β-谷甾醇对猪卵母细胞体外成熟和胚胎发育的影响

旨在探索一种自然植物提取的抗氧化分子——β-谷甾醇(β-sitosterol,SITO)对猪卵母细胞体外成熟效率和早期胚胎体外发育质量的影响。本研究以在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加不同浓度SITO为试验组,不添加SITO(含0.16%DMSO)的培养基为对照组,对屠宰场所得猪卵巢中收集到的卵母细胞进行体外培养,试验组浓度分别为10、20、40μmol·L~(-1),不同浓度各重复3次,每组培养卵母细胞150~200枚。培养46 h后,对卵母细胞成熟率进行统计,并收集成熟卵母细胞进行活性氧、细胞凋亡、线粒体膜电位染色以及相关基因的实时荧光定量PCR;对成熟卵母细胞进行孤雌激活,2 d后统计卵裂率,7 d后统计囊胚率,并统计囊胚细胞总数。结果发现,20μmol·L~(-1)SITO处理显著提高了猪卵母细胞的体外成熟率,且促进了孤雌激活后囊胚的形成并增加了囊胚细胞数,降低了卵母细胞中ROS含量,提高了抗氧化应激基因SOD和CAT的表达;同时,SITO降低卵母细胞的凋亡水平,增加抗凋亡基因BCL-2的表达,降低促凋亡基因Caspase 3和BAX的表达。此外,SITO可增强线粒体膜电位(ΔΨm),增加TFAM基因的表达。综上所述,本研究结果表明,在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加20μmol·L^(-1)SITO能够显著促进猪卵母细胞的体外成熟率、提高胚胎的体外发育能力和胚胎质量。

不同生理状态黄牛卵泡液中miRNAs表达差异分析

为了对比不同生理期黄牛卵泡液中miRNAs的表达差异,试验采集黄牛卵巢,根据黄牛年龄、卵巢有无黄体进行分组,分别为年轻有黄体组、年轻无黄体组、老年有黄体组以及老年无黄体组,抽取各组卵巢的卵泡液,采用实时荧光定量PCR法检测miRNAs的表达量,并对miRNAs在不同生理状态下的表达差异进行研究。结果表明:从不同卵泡液样本中提取得到的miRNAs纯度和浓度都较理想。对于年轻黄牛而言,当以年轻无黄体组作为对照时,年轻有黄体组卵泡液中bta-miR-145、bta-miR-191、bta-miR-21-3p、bta-miR-381、bta-miR-424-3p、bta-miR-449b、bta-miR-873的相对表达量极显著降低(P<0.01),而bta-miR-505的相对表达量在两组中差异不显著(P>0.05)。对于老年黄牛而言,当以老年无黄体组作为对照时,老年有黄体组卵泡液中bta-miR-145、bta-miR-191、bta-miR-21-3p、bta-miR-381、bta-miR-449b、bta-miR-505、bta-miR-873的相对表达量极显著降低(P<0.01),bta-miR-424-3p的相对表达量显著降低(P<0.05)。对于卵巢上存在黄体的黄牛而言,当以年轻有黄体组作为对照时,老年有黄体组卵泡液中bta-miR-449b的相对表达量显著降低(P<0.05),bta-miR-145、bta-miR-191、bta-miR-21-3p、bta-miR-381、bta-miR-424-3p、bta-miR-505、bta-miR-873的相对表达量极显著降低(P<0.01)。对于卵巢上无黄体的黄牛而言,当以年轻无黄体组作为对照时,老年无黄体组卵泡液中bta-miR-145、bta-miR-191、bta-miR-381、bta-miR-873的相对表达量极显著降低(P<0.01),bta-miR-505相对表达量显著降低(P<0.05),而bta-miR-21-3p的相对表达量在两组中差异不显著(P>0.05)。说明卵泡液中miRNAs的表达和卵泡的生理状态有明显的相关性。