TAT-SOD脂质体对UC模型大鼠的口服治疗作用

氧化应激是造成溃疡性结肠炎(UC)的重要原因之一,而超氧化物歧化酶(SOD)是调控氧化应激的基本分子。为了探究TAT-SOD脂质体对UC模型大鼠的口服治疗作用,作者利用乙醇沉淀和大孔树脂分离的方法,从基因重组毕赤酵母菌发酵液中分离纯化TAT-SOD;利用TritonX-114相分离法,去除其细菌内毒素;利用逆向蒸发法,制备TAT-SOD脂质体;利用DSS诱导构建UC模型大鼠,经灌胃给药,通过DAI评分、结肠密度、组织切片、血清SOD酶活、血清脂多糖含量,评价其治疗效果。结果表明:初步分离获得TAT-SOD,比活为11 003 U/mg;TritonX-114对内毒素的去除率为99.30%;成功制备TAT-SOD脂质体,经体外模拟消化液处理,其酶活回收率为81.80%;动物实验中,SOD给药组与模型组相比,DAI评分均显著降低(P<0.05),且TAT-SOD脂质体组的评分最好;结肠密度和组织切片观察发现,结肠组织损伤情况均明显改善,且TAT-SOD脂质体组的改善最好;血清中SOD酶活均显著提高(P<0.05),且TATSOD脂质体组的酶活最高;血清中LPS含量无显著差异。这些表明,TAT-SOD脂质体对DSS诱导UC模型大鼠有良好的口服治疗效果,有望为UC的辅助治疗提供新的选择。

发酵果汁胶原蛋白饮料的研制及其活性研究

文章以胶原蛋白肽为原料,添加发酵果汁和辅料,研制口味良好、功能多样的胶原蛋白饮料。结果表明:⑴以发酵木瓜/复合莓果汁作为饮料的基础口感最好,其中:糖酸比分别为38∶1和18∶1;胶原蛋白肽含量皆为6.0%。⑵添加发酵木瓜/复合莓果汁有助于抗氧化活性的增加,其顺序为:K发酵复合莓果汁胶原蛋白饮料>K发酵木瓜果汁胶原蛋白饮料>K胶原蛋白肽。⑶发酵木瓜/复合莓果汁的添加有助于胶原蛋白肽的降解消化,体外消化率顺序为:D发酵木瓜果汁胶原蛋白饮料≈D发酵复合莓果汁胶原蛋白饮料≥D胶原蛋白肽。⑷胶原蛋白饮料皆能显著提高小鼠的抗疲劳能力(p<0.05),其顺序为:F发酵复合莓果汁胶原蛋白饮料>F发酵木瓜果汁胶原蛋白饮料>50%。所研制的2款胶原蛋白饮料具有口感好、生物活性功能多样的特点,可望为市场所接受。

人Cu,Zn-SOD在重组毕赤酵母中表达的发酵工艺研究

以表达人Cu,Zn-SOD的重组毕赤酵母为出发菌株,通过摇瓶实验研究发酵初始pH值、诱导剂浓度、诱导温度和培养基组成等因素对目的蛋白表达水平的影响.实验结果表明,培养基组分对目的蛋白表达水平的影响最大.与YPG培养基相比,菌株在FM22培养基(含0.15%组氨酸及PTM4)中目的蛋白表达量提高5.5倍.在优化摇瓶发酵条件下(诱导剂浓度1%,诱导温度27℃,FM22培养基(含0.15%组氨酸及PTM4),初始pH值为6.0),发酵液上清酶活水平为895 U/mL,较初始提高8.5倍;以摇瓶实验结果指导5 L罐发酵,得到13 539 U/mL酶活,为摇瓶试验的15倍.

胶原蛋白与胶原蛋白肽的抗氧化关系初探

胶原蛋白的抗氧化活性尚未见报道,而其水解产物胶原蛋白肽的抗氧化活性报道较多。为研究造成该差异性的原因,分别采用T-AOC法、盐酸羟胺法、DPPH法和ABTS法测定胶原蛋白模拟肽、胶原蛋白肽混合物及其组成氨基酸脯氨酸和甘氨酸的抗氧化活性,并用圆二色光谱法测定CMP和CP的二级结构。试验结果表明:(1)T-AOC法中,CMP,CP和各种氨基酸都不具有抗氧化活性;(2)在盐酸羟胺法中,只有CP具有抗氧化活性;(3)在DPPH法和ABTS法中,肽和氨基酸都具有一定的抗氧化活性,且抗氧化顺序为CP>Hypro>CMP≥Pro>Gly;(4)圆二色光谱法结果表明,CMP具有胶原蛋白形成稳定的3股螺旋结构所必须的α-螺旋,而CP的α-螺旋结构不明显。这些结果提示:(1)胶原蛋白本身稳定的3股螺旋结构可能是其抗氧化活性不明显的原因,而胶原蛋白肽的抗氧化活性的发挥有赖于肽键对氨基酸残基的连接作用以及氨基酸侧链对自由基的易接近性;(2)不同抗氧化测定方法对胶原蛋白肽相关分子的表征效果不同,其中DPPH法和ABTS法的灵敏度相对较高。

环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究

采用基因工程方法,实现了cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并与大肠杆菌BL21(DE3)表达做对比.结果表明,毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,且荧光强度为前者的3倍.同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应的灵敏性高于大肠杆菌表达的cpYFP.这些结果表明,毕赤酵母表达体系可作为制备重组cpYFP的良好体系,也为cpYFP在自由基生物学领域的广泛应用提供充足的原料来源.

肝素对鲎试剂检测内毒素的干扰机制: 钙/镁离子螯合和内毒素结合作用

目的 肝素作为抗凝药物,常用于临床存储血液样品中;而对肝素化血液作内毒素检测时,发现肝素对鲎试剂有干扰。方法 测定鲎试剂的蛋白组成和离子浓度、内毒素粒径及其与肝素的分子相互作用。结果 肝素浓度≥0. 500 mg/ml时,明显抑制鲎试剂对内毒素的检测,且鲎试剂酶促反应生成的凝固蛋白显著减少;加入肝素的鲎试剂中Ca^(2+)、Mg^(2+)浓度显著低于无肝素的鲎试剂,表明肝素与鲎试剂中的Ca^(2+)、Mg^(2+)发生螯合作用,从而干扰鲎试剂对内毒素的检测。另外,内毒素中加入0. 500 mg/ml肝素时,其粒径从(17. 11±0. 63) nm显著增加至(61. 99±0. 58) nm;肝素滴定内毒素时,ΔH>0且ΔH <|TΔS|,表明肝素与内毒素发生疏水结合作用。结论 肝素对鲎试剂检测内毒素的干扰机制包括Ca^(2+)、Mg^(2+)螯合和内毒素结合作用。