枸杞多糖的分离纯化及其体外抗增殖和抗炎活性分析

研究不同枸杞(Lyciumbarbarum,Gouqi,GQ)多糖组分对苯甲酸雌二醇(Estradiol,E2)及黄体酮(Progesterone,P)联合诱导小鼠乳腺上皮细胞(HC11细胞)增殖的抑制作用的影响。通过水提醇沉及柱分离法获得不同组分;并对其分子量及体外抗增殖、抗炎症作用进行初步分析。结果显示,枸杞粗多糖通过DEAE-52离子色谱柱和Sephadex G-50凝胶柱洗脱出7种多糖组分,分别为GQ-01、GQ-02、GQ-03、GQ-04、GQ-05、GQ-06、GQ-07,其平均相对分子量分别为113 ku、<1 ku、367 ku、613 ku、81 ku、110 ku、<1 ku。选用不同浓度枸杞多糖(5、25、125、250、500、1000μg/mL)处理HC11细胞,发现250μg/mL(GQ-01、GQ-04及GQ-06)可显著抑制E2(25μg/mL)+P(250μg/mL)联合诱导的HC11细胞增殖活性,分别降低了28.13%、26.74%、30.83%(P<0.01);GQ-01及GQ-06可调节G0/G1与G2/M期转变而影响细胞周期的分布;与模型组相比,GQ-06可极显著抑制E2+P联合诱导雌激素受体(ERα)水平,降低了5.54%(P<0.01);GQ-04及GQ-06可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞的NO水平的产生,与模型组相比NO水平分别降低了13.43%、12.65%(P<0.05)。该研究表明,GQ-06可能通过影响细胞周期分布及抑制ERα的水平,从而抑制乳腺上皮细胞过度增殖;此外,还可抑制LPS诱导RAW364.7细胞中NO的释放,降低细胞的炎症反应。该研究将为功能性食品深度开发提供重要的理论依据。

稳定表达GFP-Parkin融合蛋白的SH-SY5Y细胞系的建立和功能初探

目的:建立稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系,并检测Parkin对MPP^+引起的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法:将Parkin编码序列克隆到载体pEGFP-C1中,构建重组质粒pEGFP-Parkin,转染SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,建立稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系;荧光显微镜和Western印迹鉴定Parkin表达,MTT法检测Parkin对MPP^+致细胞损伤的保护作用。结果:酶切鉴定及测序结果表明重组质粒pEGFP-Parkin构建正确;荧光显微镜下可见细胞内有GFP-Parkin的融合表达,Western印迹检测发现相对分子质量79×103的蛋白条带;MTT结果显示Parkin能够减弱MPP^+对SH-SY5Y细胞的损伤,与对照组相比,存活率高约15%,差异显著(P<0.05)。结论:构建了稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系,为进一步研究Parkin的细胞保护作用和其他功能机制奠定了基础。