基于染色体短串联重复序列的荧光定量PCR技术在产前诊断中的实际应用

目的本研究旨在探讨基于染色体短串联重复序列(short tandem repeat,STR)的荧光定量PCR(quantitative fluorescence PCR,QF-PCR)在产前诊断中的应用潜力及其价值。方法通过基于STR的QF-PCR技术结合染色体核型分析技术和染色体微阵列分析技术(chromosomal microarray analysis,CMA),我们对635例产前筛查异常的羊水样本进行了筛查,从而有效地排除了母源细胞污染(maternal cell contamination,MCC)(>20%),为后续的产前检测提供了可靠的依据。此外,为了快速诊断胎儿及其相应的孕妇样本,我们检测了包括13、18、21、X、Y在内的五条染色体,并将其与核型分析的结果进行比较。结果通过QF-PCR检测,在635例样本中,发现了3例母源污染,1例三倍体,1例与母亲的亲缘关系不符,12例21三体,6例18三体,1例13三体。除此之外,还有10例性染色体异常和1例21三体嵌合。与CMA结果比较,QF-PCR检测结果均符合试剂盒的检测范围。值得一提的是,QF-PCR检测还额外的发现了5例母亲的性染色体异常,同时若在试剂盒检测范围内发现了三体还可以结合亲本的STR分型结果分析额外染色体的亲本来源并且推测异常染色体减数分裂不分离发生时期。结论基于STR位点的QF-PCR技术是一种快速检测方法,不仅适用于非整倍体倍型的检测,还可用于母源细胞污染检测、亲缘溯源检测以及染色体嵌合体的检测,同时还可以检测染色体三体的亲本来源。QF-PCR技术在产前诊断中具有广泛的应用前景,可以为医生和家庭提供更准确、更可靠的诊断结果。

一对双胞胎脑瘫患儿全基因组测序分析

目的:利用全基因组测序(WGS)技术分析一对双胞胎脑瘫患儿的遗传学病因。方法:采用WGS技术对一对双胞胎脑瘫患儿进行检测,同时对其父母进行了基因芯片的验证试验。结果:共发现30个与脑瘫有关联的基因,其中相关热点的基因有人类转录激活因子蛋白4、GAD1、ADD3等;在KANK1外显子区域发现一个共有的SNP突变;在2号染色体上发现有大约120 kb的重复,14号染色体上有大约280 kb和540 kb的缺失; 14号染色体片段异常来自母亲。结论:脑瘫遗传因素复杂,可能由多个基因诱发; WGS技术适用于脑瘫的遗传学研究。

Syntaxin4参与小鼠卵母细胞皮质颗粒的转运机制的研究

目的探讨Syntaxin4参与小鼠卵母细胞皮质反应及对皮质反应的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测Syntaxin4在小鼠卵母细胞表达;免疫荧光验证Syntaxin4与皮质颗粒在卵母细胞中的定位,分析Syntaxin4对小鼠卵细胞皮质反应的影响;活细胞实时拍摄系统观察降低Syntaxin4表达后皮质反应的动态变化。结果 (1)Syntaxin4在小鼠卵母细胞中表达,且在GV期和MII期无明显变化;(2)Syntaxin4与小鼠卵细胞皮质颗粒共定位;(3)活细胞实时拍摄证实降低Syntaxin4的表达后阻碍了皮质反应的进行。结论 Syntaxin4参与小鼠卵细胞皮质反应。

一例色素失禁症女婴的NEMO基因突变

目的检测一例色素失禁症(incontinentia pigmenti,IP)新生儿及其父母核因子-κB关键调节基因(nuclear factor-κB essential modulator,NEMO)突变。方法采集患儿及其父母外周血,提取DNA;采用多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction,PCR)检测NEMO基因是否存在频发突变共有序列NEMO△4-10缺失,并对NEMO基因所有外显子进行Sanger测序。结果患儿存在NEMO基因外显子4-10的杂合性缺失,父母双方均不存在NEMO基因突变,该突变为新发突变;Sanger测序表明患儿另一拷贝NEMO基因外显子及父母NEMO基因外显子均未检出有意义的突变。结论该IP患儿检出NEMO基因外显子4-10杂合性缺失,PCR扩增和Sanger测序联合检测NEMO基因突变对IP临床遗传咨询有一定的应用价值。

染色体微阵列分析在流产物检测中的应用与意义

目的 本研究旨在通过染色体微阵列分析(CMA)探究流产绒毛或胚胎组织中染色体异常的分布,及其与孕周和孕妇年龄的相关性,以评估CMA在自然流产遗传学诊断中的应用价值。方法 研究收集了2021年2月至2023年11月南通市妇幼保健院处理的891例流产女性样本,进行染色体微阵列分析和荧光定量PCR(QF-PCR)检测。样本根据CMA结果分为染色体数目异常、致病性拷贝数变异(CNV)、意义不明的变异(VOUS)和未见明显异常四类,比较不同年龄和孕周孕妇的CMA结果。结果 891例流产样本中,366例(41.08%)出现染色体数目异常,54例(6.06%)检出致病性CNV,67例(7.52%)为VOUS。孕早期(1~12周)样本中染色体数目异常比例为46.60%,孕中期(13~27周)降至38.35%,孕晚期(28周以上)的样本中未见染色体数目异常。非整倍体异常,尤其是常染色体三体或单体最多,以16号染色体三体较多见。致病性CNV中约75.93%为非平衡染色体异常。数据还显示孕妇年龄增长与遗传异常风险正相关,40岁以上孕妇遗传异常发生率显著增加。结论 CMA是胎儿流产遗传学诊断的重要工具,能检测染色体数量异常和基因组拷贝数变异,对评估再次怀孕风险提供重要指导。

父亲FOXF1基因体细胞-生殖腺嵌合变异导致患儿死亡1例的遗传学分析

目的探讨1例出生后2 d死亡的肺泡毛细血管发育不良伴肺静脉错位(ACD/MPV)患儿的遗传学特征及其死亡原因。方法选取2022年9月就诊于南通大学附属妇幼保健院的1例ACD/MPV患儿作为研究对象。采集患儿的临床资料。应用全外显子组测序(WES)技术对患儿皮肤组织进行基因检测,针对候选致病变异,进行Sanger测序家系验证。应用液滴数字PCR(ddPCR)技术检测该变异在患儿父亲不同胚层来源标本中的嵌合比例。结果患儿出生后2 d因"低氧血症和呼吸窘迫"死亡。WES结果显示患儿携带FOXF1基因c.433C>T杂合变异,既往未见报道。Sanger测序验证患儿存在该变异,母亲该位点为野生型,父亲外周血样中该位点可见微小变异峰。ddPCR提示其父亲精液中c.433C>T变异嵌合比例为27.18%,源于3个胚层的组织中该变异嵌合比例为11%~28%。结论本研究患儿携带的源自其嵌合变异父亲的FOXF1基因c.433C>T杂合变异可能为导致该患儿死亡的遗传学病因。ddPCR为检测变异嵌合的有效手段。

10例以脑发育不良为主要特征的脑瘫患儿的遗传学病因分析

目的探讨脑瘫患儿的遗传学病因。方法对表型存在差异的1对双胞胎脑瘫患儿进行全基因组测序,对另外8例脑瘫患儿进行全外显子组测序,用自定义的过滤流程对所发现的基因变异进行筛选,探讨可能与脑瘫相关的生物学通路和基因。结果共发现3个与脑瘫相关的生物学通路,分别为轴突导向通路(axon guidance)、化学突触传播(transmission across chemical synapses)和突触处蛋白相互作用(protein-protein interactions at synapses),同时发现25个脑瘫易感基因。结论对脑瘫相关的分子机制进行了初步探讨,可能为脑瘫的药物开发提供新的线索。

子痫前期中叶酸代谢酶基因多态性与同型半胱氨酸相关性研究

目的探讨四氢叶酸还原酶677、1298位点和甲硫氨酸合成酶还原酶66位点单核苷酸多态性及血浆同型半胱氨酸水平与子痫前期疾病发生的关系。方法分别收集150例子痫前期妇女和150例正常妊娠妇女口腔咽拭子,采用PCR-金磁微粒层析法检测基因多态性,同时采集受试者外周静脉血,ELISA法集中检测同型半胱氨酸水平。结果基因型频率的相对风险分析结果显示,MTHFR A1298C的CC基因型的发病风险是AA型的3.633倍,MTRR A66G的GG基因的发病风险是AA型的2.160倍,差异均有统计学意义(P<0.05);PE组Hcy浓度(10.53±6.17μmol/L),显著高于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.01);基因多态性与Hcy水平的多元线性回归模型以及与PE疾病Logistic回归模型分析结果显示,MTRR A66G突变基因型GG与血浆Hcy浓度呈显著相关(P<0.01),且与子痫前期疾病的发生有主效应。结论 MTHFR基因A1298C位点的突变基因型CC和MTRR A66G位点的突变基因型GG是PE疾病的高风险因子,MTRR A66G位点基因多态性是影响子痫前期疾病血浆Hcy水平的重要遗传因素。

MLPA技术在检测胎儿性染色体非整倍体异常中的应用

目的探讨多重探针连接依赖式扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术在胎儿性染色体非整倍体异常的相关检测中的应用。方法 4例性染色体异常的样本进行MLPA检测及染色体核型分析,MLPA所得数据通过Coffalyser v9.4软件(Holland-MRC公司)进行分析,依据样本DNA拷贝数的变化,判断有无异常。并且与染色体核型分析结果进行比较和分析。结果 4例性染色体异常胎儿经MLPA分析,结果显示对应的染色体区域呈现探针信号异常,并且与染色体核型分析结果一致。结论 MLPA技术在检测性染色体非整倍体异常中具有重要价值,可以为染色体核型分析结果提供补充。

MLPA技术在检测胎儿性染色体非整倍体异常中的应用

目的探讨多重探针连接依赖式扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术在胎儿性染色体非整倍体异常的相关检测中的应用。方法 4例性染色体异常的样本进行MLPA检测及染色体核型分析,MLPA所得数据通过Coffalyser v9.4软件(Holland-MRC公司)进行分析,依据样本DNA拷贝数的变化,判断有无异常。并且与染色体核型分析结果进行比较和分析。结果 4例性染色体异常胎儿经MLPA分析,结果显示对应的染色体区域呈现探针信号异常,并且与染色体核型分析结果一致。结论 MLPA技术在检测性染色体非整倍体异常中具有重要价值,可以为染色体核型分析结果提供补充。