两种抗凝管对部分凝血激活酶时间的影响

为分析探讨不同抗凝管对部分凝血激活酶时间(PTT)结果的影响,文章分别对两个厂家生产的抗凝管的管帽、管体和抗凝剂进行PTT试验。与空白或阴性对照组相比,2种抗凝管的管帽均对PTT无显著影响(P>0.05);抗凝管A的管体对PTT无显著影响(P>0.05),但抗凝管B的管体的PTT显著低于空白和阴性对照组(P<0.05);与空白对照组相比,2种抗凝管中的抗凝剂均对PTT无显著影响(P>0.05),但与阴性对照组相比,其PTT显著升高(P<0.05)。由此可知,影响抗凝管PTT结果的主要因素是抗凝管的管体部分。

肾小管上皮细胞表型转化在大鼠输尿管梗阻及再通中的意义

目的:探讨肾小管上皮细胞表型转化(EMT)在大鼠输尿管梗阻及再通中的意义。方法:将24只SD大鼠随机分成假手术组(Sham,n=3)与单侧输尿管梗阻组(UUO,n=9),双侧输尿管梗阻组(BUO,n=3)与双侧输尿管梗阻后再通组(RBUO,n=9)。HE和Masson染色观察肾间质纤维化程度,qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、钙粘附蛋白(E-cadherin)和紧密连接蛋白(ZO-1)mRNA的表达,免疫组织化学染色检测α-SMA和E-cadherin蛋白的表达。结果:HE和Masson染色显示,随梗阻时间延长肾纤维化病变加剧,再通后纤维化程度明显减轻;α-SMA和vimentin mRNA蛋白在梗阻肾中表达增高,但Ecadherin和ZO-1表达明显下降;输尿管再通后,α-SMA和vimentin mRNA或蛋白表达随再通时间延长而下调,但E-cadherin和ZO-1表达明显升高。结论:输尿管梗阻可促使肾小管上皮细胞出现EMT,形成肌成纤维细胞,最终导致纤维化发生;输尿管再通可有效缓解EMT和间质纤维化程度。

巨噬细胞亚型转变在大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中的作用

目的:探讨巨噬细胞在大鼠肾脏缺血/再灌注损伤过程中的亚型转变及意义。方法:将30只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham,n=6)和缺血/再灌组(IRI,夹闭肾动脉45 min,n=24)。IRI组分别于术后0、6、24和72 h取肾组织,每个时相组6只大鼠。用HE染色观察肾组织损伤程度;免疫组化染色检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达;实时定量RT-PCR检测巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的表达;免疫组织荧光染色检测MIF、单核巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及活化巨噬细胞标志物CD68的表达,流式细胞分析检测巨噬细胞M1和M2亚型的分布特征。结果:病理结果显示大鼠肾局部损伤情况和炎症细胞浸润程度在24 h时最为严重,之后逐渐恢复。PCNA在再灌后表达明显增加,6 h达峰值,72 h表达下降。相比于正常组,再灌组大鼠肾组织中MIF的rnRNA和蛋白表达明显升高;MCP-1表达则在6 h达峰值,随后下降;而CD68阳性的巨噬细胞数量明显增加,24 h达峰值,72 h表达下降。更进一步研究发现缺血/再灌注6 h时,M1亚型分布达最高值;之后随着缺血/再灌注时间延长,M1亚群相对含量开始下调,M2随之升高。结论:在肾脏缺血/再灌注早期,M1巨噬细胞介导的组织损伤发挥主要作用,随后M2型表达逐渐上调,并通过促进细胞增殖修复肾组织损伤。

垂盆草提取物对马兜铃酸致大鼠肾小管上皮细胞损伤的改善作用

目的研究马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞损伤的分子机制及垂盆草提取物(SSBE)对AA损伤的干预机制。方法将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E加入AA 1,5,10,50和100 mg·L-1;或AA 10 mg·L-1+SSBE 10,50,100,500和1000 mg·L-1,培养24 h后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测NRK-52E细胞凋亡;ELISA和免疫细胞荧光染色检测巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达;实时荧光定量RT-PCR和Western蛋白质印迹法检测凋亡相关基因c-Myc和p53 mRNA和蛋白的表达。结果随着AA浓度的增加,NRK-52E细胞损伤愈加明显。与正常对照组相比,AA 10和50 mg·kg-1诱导细胞凋亡,并促进了c-Myc和p53明显表达(P<0.05);AA 10和50 mg·kg-1损伤肾小管上皮细胞后,MIF的分泌和表达量明显增加(P<0.05)。与AA 10 mg·L-1组相比,SSBE 1000 mg·L-1不仅减轻了AA所致的损伤,而且明显下调了MIF的表达(P<0.05)。同时,SSBE1000 mg·L-1也明显抑制了c-Myc和p53的表达(P<0.05)。结论 AA损伤肾小管上皮细胞,诱导细胞凋亡,并促进MIF的表达,进而影响炎症应激反应过程中巨噬细胞的浸润和活化。SSBE的干预可明显降低AA所致的损伤,这可能与MIF的表达下调有关。

白藜芦醇调控猬信号对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)减轻输尿管梗阻诱导大鼠肾间质纤维化(RIF)的分子机制。方法将48只SD大鼠随机分为假手术组(n=16)、单侧输尿管梗阻(UUO)模型组(n=16)和模型+Res组(n=16)。模型+Res组于手术当天ig给予Res 20 mg·kg-1,每天1次,分别于梗阻术后第7和14天取其梗阻侧肾组织,用HE和Masson染色观察肾小管上皮细胞形态变化和RIF程度;ELISA检测肾组织中猬信号起始蛋白猬蛋白质(SHH)含量;免疫组织化学染色检测SHH,smoothened(Smo),patched-1(Ptch1)和Gli1、增殖细胞核抗原(PCNA)以及细胞外基质(ECM)成分Ⅲ型胶原蛋白表达;实时荧光定量PCR技术检测Smo,Ptch1和Gli1 mRNA的表达。结果 HE和Masson染色显示,UUO模型大鼠术后RIF程度随着梗阻时间延长而加重,Res治疗能减轻上述纤维化病变;免疫组织化学染色结果显示,与假手术组比较,UUO模型大鼠肾组织Ⅲ型胶原的表达显著升高(P<0.05),并且与细胞增殖相关的PCNA也明显高表达(P<0.05);Res治疗后Ⅲ型胶原和PCNA表达水平降低(P<0.05);UUO模型大鼠肾组织SHH,Smo和Gli1表达升高(P<0.05),Ptch1表达降低(P<0.05),且均可被Res逆转(P<0.05)。结论 Res可有效缓解输尿管梗阻所致的RIF,其机制可能为Res下调SHH信号活性,抑制细胞增殖,阻碍ECM成分合成,进而减轻其在肾间质的累积而改善纤维化。

Sonic hedgehog信号通路在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达变化及意义

目的:探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织中的表达变化及意义。方法:将48只SD大鼠随机分为UUO模型组(n=24)和假手术组(n=24),梗阻术3、7和14 d后取其梗阻侧肾脏组织。用HE和Masson染色检测肾间质纤维化程度,免疫组织化学染色检测Shh通路分子Shh、Ptch1、Smo、Gli1及Ⅲ型胶原的蛋白表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肾组织中TGF-β1和Shh含量,real-time RT-PCR检测TGF-β1、I和Ⅲ型胶原及Shh通路分子mRNA表达。结果:HE和Masson染色显示,梗阻侧肾组织出现明显的纤维化病变,且随时间延长而加剧。TGF-β1、I和Ⅲ型胶原含量在梗阻肾中表达明显增高(P<0.05)。同时,Shh信号通路分子Shh、Smo和Gli mRNA和蛋白在梗阻肾中表达明显升高(P<0.05),而Ptch1 mRNA和蛋白的表达下调(P<0.01),提示Shh信号被激活。相关分析表明,Shh信号起始信号Shh水平的升高与TGF-β1含量增加呈明显的相关。结论:UUO大鼠诱导肾间质纤维化发生过程中,Shh信号通路分子被激活,推测可能的机制是活化的Shh信号通路诱导TGF-β1表达和释放,导致肾间质纤维化。

马兜铃酸诱导大鼠肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积及垂盆草提取物的作用

目的:研究垂盆草(SSB)提取物对马兜铃酸(AA)诱导的肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积的作用,并初步探讨可能的分子机制。方法:将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为:(1)溶剂对照组:未加入SSB和AA;(2)AA损伤组:只加AA,浓度为1~100 mg/L;(3)SSB提取物干预组:在加入10 mg/L AA基础上,同时加入SSB提取物(10~2 000 mg/L)。细胞培养24 h后,酶联免疫吸附试验检测转化生长因子β1(TGF-β1)含量;细胞免疫荧光染色检测肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮细胞标志物E-cadherin和基质成分III型胶原的表达;实时荧光定量PCR检测α-SMA、E-cadherin、骨形成蛋白7(BMP-7)和I型胶原mRNA的表达。结果:AA可诱导NRK-52E细胞呈现纤维化样改变;1 mg/L和10 mg/L AA不仅可增加基质成分I型和III型胶原的表达量,同时也可促进α-SMA表达,抑制E-cadherin的表达。用SSB提取物干预后,AA所致的纤维化改变明显减轻;SSB提取物下调了α-SMA、I型和III型胶原的表达,并且促进E-cadherin和BMP-7的表达。此外,SSB提取物也抑制TGF-β1的分泌,并呈浓度依赖性。结论:应用SSB提取物干预可明显降低AA所致的肾纤维化效应,可能的机制为SSB提取物降低TGF-β1的表达,抑制小管上皮细胞的表型转化,进而抑制胶原的累积。

垂盆草提取物对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化和基质累积的影响

目的:探讨垂盆草提取物(SSBE)对转化生长因子(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(EMT)和基质累积的影响。方法:将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞系(NRK-52E)细胞分为只加入溶剂的对照组,只加入TGF-β1(浓度为5μg/L)的诱导组,以及加入SSBE(浓度为10和100 mg/L)和TGF-β1(浓度为5μg/L)的干预组。细胞形态变化采用倒置相差显微镜观察;细胞免疫荧光染色检测III型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;反转录聚合酶链反应检测α-SMA、骨形成蛋白-7(BMP-7)、紧密连接蛋白(Tjp1)、I型胶原(Col1a1)、III型胶原(Col3a1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和抑制因子-2(TIMP-2)m RNA的表达。结果:TGF-β1作用后,NRK-52E细胞形态发生变化,形成了长梭状的肌成纤维细胞(MFs);其上皮标志物E-cadherin和Tjp1的表达水平显著下降,而MFs标志物α-SMA表达显著增加;基质成分Col1a1和Col3a1的表达也明显增高。应用10和100 mg/L的SSBE干预后,抑制了TGF-β1诱导的细胞形态改变和α-SMA、Col1a1和Col3a1的高表达,并促进E-cadherin和Tjp1的表达。另外,SSBE也提高了BMP-7表达水平和MMP-2/TIMP-2比值。结论:SSBE可抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化样改变,而这一作用与其能有效阻止EMT进程和基质累积有关。

环杷明对马兜铃酸诱导的肾上皮细胞表型转化及Hedgehog通路的影响

目的:探讨环杷明干预Hedgehog(HH)信号对马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞表型转化和基质累积的影响。方法:根据干预措施将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为溶剂对照组、AA损伤组(分别用终浓度为1、5和10 mg/L的AA处理细胞)和环杷明干预组(10 mg/L AA基础上加入1、5和10μmol/L环杷明)。细胞培养24 h后,用real-time PCR检测HH信号关键分子Ptch1和Smo、表型转化相关分子α-SMA和E-cadherin、ZO-1、BMP-7和基质成分I型和III型胶原mRNA的表达;ELISA法检测Shh和TGF-β1的含量;细胞免疫荧光染色检测Ptch1、Smo、E-cadherin、α-SMA和III型胶原蛋白表达。结果:AA不仅增加了TGF-β1、α-SMA和III型胶原的表达,降低了E-cadherin和ZO-1的表达,而且诱导了Shh和Smo mRNA表达的升高和Ptch1 mRNA表达的下降,提示AA促进小管上皮细胞表型转化和胶原累积,同时也激活了HH信号通路。环杷明干预AA作用后,Smo mRNA或蛋白表达下调,Ptch1 mRNA表达升高,这说明环杷明抑制了AA诱导的HH信号通路的活化。此外,环杷明也降低TGF-β1、α-SMA、I型和III型胶原的表达,提高BMP-7、ZO-1和E-cadherin的表达,这提示环杷明抑制了AA所致的上皮细胞的表型转化和基质累积。结论:环杷明可抑制AA所致的肾小管上皮细胞表型转化和基质累积,可能是通过靶向抑制HH信号的活化来实现的。

小G蛋白Rac1在马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用及意义

目的 :探讨马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞损伤的机制及小G蛋白Rac1在此过程中发挥的作用。方法:以溶剂作为对照组,AA以浓度10μg/mL作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,培养24 h后,WST-1法检测细胞增殖的抑制率;Hoechst 33258染色观察细胞核的形态变化;细胞免疫荧光染色检测Ⅲ型胶原和Rac1蛋白的表达;real-time RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Rac1和TGF-β1含量,并分析两者相关性。结果:AA可明显抑制NRK-52E细胞增殖,并诱导细胞凋亡。AA以10μg/mL处理NRK-52E细胞24 h后,TGF-β1 mRNA的表达明显升高(P<0.05),并且细胞外基质成分Ⅲ型胶原的表达明显增加(P<0.05)。此外,AA也可诱导小G蛋白Rac1的表达(P<0.05)。相关分析显示,AA诱导NRK-52E细胞损伤过程中,Rac1的表达量与TGF-β1的分泌水平呈现明显正相关(r=0.967,P<0.01)。结论:AA诱导肾小管上皮细胞出现纤维化样改变,同时伴有Rac1蛋白的高表达;Rac1及其介导的信号通路可能被TGF-β1的高表达所活化,进而参与AA所致的胶原累积过程。

白藜芦醇对TGF-β1介导的肾小管上皮细胞表型转化和Hedgehog信号的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK-52E)表型转化(EMT)的影响及其分子机制。方法体外培养肾小管上皮细胞,分为对照组、诱导组(TGF-β1:5μg/L)、干预1组(TGF-β1+Res10μmol/ml)和干预2组(TGF-β1+Res100μmol/ml)。采用细胞免疫荧光和qRT-PCR技术检测EMT、细胞外基质和Hedgehog信号相关分子表达水平。结果 TGF-β1作用NRK-52E细胞后,不仅促进其受体TGF-β1R表达(P<0.05),且肌成纤维细胞标志物(α-SMA)和基质成分Ⅲ型胶原的表达增加,上皮细胞标志物(E-cadherin)表达下降。应用Res干预后,不仅抑制甚至逆转了上述结果,且抑制了TGF-β1介导的MMP-2/TIMP-2比值下降(P<0.05),促进基质成分降解。此外,Res也抑制TGF-β1诱导的PCNA表达上调(P<0 05),以及增殖相关的Hedgehog信号(Shh、Ptch1和Gli 1)活化(P<0.05)。结论 Res可能通过拮抗Hedgehog信号来抑制TGF-β1所诱导的NRK-52E细胞增殖、EMT和细胞外基质累积。

干预Hedgehog信号对肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的:探讨Hedgehog(HH)信号通路的活化和抑制对肾小管上皮细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:根据干预措施将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为对照组、活化组(10μg/L Shh)和干预组(10μg/L Shh加5μmol/L环杷明)。细胞培养24 h后,细胞免疫荧光染色检测HH信号关键分子Ptch1、Smo和Gli1,以及细胞增殖标志物PCNA的表达,real-time RT-PCR检测Ptch1和Smo m RNA的表达。结果:免疫荧光染色显示,对照组细胞维持一定的增殖状态,HH信号活性较低,PCNA表达水平较低;当外源性重组蛋白Shh活化NRK-52E细胞24 h后,Smo和Gli1 m RNA和蛋白表达显著升高,Ptch1的表达显著下调,这提示Shh可激活HH信号(P<0.05)。在此过程中,PCNA表达水平显著升高,NRK-52E细胞数量增加,同时伴随细胞形态的改变;在Shh的基础上加入环杷明干预后,HH信号被抑制(P<0.05),PCNA表达下降,NRK-52E细胞增殖被抑制,出现凋亡或坏死。结论:HH信号与肾小管上皮细胞的增殖密切相关。通过药物调控HH信号的活化,可影响PCNA的表达,进而影响细胞增殖效应。

输尿管梗阻及再通大鼠肾组织中单核-巨噬细胞相关因子动态表达

目的探讨输尿管梗阻及再通大鼠肾间质纤维化发生和恢复过程中单核-巨噬细胞相关因子的动态表达。方法将48只SD大鼠随机分成梗阻和再通两个实验部分,梗阻部分分为假手术组(sham,n=6)、单侧输尿管梗阻(UUO)3d(n=6)、UUO 7d(n=6)和UUO 14d(n=6);再通部分分为双侧输尿管梗阻(RBUO)0d(n=6)、RBUO后再通3d(n=6)、RBUO后再通7d(n=6)和RBUO后再通14d(n=6)。术后3、7和14 d后处死取其肾脏组织。采用HE和Masson染色观察肾组织病理改变和间质纤维化程度;免疫组织化学染色检测肾组织内单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞克隆刺激因子(M-CSF)和活化巨噬细胞标志物CD68的表达水平;Real-time PCR检测MCP-1和M-CSF mRNA表达水平;ELISA测定TGF-β1含量。结果与Sham大鼠相比,UUO大鼠随着梗阻时间延长,纤维化程度加剧。同时TGF-β1水平明显升高。输尿管再通后,纤维化程度随时间延长明显减轻,且TGF-β1水平明显下调。UUO大鼠肾组织中,MCP-1和M-CSF mRNA和表达蛋白随梗阻时间延长而增加;梗阻再通后,MCP-1和M-CSF mRNA和蛋白表达随再通时间延长持续下降。MCP-1和M-CSF在UUO或再通大鼠肾组织中的表达与CD68呈现一致性变化趋势。结论输尿管梗阻后,M-CSF和MCP-1的动态表达反映单核-巨噬细胞的活化和聚集状态,这可能是间质纤维化发生十分重要的炎症基础。而输尿管再通可抑制活化和趋化的单核-巨噬细胞,控制炎症反应,缓解肾间质纤维化。

高频超声与X线在新生儿坏死性小肠结肠炎分期诊断中价值比较

目的比较高频超声与X线在新生儿坏死性小肠结肠炎分期诊断中的价值。方法选取2022年2月—2023年2月威海市中心医院新生儿科收治的80例患儿作为研究对象,依据患儿临床表现、实验室和影像学检查确诊患儿是否存在坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC),对不同阶段NEC患儿的高频超声与X线影像学特征及检出率进行对比,并比较高频超声与X线诊断不同分期NEC阳性率。结果80例患儿按照Bell’s分期标准,Bell分期I期、Ⅱ期、Ⅲ期患儿分别为25、37、18例。高频超声对肠壁水肿、增厚、腹腔积液、局部穿孔征象具备更高的检出率,而X线对肠管充气扩张及充气分布不均具备更高的检出率(P<0.05)。高频超声与X线检查对肠壁积气、门静脉积气、肠袢固定或持续扩张、气腹等检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高频超声诊断NEC阳性率为88.75%,X线诊断NEC阳性率为76.25%,一致性检验结果Kappa值为0.82,二者对NEC的诊断均有较高的一致性(P<0.05)。NECI期、Ⅱ期、Ⅲ期高频超声诊断阳性率分别为79.48%、84.37%、88.89%,NECI期、Ⅱ期、Ⅲ期X线超声诊断阳性率分别为84.61%、75.0%、55.56%。高频超声与X线I期与Ⅱ期诊断阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),Ⅲ期二者间比较,超声诊断阳性率高于X线(P<0.05)。结论高频超声对NEC具备更高的诊断价值,但将高频超声与X线联合应用能够弥补单一检测方式的不足,值得进一步应用。

TGF-β1对话Hedgehog-Gli1信号调控肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积

该研究旨在探讨Hedgehog-Gli1（HH）信号在肾小管上皮细胞表型转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）和胶原累积中的作用及与TGF-β1信号的对话机制。该实验通过体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以溶剂作为对照组,以1～50 ng/m L重组蛋白sonic hedgehog（Shh）或5 ng/m L TGF-β1作为诱导组,以加入或不加入HH信号特异性阻断剂环靶明（cyclopamine,Cyp）5μmol/L为干预组。细胞培养24 h,采用ELISA、q RT-PCR、免疫细胞荧光染色和Western blot等方法检测HH信号相关分子（Ptch1、Smo和Gli1）、TGF-β1、EMT相关分子（Rac1蛋白、肌成纤维细胞标志物α-SMA和上皮细胞标志物E-cadherin）、III型胶原m RNA或蛋白的表达。结果发现,外源性Shh上调Smo和Gli1表达,抑制Ptch1表达,继而激活HH信号;HH信号活化抑制肾小管上皮细胞E-cadherin的表达,上调α-SMA、III型胶原和TGF-β1的表达。环靶明干预后,Smo表达下调,进而抑制HH信号、EMT和胶原累积,并下调TGF-β1的表达。应用TGF-β1诱导小管上皮细胞EMT,同时也上调HH信号分子Smo和Gli1的表达,下调Ptch1的表达,提示TGF-β1可诱导HH信号活化。综上所述,HH信号和TGF-β1均参与了肾小管上皮细胞EMT和胶原累积过程。HH信号活化可促进TGF-β1的表达,同时TGF-β1能激活HH信号,推测TGF-β1与HH信号可能存在交叉对话以调控EMT和胶原累积。