础.通过简并PCR和RACE技术获得目的基因的全长cDNA序列.将该基因的编码序列克隆到pCMV5表达载体,通过免疫共沉淀实验和胞内cAMP浓度的测定鉴定该基因表达产物的功能.用半定量RT-PCR和Western blotting确定该基因的表达产物在对虾身体各部位的分布.克隆到凡纳滨对虾的G蛋白短式剪切模式Gαs亚基基因,将其表达产物命名为pvGαs-s.pvGαs-s的序列和功能与其它物种的Gαs具有高度保守性.它在对虾身体各部位存在普遍分布,尤其在脑神经和腮中大量表达,在触角、眼等部位也有适量分布.说明pvGαs-s在对虾生命活动中的重要性,为研究对虾的生理调控奠定了理论基础.

p38MAPK和RGS16对大鼠胶质瘤C6细胞凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨p38MAPK和RGS16对大鼠胶质瘤C6细胞的生物学特性的影响 .方法 利用脂质体介导法将p38MAPK和RGS16基因分别或共转染导入C6细胞中 ;用p38MAPK抑制剂SB 2 0 2 190处理处于对数生长期的转染和未转染 p38MAPK的C6细胞 ,2 4～ 36h后在倒置显微镜下观察细胞形态变化和贴壁情况 ;免疫细胞化学法检测转染前后p38MAPK和RGS16蛋白的表达情况 ;流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞是否有凋亡发生 .结果 转染 pCMV5 p38和 /或pCMV5 RGS16质粒 36h后 30 %细胞贴壁性降低 ,突起收缩 ,细胞变圆 ;p38MAPK和RGS16蛋白均表达阳性 ;转染pCMV5 p38组出现 33.8%的凋亡峰 ,细胞周期结果显示G1期细胞百分数增加 17% ,而S期细胞百分数减少 14 % ;转染pCMV5 RGS16组无凋亡发生 ,细胞周期结果显示G1期细胞百分数减少 10 % ,而S期细胞百分数增加 14 % ;共转染pCMV5 P38和pCMV5 RGS16组未出现的凋亡峰 ,细胞周期结果显示G1期和S期细胞百分数变化与未处理组之间没有明显差别 ;但共转染 pCMV5 p38和 pCMV5组出现的凋亡峰 ,细胞周期结果显示G1期和S期细胞百分数变化与转染pCMV5 p38组之间很接近 ;SB 2 0 2 190处理的未转染组细胞周期结果显示G1期细胞百分数减少 18% ,而S期细胞百分数增加 18% ;SB 2 0 2 190能对抗

RGS16与p53在人胶质瘤中的表达及相关性研究

目的研究G蛋白信号调节子16(RGS16)与p53在人胶质瘤中表达及其相关性。方法利用免疫组织化学链霉亲合素生物素过氧化物酶复合物(SABC)法检测42例胶质瘤标本中RGS16与p53的表达。结果RGS16在10例胶质瘤旁正常脑组织有8例神经元阳性但胶质细胞阴性、42例胶质瘤中37例肿瘤细胞阳性,二者差异显著(P<0.05);p53在瘤旁正常脑组织中阴性,胶质瘤中15例阳性,差异明显(P<0.05);RGS16、p53表达均与病理分型、分级无关(P>0.05);其中,RGS16与p53共同阳性表达11例,共同阴性表达1例,Kappa检验二者表达呈负相一致(P<0.05)。结论RGS16在胶质瘤中高表达而与病理分级无关,推测RGS16可能在胶质瘤发生中起作用。另外,胶质瘤中RGS16与p53表达呈负相关。

p38MAPK基因诱导胶质瘤细胞凋亡

目的 研究 p38MAPK基因转染大鼠胶质瘤细胞系C6后对其生物学特性的影响 .方法 利用脂质体介导法将p38MAPK基因导入大鼠胶质瘤细胞系 C6中 ,用免疫细胞化学染色检测其在细胞转染前后的表达情况 ,用 HE染色、流式细胞仪等方法研究其对细胞形态、粘着状况和生长周期的影响 .结果 转染 p CMV5 - p38MAPK质粒组 p38MAPK蛋白表达阳性 ,细胞形态发生变化 ,贴壁性降低 ,出现大量凋亡细胞 .结论 转染

凡纳滨对虾G蛋白Gβ_1亚基的克隆、表达与鉴定

根据G蛋白Gβ1亚基的保守序列设计简并引物,通过简并PCR和RACE技术,克隆到凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)Gβ1基因的全长cDNA序列。利用Blast、DNAstar和Genedoc软件分析,发现该Gβ1编码的蛋白序列与其他物种已知的Gβ1序列具有相当高的保守性,将它命名为pvGβ1。免疫共沉淀分析发现pvGβ1能在体外适当条件下与对虾Gαs或Gαq相互结合。Westernblot-ting分析发现,pvGβ1在对虾身体各部位都有广泛分布,尤其在脑神经、眼和眼柄有大量表达。说明了Gβ1在对虾的神经系统和光信号传导等生命过程中的重要性。

转染热休克蛋白70对p38MAPK信号通路的影响

目的 探讨热休克蛋白 (HSP70 )在人胶质瘤细胞BT 32 5 p38MAPK信号通路中的作用。方法 用脂质体介导法将hsp70基因导入人胶质瘤细胞BT 32 5中 ,倒置显微镜观察转染细胞的形态学及粘附性变化 ,紫外线照射 30min后 ,采用免疫组化和Western blot方法测定转染前后HSP70的表达水平及照射前后 p38MAPK表达情况。结果 免疫组化和Western blot证实hsp70基因成功转染入BT 32 5中 ,转染细胞受到紫外线照射后 p38MAPK表达减弱。结论 体外转染hsp70基因可抑制紫外线照射后BT 32 5细胞

UV通过p38 MAPK促进大鼠胶质瘤C6细胞凋亡

目的 :探讨 p38MAPK在紫外线损伤刺激细胞中的特异性信号转导作用 .方法 :流式细胞仪检测紫外线照射 30min后 1,2及 4h的C6细胞周期变化和是否有凋亡发生 ;应用免疫细胞化学技术观察紫外线刺激前后 p38MAPK在C6细胞中的表达强度和分布特征 .结果 :细胞周期结果显示 1,2和 4h后G1期细胞数分数各增多 0 .12 ,0 .2 1和 0 .19,而S期细胞数分数减少 0 .10 ,0 .14和 0 .15 ;各组的凋亡率分别是12 % ,4 9%和 34% ;未受刺激的细胞中 ,p38MAPK在胞质和胞核表达较弱 ;紫外线损伤作用 2h后 ,细胞核区的染色强度即明显增强 ,而胞质区域的染色强度相对降低 .结论 :C6细胞受紫外线损伤后可通过

生物科学本科教学质量保障监控体系的构建与探索

为了提高生物科学本科教学质量,厦门大学生命科学学院建立了"学院、教学部、课程组"三级本科教学管理体制,建设了由学院领导、教学部成员、学校本科教学督导组成员、班主任和辅导员组成的教学质量管理队伍,形成了"检查、反馈、改进、再检查"的良性运行机制。这样的管理体制和运行机制,以及健全而规范的教学管理制度,构成了生物科学本科教学质量保障监控体系。

遵循人才培养规律的生物科学专业课程体系建设探讨

本文针对大学生对生物科学专业缺乏兴趣,专业认同感不高以及传统专业课程教学体系难以激发学习兴趣等问题,总结了我院近些年针对这些问题展开的对生物科学专业课程体系建设进行的探索。我们以遵循人才培养规律作为教学改革与实践的指导思想,优化本科生专业课程体系设置,旨在从激发专业兴趣与认同感出发,着力培养基础知识扎实、动手能力强、具有批判性思维和国际视野的创新性人才。

Axin基因的表达对神经胶质瘤细胞系C6生物学特性的影响

目的研究Axin基因对神经胶质瘤细胞C6生物学特性及相关蛋白的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长曲线,应用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的变化,并用平板克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行了检测。应用末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察细胞凋亡及比率。采用免疫细胞化学染色法检测Ki67、CyclinD1、p53的表达。结果转染Axin基因使细胞周期在G1期阻滞;细胞增殖能力和细胞克隆形成能力均显著降低;细胞凋亡率增高;Ki67及CyclinD1低表达,p53高表达。结论转染Axin基因后胶质瘤细胞出现了一定的增殖抑制现象,诱导细胞凋亡,Axin基因可能通过上调p53基因表达和下调Cy-clinD1表达而抑制胶质瘤细胞的生长。

凡纳滨对虾G蛋白Gα_q基因的克隆和功能鉴定

为了寻找并克隆凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)G蛋白α亚基,为研究对虾的生理调控提供理论基础,通过简并PCR和RACE反应获得目的基因的全长cDNA序列;用Blast,DNAstar和Genedoc软件对所得序列进行分析,确定所得序列为凡纳滨对虾G蛋白Gαq基因,命名为pvGqα。将该基因的编码序列克隆到表达载体,通过免疫共沉淀实验和胞内Ca2+,IP3浓度的测定鉴定该Gαq亚基的功能,发现该亚基的序列和功能与其他Gαq家族成员具有高度保守性。用Western blotting分析发现pvGαq在对虾身体各部位存在普遍分布,尤其在脑神经、眼柄、腮和颚片中有大量表达,在嗅觉器官触角也有适量分布。说明了pvGαq在对虾生命活动中的重要性,为研究对虾的生理调控奠定了理论基础。

内外源性p53诱导大鼠胶质瘤细胞C6 RGS16蛋白的表达

目的:探讨内外源性野生型p53是否可以诱导大鼠胶质瘤细胞C6RGS16表达。方法:在大鼠胶质瘤细胞C6中,分别转染pEGFP-C3-wtp53或以400ng/ml表阿霉素诱导内源性野生型p53表达,于处理后0h、4h、8h、16h、26h、32h和52h收集细胞爬片、固定后免疫细胞化学检测p53蛋白与RGS16蛋白表达。结果:转染pEGFP-C3-wtp53后4h、8h、16h、26h和32h时均检测到p53蛋白表达,在8h和16h时检测到RGS16蛋白表达;在400ng/ml表阿霉素处理后,仅在26h时检测到p53表达而始终未见到RGS16蛋白表达。结论:内外源性野生型p53可以诱导大鼠胶质瘤细胞C6RGS16蛋白的表达。

G蛋白调节子16对胶质瘤C6细胞周期的调节

目的 探讨G蛋白调节子 16(RGS16)对胶质瘤C6细胞周期的影响。方法 利用脂质体介导法将RGS16基因导入C6细胞中 ,在倒置显微镜下观察细胞形态变化和贴壁生长情况 ;免疫细胞化学法检测转染前后RGS16蛋白的表达情况 ;流式细胞仪检测转染pCMV 5 RGS16和 pCMV 5质粒后每隔 12h后的细胞周期变化。 结果 转染pCMV 5 RGS16质粒 2 4h后 3 0 .0 %细胞贴壁性降低 ,突起收缩 ,细胞变圆 ,72h之后细胞又恢复正常 ;RGS16蛋白的表达呈时相性 ,3 6h时表达率最高 (阳性率为13 .0 % ) ,72h表达终止 ;C6细胞的各期细胞比例变化与RGS16蛋白表达对应 ,在 3 6h时G1期比例从转染前的 70 .5 %降低到60 .2 % ,S期比例从 2 0 .9%增加到 3 4.9% ;在 48h时G1期增加到 76.2 % ,S期减少到 11.4% ;72h各期恢复到正常比例。对照组细胞转染前后形态变化不明显 ,RGS16蛋白表达阴性 ,细胞周期变化不明显。