Bag3 P215L基因突变小鼠的繁殖与基因型鉴定

BAG3是一种多功能蛋白,在多种疾病的发生发展中起决定性作用.临床研究表明,BAG3蛋白的第209位残基脯氨酸到亮氨酸p. Pro209Leu (c. 626C > T)的杂合子突变能够引起一种罕见的肌原纤维肌病.为进一步研究BAG3 P209L突变引起的相关疾病,建立了Bag3 P215L突变的小鼠模型(小鼠的Bag3蛋白序列中对应突变的脯氨酸位于第215位残基上).将Bag3 P215L杂合突变的雄鼠和雌鼠进行繁殖交配,将得到纯合子、杂合子及野生型3种基因型小鼠.出生后3~4周龄的小鼠剪尾,采用了NaOH法、KCl法和改良SDS法共3种方法提取基因组DNA,然后进行PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳和DNA测序.用改良SDS法能更为稳定有效地提取DNA,从而成功进行Bag3 P215L小鼠的繁育和基因型鉴定.为进一步研究BAG3 P209L突变引起的相关疾病提供了理想的动物模型.

Spexin转基因小鼠的构建及表型初步分析

Spexin是一种具有多种生物学功能的神经肽,在代谢疾病及神经系统疾病中发挥重要作用.为了深入研究spexin的生理功能和相关机制,构建了spexin转基因小鼠,通过检测血液中spexin含量以及糖耐受实验,对模型小鼠进行了初步的表型分析.利用piggyBac(PB)转座子技术培育spexin转基因小鼠,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别在基因层面和蛋白层面验证了模型动物是否构建成功.之后用饲喂高脂饲料的雄性小鼠进行糖耐受实验,对转基因模型小鼠进行表型分析.PCR结果显示,以靶向spexin的两对引物扩增,转基因型小鼠基因组DNA中能分别扩增出300 bp和301 bp的片段,而野生型小鼠则不能.ELISA结果中,转基因型小鼠血清中spexin含量较野生型小鼠显著升高;同一表型中,雌雄小鼠间血清中spexin水平无明显差异.饲喂高脂饲料85 d内,转基因型小鼠和野生型小鼠体重变化未观察到显著差异;糖耐受结果显示,转基因型小鼠每个时间点血糖浓度均低于野生型小鼠,且在15 min时具有显著性差异.结果显示成功构建了过表达spexin基因的小鼠模型.spexin表达水平的升高在一定程度上提高了C57BL/6小鼠的糖耐受能力.该模型为进一步研究spexin基因在动物体内的功能以及在代谢疾病发病机制中的作用奠定了基础.

应激大鼠模型结肠组织中spexin 的表达变化及代谢物质研究

分别通过避水应激(WAS)和母婴分离(NMS)的方法建立应激大鼠模型,观察大鼠粪便颗粒数以评价肠道运动的变化情况,通过实时荧光定量PCR检测大鼠结肠中spexin以及其受体GALR2的表达变化.同时通过UPLC/MS对结肠组织进行代谢组学检测,PLS-DA结合FDR统计分析筛选代谢差异物,与标准品的MS/MS碎片轮廓进行比对鉴定代谢物,通过MSEA分析代谢物相关通路的变化.结果发现WAS和NMS应激反应均可引起大鼠排便颗粒数显著增加,表明其肠道运动有所加强.定量PCR结果显示,应激反应可引起大鼠近端结肠和远端结肠部位spexin基因表达增高,同时增加近端结肠部位GALR2受体的表达,而远端结肠中GALR2表达变化不显著.通过对大鼠结肠组织中代谢组学分析发现,孕酮(progesterone)、亚油酸(Linoleic acid)、胆碱(Choline)、次黄嘌呤(Hypoxanthine)等脂类代谢产物在应激状态下均表现出显著变化.可见应激状态下大鼠结肠部位spexin、GALR2以及相关代谢产物均发生显著变化.结合前期研究结果推测,spexin及GALR2或代谢物的变化或与应激后肠道运动的变化密切相关.实验结果为进一步研究应激相关疾病的发病机理提供科学依据.后期进一步研究spexin与代谢产物之间的关联性可深入阐明其相关机制.

基于Web of Science甘丙肽受体的研究态势分析

基于Web of Science核心数据库的检索结果,采用文献计量学方法,利用Histcite和Citespace软件对国际上1999—2018年甘丙肽受体研究领域进行计量学统计和可视化分析.结果表明,近20年来甘丙肽受体研究的相关论文共计627篇,分别刊载在241种期刊上,共分为23个研究方向,作者为2 033人次,文献来源覆盖40个国家/地区,共计526个研究机构参与该领域的研究,每年的文献发表数量处于平稳增长的趋势,引用频次在近20年内逐年增加.研究热点主要集中在神经科学神经病学、分泌学与新陈代谢研究、生物化学分子生物学、药理学与药剂学等方面,以及其作用机制和中枢神经系统的疾病如神经性疼痛、癫痫和焦虑等的治疗,并探索受体的配体、激动剂和拮抗剂的结构和作用,以便更加深入地了解甘丙肽受体在机体内的生理学、信号传导和药理学特性.

甘丙肽受体2基因敲除小鼠的饲养繁育及基因型鉴定

目的饲养和繁育甘丙肽受体2基因敲除小鼠,对小鼠基因型进行分析和鉴定,并验证检测方法的适用性。方法将引进的GalR2基因敲除杂合子雄性小鼠和野生型雌性小鼠以1∶2的比例,或杂合子雌性小鼠和野生型雄性小鼠以2∶1的比例进行交配繁殖,获得的F1代杂合子小鼠进行同胞交配,获得F2代纯合子、杂合子和野生型小鼠。小鼠为2周龄时将其鼠尾剪取2~5 mm以获取组织DNA,使用PCR对目的基因片段进行扩增,并使用琼脂糖凝胶电泳法对基因型结果进行判定。结果GalR2基因敲除小鼠能够稳定繁育,并获得了一批基因敲除小鼠。F1代杂合子小鼠交配获得了3种基因型小鼠:纯合子(GalR2^(-/-)),杂合子(GalR2^(+/-))及野生型(GalR2^(+/+)),使用PCR法鉴定出小鼠的基因型。结论使用科学的繁育方式,以及通过PCR法进行基因型鉴定可以获得甘丙肽受体2基因敲除小鼠。

基于麻子仁丸治疗功能性便秘复方研究的整合医学模式探讨

基于循证证据是中医药融入整合医学体系中且被广泛使用的前提,以麻子仁丸研究为例,从文献、临床、临床基础等方面对麻子仁丸治疗功能性便秘进行研究,阐述了麻子仁丸治疗功能性便秘的疗效和作用机制,为麻子仁丸作为功能性便秘的临床治疗推荐药物之一奠定基础,并依此提出"文献-临床-临床基础"相结合的中药复方整合医学研究探索模式。