副猪嗜血杆菌和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫分子表达的影响

副猪嗜血杆菌(Hps)是猪上呼吸道常见条件致病菌之一,在临床上Hps和圆环病毒2型(PCV2)混合感染加剧了断奶仔猪多系统衰竭综合征的症状。为探讨Hps和PCV2共感染的致病机制,本试验建立了体外Hps和PCV2共感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)的模型,分别检测感染12、24 h和36 h后的PAM细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-4和IL-10)、猪白细胞抗原(SLA)分子SLA-DR、SLA-DM以及共刺激分子CD 80和CD 86的mRNA转录水平,以探讨其动态变化规律。结果显示,与单一感染相比,Hps和PCV2共感染的PAM在感染24 h内,IL-1β和TNF-α表达水平显著上升(P<0.05),而IL-4和IL-10表达显著下降(P<0.05);在感染36 h内,CD 80、CD 86及SLA-DM、SLA-DR的表达水平显著下降(P<0.05)。结果表明,Hps和PCV2共感染增进了PAM促炎症因子表达,抑制了PAM抑炎因子表达及外源性抗原加工和递呈相关分子表达,从而消弱了其免疫功能。

载副猪嗜血杆菌PLGA Omp16蛋白微球的制备及其免疫效果的初步研究

为研究载副猪嗜血杆菌(H.parasuis)外膜蛋白Omp16 PLGA微球的生物学特性,本研究以H.parasuis外膜蛋白Omp16为芯材,聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为壁材,通过复乳溶剂挥发法制备PLGA微球疫苗。通过扫描电镜测定微球的形态、激光粒径仪测定微球的粒径分布。结果显示,PLGA微球呈球性,表面圆整,粒径分布较窄,平均粒径为5.2μm;采用BCA法测定微球的包封率和载药率,结果显示,微球的包封率为70.5%,载药率为5.78%;以透析释药法测定微球的体外释放特性,结果显示,微球体外释放42 d累计释放抗原95.3%。用该微球0.2 mg/次,免疫小鼠二次(间隔14 d)后,采用ELISA法测定小鼠抗H.parasuis IgG水平,结果显示,微球佐剂组小鼠H.parasuis IgG抗体水平显著高于灭活疫苗组(p<0.01);腹腔注射H.parasuis LY02株(血清5型)进行攻毒保护试验,结果显示,微球佐剂组小鼠攻毒保护率(81.8%)显著高于灭活疫苗组(63.6%)(p<0.05)。以上试验结果表明,制备的PLGA微球具有良好的缓释性能,能增强小鼠体液免疫应答,提高H.parasuis攻毒保护率。本研究为H.parasuis亚单位微球疫苗的制备奠定基础。