人增生性瘢痕成纤维细胞的改良培养和鉴定

目的:探讨并建立一种简便易行、培养周期短的成纤维细胞改良培养方法。方法:采用组织块贴壁结合胰蛋白酶消化法体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞。倒置相差显微镜下观察培养的成纤维细胞形态,进行细胞鉴定,作生长曲线观察细胞增殖能力。结果:采用组织块贴壁结合胰蛋白酶消化法体外分离人增生性瘢痕成纤维细胞,细胞培养周期短。分离培养的成纤维细胞波形蛋白呈阳性表达。传代培养的成纤维细胞增殖能力强。结论:采用组织块贴壁结合胰蛋白酶消化法体外分离培养法可以较快、较好地获得稳定培养的增生性瘢痕成纤维细胞,为其形成机制及防治研究提供实验基础。

干细胞在皮肤组织工程中的应用

目前还没有一种理想的组织工程皮肤能满足临床严重皮肤缺损患者的需求,其重要原因之一是无合适的种子细胞来源。干细胞在皮肤组织工程中的应用已取得了很大进展,但仍存在一些问题需要解决。基于此,文章重点介绍了胚胎干细胞、表皮干细胞和间充质干细胞等有代表性的干细胞的分离、培养以及在皮肤组织工程中的应用现状,并提出了存在的问题和下一步的研究方向,以期研制出更理想的组织工程皮肤替代物。

手腕部深度烧伤削切痂植大张自体皮疗效观察

目的通过手腕部深度烧伤不同治疗方法的比较,探讨手腕部深度烧伤的理想治疗方法。方法将60例共83只手腕部深度烧伤患者随机分成A、B 2组,A组采用早期削切痂移植大张自体皮,B组采用肉芽创面移植邮票状自体皮,观察2组手部创面修复时间和功能恢复情况。结果A组一次植皮成功率与B组相比,无显著性差异(97.7%vs 100.0%,P>0.05);A组愈合时间与B组相比,有极显著性差异[(14.0±1.2)d vs(37.0±1.4)d,P<0.01];A组优良率与B组相比,有极显著性差异(95.3%vs 30.0%,P<0.01)。结论早期削切痂移植大张自体皮术治疗手腕部深度烧伤能有效保护手腕部的功能,疗效优于肉芽创面移植邮票状自体皮术。

应用表皮干细胞、间充质干细胞构建复合皮肤及移植实验

目的探讨应用表皮干细胞、间充质干细胞构建复合皮肤修复全层缺损皮肤的可行性。方法选择新西兰大白兔18只，在每只兔背上用常规手术方法切去3个大小相同的全层皮肤缺损创面，面积约2cm×2cm。将经处理的脱细胞真皮（acellular dermal matrix，ADM）接种骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）和表皮千细胞（epidermal stem cells，ESCs）制成复合皮肤。实验分A、B、C3组，A组移植复合皮肤；B组移植脱细胞真皮；C组用油纱布敷盖创面。观察各组移植后1～3周内创面愈合、肉芽组织生长及上皮化等情况，并进行创面组织HE染色。结果术后A、B、C3组创面愈合时间分别为（14．6±1．1）、（18．3±1．2）、（23．0±1．4）d，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。术后14d创面标本HE染色观察：A组创面已上皮化，毛细血管、成纤维细胞数量增加，胶原合成增多，肉芽组织形成丰富；B、C组创面上皮化不全，仍可见许多炎性细胞，肉芽组织中毛细血管、成纤维细胞数量不如A组。结论表皮干细胞、间充质干细胞接种于脱细胞真皮构建复合皮肤，可加速新生血管形成及创面上皮化，可用于全层皮肤缺损创面的治疗，提高创面愈合质量。

血管内皮生长因子165基因修饰人骨髓间充质干细胞复合兔脱细胞真皮基质构建活性组织工程皮肤

背景:利用组织工程原理构建的人工皮肤替代物用于皮肤移植可有效解决供皮不足这一难题,但组织工程皮肤很大程度上受制于移植物血管网缺乏造成的细胞供养障碍而导致失效。目的:以血管内皮生长因子165基因修饰的人骨髓间充质干细胞复合兔脱细胞真皮基质,拟构建活性组织工程皮肤。设计、时间和地点:以基因工程为基础的组织构建实验,于2008-03/06在南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成。材料:普通级新西兰大白兔5只用于提取脱细胞真皮基质原料,由南昌大学医学院动物科学部提供,人骨髓间充质干细胞取自临床骨髓穿刺检查正常的患者,pShuttle-CMV/VEGF165质粒转化大肠杆菌菌种由武汉协和医院郜勇博士惠赠。方法:无菌条件下切取兔耳全层皮肤,将2cm×2cm皮片置于0.25%胰酶-EDTA消化液中去掉表皮,再置入曲拉通X-100溶液使真皮细胞完全脱净,磷酸盐缓冲液反复清洗,即为脱细胞真皮基质,4℃保存备用。采用密度梯度离心与贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,取传至第3代细胞,按5×105/孔密度接种,待细胞达80%融合时进行脂质体介导的pShuttle-CMV/VEGF165质粒转染,接种于制备好的脱细胞真皮基质上体外联合培养。主要观察指标:骨髓间充质干细胞与脱细胞真皮基质的形态观察,组织工程皮肤结构观察。结果:体外培养的骨髓间充质干细胞大部分呈梭形,基因转染后细胞形态及活性无明显影响;脱细胞真皮基质呈瓷白色,柔韧有弹性。血管内皮生长因子165基因修饰的骨髓间充质干细胞与脱细胞真皮基质共培养2d后,所构建的组织工程皮肤呈淡红色,质软,接种细胞生长状态正常,苏木精-伊红染色及扫描电镜观察可见在脱细胞真皮基质的间隙中有大量长梭形细胞附着生长。结论:血管内皮生长因子165基因转染的人骨髓间充质干细胞在兔脱细胞真皮基质中生长良好,可在体外联合构建活性组织工程皮肤。

Ⅳ型胶原快速黏附法体外分选人胎儿表皮干细胞

背景：发育生物学研究表明，表皮干细胞是皮肤及其附属器发生、修复、重建的关键性源泉，如何从皮肤组织中分离获得更多的表皮干细胞，并在体外培养过程中保持干细胞特性是其在皮肤组织工程中应用的重要前提。目的：观察Ⅳ型胶原快速黏附法分选的人胎儿表皮干细胞体外生长状态及克隆形成情况，并与角质细胞进行对照。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2008—01／06在南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成。材料：因创伤等原因致意外流产的妊娠24～26周龄胎儿皮肤标本，由南昌大学第一附属医院产科提供。Ⅳ型胶原为美国Sigma公司产品，角质细胞无血清培养基为美国Gibco公司产品。方法：将Ⅳ型胶原用磷酸盐缓冲液稀释成100mg／L，均匀涂被培养板后于超净工作台中风干备用。无菌条件下取胎儿皮肤标本，剪成3．0mm×5．0mm皮条片，4℃胰蛋白酶＋EDTA联合消化8～10h，表皮真皮分离，用角质细胞无血清培养基将表皮反复吹打，获得单细胞悬液接种于预处理好的Ⅳ型胶原培养板，置37℃、体积分数为0．05的CO2饱和湿度培养箱中，20min后吸去培养液和未黏附细胞，加入含体积分数为0.1的胎牛血清、10μg／L表皮生长因子及角质细胞无血清培养基的表皮干细胞培养液，细胞约70％-80％融合后传代扩增；将未黏附细胞接种于另一培养板中，相同条件下作为角质细胞对照培养。主要观察指标：表皮干细胞的形态变化、免疫细胞化学染色鉴定结果及克隆形成率。结果：经贴壁筛选的表皮干细胞接种后呈圆形，折光性较强；1d后细胞略伸展为扁平的多角形，胞质近中央处有圆形核；3d时出现表皮干细胞克隆；5d时克隆数量明显增多，细胞之间紧密衔接，呈铺路石状；14d左右细胞基本融合。分离培养的人表皮干细胞克隆β1整合素、角蛋白19、p63均呈阳性表达。表皮干细胞克隆形成率明显高于角质细胞克隆形成率（t=1．972，P〈0．05）。结论：采用Ⅳ型胶原快速黏附法成功筛选出纯度较高的人胎儿表皮干细胞，且呈明显克隆性生长，具有典型的干细胞生物学特性。

关节部位Ⅲ度烧伤削痂植皮与切痂植皮的效果比较

目的:Ⅲ度烧伤创面的处理临床上仍然以切痂植皮术治疗为主,由于切痂时切除了并未损伤的皮下脂肪组织,使其愈后外观变化明显。实验拟观察关节部位Ⅲ度烧伤削痂后于脂肪层移植大张自体中厚皮的疗效,并与切痂植皮进行比较。方法:①于2001-01/2007-06南昌大学第一附属医院烧伤科收治的关节Ⅲ度烧伤患者中抽取39例(45个关节)作为削痂组,同时抽取45例(共60个关节)作为切痂组。所有患者对治疗及实验方案均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准。②削痂组削痂植皮,保留正常皮下脂肪等组织。切痂组切痂植皮,切痂平面包括全层皮肤和皮下脂肪组织一并切除直至深筋膜层。削痂或切痂后植大张自体中厚皮。③创面修复后4￣6周观察两组患者的关节外观和关节活动功能;比较两组患者术后2周的植皮成活率和创面修复时间。结果:两组患者均进入结果分析。①两组患者烧伤关节创面修复后与对称的正常关节比较,削痂组外观变化不明显,周径缩小3.6%(P>0.05),功能好,关节活动度减少5.3%(P>0.05);切痂组外观变化明显,周径缩小23.4%(P<0.05),功能较差,关节活动度减少21.9%(P<0.05)。②两组患者术后2周植皮成活率和创面修复时间差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:脂肪层移植大张自体中厚皮于Ⅲ度烧伤削痂后关节部位,能够维护肢体的美观,保护关节功能,疗效优于切痂植皮。

中厚供皮区回植自体刃厚皮片的疗效观察

目的 探讨中厚供皮区创面回植自体刃厚皮片的临床疗效。方法 选择2004年1月～2007年4月43例各种原因致功能部位全层皮肤缺损行中厚皮移植的患者，按中厚供区处理方法分为A组（回植刃厚皮片组，20例）和B组（常规处理组，23例），对两组创面的愈合时间、感染情况及愈合后瘢痕形成等情况进行比较。结果A组平均愈合时间（11．2±3．2）d，创面感染1例，愈后瘢痕少；B组平均愈合时间（21．5±6．4）d，创面感染5例，愈后瘢痕明显。两组愈合时间比较有显著统计学意义（P〈0．01）。结论中厚供皮区回植自体刃厚皮片，可加速创面愈合，减少瘢痕形成。

游离腓动脉穿支皮瓣修复口腔颌面部缺损的临床应用

目的探讨应用游离腓动脉穿支皮瓣修复口腔颌面部缺损的方法及临床效果。方法回顾分析本科2014年6月-2016年3月我科采用游离腓动脉穿支皮瓣游离移植修复10例口腔颌面部恶性肿瘤术后缺损的病例资料,皮瓣切取面积为3.0cm×4.0cm-4.0cm×8.0cm。结果 10例皮瓣全部移植成活,无1例发生血管危象,术后效果满意,供区无明显后遗症。结论游离腓动脉穿支皮瓣血管解剖恒定,血运可靠,对供区影响小,皮瓣厚薄适中,制取简单、方便,是修复口腔颌面部肿瘤术后缺损的理想皮瓣。

hTERT基因转染人表皮干细胞的可行性研究

目的观察外源性人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因转染体外培养的人表皮干细胞的可行性。方法采用脂质体转染法,将质粒pIRES2-EGFP-hTERT转入体外培养的人表皮干细胞,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选与培养。应用RT-PCR法和Western blot法检测hTERT mRNA及其蛋白的表达。结果转染组hTERT mRNA及其蛋白的表达强于非转染组。结论外源性hTERT基因转染体外培养的人表皮干细胞具有可行性。

腘静脉瘤误诊1例

患者男．52岁．因“右髋疼痛8个月”于2014年11月4日入院。查体：患者无胸闷、气促、咯血等症状。体格检查：双肺呼吸音清，未闻及别针音，步态跛行，右下肢纵向叩击痛阳性，右髋关节“4”字试验阳性．

新型冠状病毒流行期间烧伤患者救治防控策略

2019年12月30日以来,以湖北省武汉市为主的城市陆续发现了多例新型冠状病毒感染的肺炎患者,随着疫情的逐渐蔓延,我国其他省市、地区及境外也相继发现了此类病例[1]。该病作为急性呼吸道传染病已纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病,按甲类传染病管理[1,2]。世界卫生组织宣布新型冠状病毒引起的疾病正式名称为:2019冠状病毒病(corona virus disease 2019,COVID-19)[3]。新型冠状病毒感染力强,疫情扩散快,在疫情爆发流行期间,如何安全、有效的对患者进行烧伤救治,并做好医护人员的防护,现结合本单位在目前疫情流行期间的防控经验,对烧伤患者诊疗工作提出如下管理建议,供参考。

分叶股前外侧穿支皮瓣修复踝关节周围大面积软组织缺损11例

目的:探讨分叶股前外侧穿支皮瓣(ALTPF)修复踝关节周围大面积软组织缺损的可行性及临床效果。方法:2019年6月至2022年10月,南昌大学第一附属医院骨科采用分叶ALTPF修复踝关节周围大面积软组织缺损11例,其中交通伤所致8例,重物砸伤3例。所有创面均宽大(15.0 cm×14.0 cm~30.0 cm×20.0 cm)且合并不同程度的感染。术中切取大小为16.0 cm×14.5 cm~23.0 cm×18.5 cm的分叶ALTPF修复缺损,深部死腔用抗生素骨水泥填充,供区直接缝合或植皮修复。分别于术后1、3、6个月及之后每半年通过门诊、电话等方式进行随访,记录皮瓣的外形、颜色及供区愈合情况,并根据美国足踝关节协会(AOFAS)踝-后足评分量表评价足踝部运动功能恢复情况。结果:11例皮瓣全部成活,受区术后未出现血肿和继发感染,供区一期愈合;1例分叶皮瓣远端发生静脉回流障碍,予以远端静脉放血1周后皮瓣完全成活。术后随访6~24(15.27±5.21)个月,所有皮瓣血运良好,外形满意,无明显臃肿,色泽、质地与受区相近,皮瓣无溃疡形成;皮瓣供区仅留线形瘢痕或少量片状植皮伤口,位置隐蔽;AOFAS踝-后足评分为(88.36±10.21)分,结果优6例,良4例,可1例。结论:分叶ALTPF可将皮瓣长度转变成皮瓣宽度,是踝关节周围大面积软组织缺损修复的一种良好方法。

胫骨钻孔及后期自体皮移植治疗大面积胫骨外露

目的探讨经骨表面钻孔及后期自体皮移植治疗大面积胫骨外露的方法。方法34例因各种原因使胫骨表面皮肤及软组织大面积缺损致胫骨大面积外露的患者,彻底清创后,在胫骨表面钻孔,肉芽组织覆盖外露骨面后行肉芽创面清创植自体皮术。结果34例患者均治愈,住院时间为2～5个月,平均住院时间3个月。结论在胫骨表面钻孔,后期植自体皮可治愈大面积胫骨外露。

皮瓣移植联合同种异体肌腱一期修复跟腱及周围软组织复合缺损

目的探讨皮瓣移植联合同种异体肌腱一期修复跟腱及其周围软组织复合缺损的手术方法和临床效果。方法自2018年7月至2022年8月,南昌大学第一附属医院骨科应用皮瓣移植联合同种异体肌腱一期修复跟腱及其周围软组织复合缺损12例,男9例,女3例,年龄8~56岁,平均31.5岁。跟腱缺损长4.0~9.0 cm,软组织缺损面积3.0 cm×4.0 cm~14.0 cm×6.0 cm,所有病例均应用同种异体肌腱移植修复跟腱缺损,行腓肠神经营养血管皮瓣6例,腓动脉穿支皮瓣3例,游离股前外侧皮瓣(ALTF)3例,皮瓣面积4.0 cm×4.5 cm~15.0 cm×7.0 cm,供区直接拉拢缝合或植皮覆盖。术后定期复查,出院后通过门诊、电话及微信定期随访,观察皮瓣成活、踝关节及跟腱功能恢复情况。结果随访3个月~2年,平均13个月。本组所有病例均未出现明显排斥反应。12例皮瓣全部成活,皮瓣颜色和质地与周围皮肤接近,供区和受区均无溃疡发生。无跟腱再次断裂病例,末次随访踝关节活动度为背伸(13.4±2.6)°,跖屈(33.6±3.2)°;依据美国矫形足踝外科协会(AOFAS)踝与后足功能评分标准评分为(88.7±5.6)分,其中优7例,良4例,可1例。结论对于跟腱及其周围软组织复合缺损的患者,应用皮瓣移植联合同种异体肌腱一期修复,疗效满意,创伤小,并发症少,是一种可行的修复方法。

游离股前外侧皮瓣在修复小腿GustiloⅢ型开放性骨折后皮肤软组织缺损中的应用

目的探讨游离股前外侧皮瓣对小腿Gustilom型开放性骨折后皮肤软组织缺损进行修复的临床疗效．方法2013年6月至2016年12月．对10例小腿Gustilom型开放性骨折后皮肤软组织缺损的患者．应用游离股前外侧皮瓣修复创面、蒂部血管运用端一侧吻合的方式进行治疗．其中胫前血管损伤6例，胫后血管损伤4例。股前外侧皮瓣切取后血管蒂部动脉行端-侧吻合、静脉行端一端吻合，皮瓣通血后血运良好，缝合覆盖创面。定期进行随访．随访内容包括皮瓣外观、色泽、肢体有无缺血。结果lO例皮瓣全部成活，其中1例出现静脉危象．经探查后皮瓣成活。2例因创面感染延迟愈合。10例患者均获随访。随访时间3～24个月，平均10个月。10例患者皮瓣厚薄适中．外形良好．质地柔软．色泽与受区皮肤相近。患肢外观、功能恢复满意。结论应用游离股前外侧皮瓣修复创面、蒂部血管运用端-侧吻合的方式是修复小腿Gustilo11I型开放性骨折后皮肤软组织缺损的有效手段。临床疗效确切。

游离腓动脉穿支皮瓣在四肢软组织缺损修复中的应用

随着工业和交通的发展,四肢软组织缺损是临床常见损伤类型,易导致肌腱、血管及骨外露,临床处理较棘手.穿支皮瓣是一种新的外科技术,由Koshima等[1]和Kroll等[2]首先报道.由于该种皮瓣以穿支血管为蒂,不牺牲知名主要血管,减少对供区的损伤,日渐受到重视[3-5].近年来,我们对腓动脉穿支为蒂的皮瓣血供进行深入研究的基础上,于2011年10月至2012年7月,将腓动脉穿支皮瓣游离移植用于修复手足部软组织缺损,疗效满意,现介绍如下.

桡骨骨膜瓣移植重建舟骨血运在舟骨骨不连手术中的应用

目的探讨应用桡骨骨膜瓣移植重建舟骨血运治疗腕舟骨骨不连的临床疗效。方法2013年3月至2014年12月采用克氏针或螺钉固定治疗腕舟骨骨不连28例，男16例，女12例；年龄19-33岁，平均26.2岁。腕舟骨腰部骨折骨不连25例，腕舟骨近端骨折骨不连3例。术中将以第1、2伸肌腱鞘之间分离出的桡动脉茎突返支为蒂的桡骨骨膜瓣横行镶嵌于骨折端，重建舟骨血运，然后以克氏针（15例）或Herbea螺钉（13例）固定。术后第1、2、3、6、12个月复查X线片，观察骨折愈合及腕关节功能恢复情况。结果28例均获得随访，随访时间5-12个月，平均8个月。克氏针固定和Herbea螺钉固定骨折均全部愈合，愈合时间为3-5个月，腕关节疼痛基本消失。腕关节功能参照改良Mayo腕关节评分：优21例、良5例、可2例，优良率93％（26／28）。克氏针固定组优良率93％（14／15）、Herbert螺钉组优良率92％（12／13），两组优良率差异无统计学意义（χ^2=0．011，P=0．916）。结论采用桡骨骨膜瓣移植重建舟骨血运及克氏针或Herbert螺钉固定治疗腕舟骨骨不连操作简便，可改善舟骨骨折端血供，促进骨不连愈合，术后近期疗效良好。

增生性瘢痕与正常皮肤微小RNA的差异表达谱分析

目的探讨人增生性瘢痕与正常皮肤组织的微小RNA（miRNA）表达谱差异。方法收集2010年11月至2011年5月南昌大学第一附属医院烧伤中心5例患者的增生性瘢痕及其邻近正常皮肤组织，采用Trizol法抽提总RNA，先用mirVana TM miRNA分离试剂盒对其进行纯化，然后使用微小RNA标记和杂交试剂盒进行荧光标记及芯片杂交，利用FeatureExtraction（v10．7）软件对杂交图片进行分析，再用GeneSpring（GXl0．0）软件进行数据归一化及差异分析，同时应用实时定量反转录聚合酶链反应（RT．PCR）方法验证miRNAs芯片结果的可靠性。结果筛选出在人增生性瘢痕中表达上调的基因92个，表达下调的基因13个。其中显著上调的基因有hsa-miR一564，hsa—miR-936等；显著下调的基因有hsa．miR-451，hsa．miR-223，hsa-miR-363，hsa—miR-29b一1}等。其中上调基因hsa-miR-21和下调基因hsa．miR-451miRNA的验证结果与检测结果具有较好的一致性。结论人增生性瘢痕和正常皮肤组织中存在明显的miRNA差异性表达，可能与增生性瘢痕的发生、发展及演化密切相关。

腓动脉穿支皮瓣修复儿童足跟部严重轮辐伤

目的探讨采用腓动脉穿支皮瓣修复儿童足跟部严重轮辐伤的手术方法及临床效果。方法自2014年7月至2017年9月．应用腓动脉穿支皮瓣修复儿童足跟部严重轮辐伤13例。男9例。女4例．年龄3～11岁，平均6．5岁。皮瓣切取面积10．0cm×3．5cm～14．5cm×5．0cm，供区直接拉拢缝合或植皮覆盖。术后定期门诊复查．观察皮瓣成活及关节功能恢复情况。结果12例皮瓣全部成活，其中1例皮瓣远端出现瘀紫，经拆除部分缝线后缓解，1例出现皮瓣远端部分坏死，经换药后愈合。患者术后随访3～20个月，平均13个月，皮瓣颜色和质地与周围皮肤接近．供区和受区均无溃疡发生，行走步态正常。结论腓动脉穿支皮瓣供区损伤小，皮瓣血供可靠．是修复儿童足踝部严重轮辐伤的较好方法。