黑曲霉ATCC1015催化16α,17α–环氧黄体酮11α–羟基化及相关P450基因诱导表达

为了定向遗传改造黑曲霉菌种,研究了黑曲霉(Aspergillus niger)ATCC1015转化甾体16α,17α–环氧黄体酮活性.转化产物经过薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)以及氢谱、碳谱分析最终确定为11α–羟基–16α,17α–环氧黄体酮.确定了黑曲霉ATCC1015 11α–羟基化活性受底物16α,17α–环氧黄体酮的诱导.鉴于真菌的甾体羟化酶属于细胞色素P450酶,从黑曲霉ATCC1015的P450(CYP)基因数据库中筛选出57个具有编码甾体羟化酶潜力的CYP基因;利用实时荧光定量PCR确定了2个受甾体底物高度诱导的候选目标甾体羟化酶基因An A100和An A154.分别构建了An A100基因和An A154基因的重组酿酒酵母菌株p YES2-An A100和p YES2-An A154,甾体转化结果显示重组酵母菌p YES2-An100能够转化16α,17α–环氧黄体酮生成11α–羟基–16α,17α–环氧黄体酮.