产琼胶酶菌株Agarivorans sp.FG15的筛选鉴定与酶学性质

从中国南海热带海洋环境中分离纯化出产琼胶酶菌株FG15,并以16S rDNA进行分子鉴定,分析其酶学性质.FG15为革兰氏阴性球菌,对硫酸链霉素,氨苄青霉素,羧苄青霉素和氯霉素都不敏感.通过16S rDNA序列分析和BLAST同源性比对发现：FG15菌株的16S rDNA序列与船蛆杆菌（Teredinibacter turnerae）,噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）对应序列同源性最高,为95％.利用MEGA 5.0软件构建系统发育树,FG15与噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）亲缘关系最近,同源性高达99％.因此,可以初步鉴定FG15为噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）.酶学性质的研究表明：FG15所产琼胶酶的最适温度为36℃,在20～45℃之间热稳定性较好;最适pH为7.5,在pH7.0～8.0之间酸碱稳定性较好;产酶主要为胞外酶;琼脂酶的动力学参数米氏常数Km为4.978mg/mL,最大反应速率Vmax为10.33μmol/（L· min）.

琼胶降解菌产酶条件优化、酶学性质和糖代谢途径

为确定热带海洋环境中琼胶降解菌的最佳产酶条件和最适培养条件,提高其产酶能力,采用3,5-二硝基水杨酸（3,5-Dinitrosalicylic acid,DNS）比色法测酶活,研究其酶学性质并利用高通量测序获得其参加糖代谢的酶。单因素和多因素研究结果表明：FG12的最佳产酶条件为1%蛋白胨、0.8%琼脂、0.02%K2HPO4、pH 7.5、28℃;最适培养条件为0.8%琼脂粉、0.5%蛋白胨、pH 6.8。优化后的酶活达到739.58 U/mL,比优化前提高了273.49%。琼胶酶的最适温度为36℃,在36~55℃之间的热稳定性很好;最适pH值为7.5,在pH为6.5~7.5时,酸碱稳定性较好。高通量测序的代谢图中,FG12中含有多种不同数量的酶参与糖代谢,能通过基因改造提高酶产量。因此,FG12是一株高效琼胶降解菌,为潜在的工程菌。

产琼胶酶菌株发酵条件优化及酶学特性

为提高产琼胶酶菌株的产酶能力，优化其发酵条件，并研究其酶学特性。通过单因素试验和正交试验确定最佳发酵条件为：酵母粉浓度0．3％，琼脂浓度1．2％，培养基起始pH8，28℃，K2HPO4 0．02％，CaCl20．02％。优化后的酶活高达576．25U／mL，为优化前的2．05倍。酵母粉浓度，琼脂浓度和pH3个因子之中，pH对酶活的影响最大，酵母粉浓度的影响最小。酶学特性的研究表明：FG15的琼胶酶最适pH为7．5，在pH为6．5～8时酸碱稳定性较好；最适温度为36℃，在20℃-45℃热稳定性较好。该菌株产酶能力强，具有良好的稳定性，是生产琼胶寡糖潜在的优势菌。