LC-MS/MS法测定人血浆中沙丙蝶呤的浓度

目的:建立LC-MS/MS法测定人血浆中沙丙蝶呤的浓度。方法:经抗氧化剂(抗坏血酸,VC)预处理过的血浆样品,通过甲醇蛋白沉淀等一系列操作后进行LC-MS/MS分析。以沙丙蝶呤-^(13)C ^(15)N3为内标,使用的色谱柱为Kinetex■EVO C_(18)100A(4.6 mm×100 mm,5μm),流动相为含0.1%1 mol·L_(-1)乙酸铵的水溶液-乙腈(93∶7,v/v),等度洗脱分离,柱温为30℃,流速为0.6 mL·min_(-1),进样量为15μL。质谱检测采用电喷雾离子源(ESI),正离子多反应监测(MRM)模式扫描分析。沙丙蝶呤和沙丙蝶呤-^(13)C^(15)N_(3)的目标离子对分别为m/z 242.3→166.1和m/z 246.1→170.2。结果:沙丙蝶呤血药浓度在1~300 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好;质控样本批内精密度(RSD)在1.2%~4.7%,批间精密度(RSD)在1.5%~4.3%;沙丙蝶呤的平均提取回收率为98.0%~101.2%;无明显空白血浆基质效应,不影响待测物的定量分析;血浆样本稳定性符合接受标准;制备后样本稳定性符合接受标准;方法重现性良好;浓度超出定量上限的血浆样本经空白血浆稀释5倍后可以准确测定。结论:本方法能够快速、简便、准确地测定人血浆中沙丙蝶呤的浓度。该方法经验证后,成功用于沙丙蝶呤临床样本的血药浓度的检测。