基于TLC和TLC-EFISI-MSn联用技术的霍山石斛专属性鉴别研究

目的:建立霍山石斛薄层色谱(TLC)定性鉴别的质量控制方法,并对霍山石斛专属性成分进行快速结构鉴定。方法:采用TLC法,以水饱和正丁醇为展开剂,低温4℃展开,以2%三氯化铝乙醇试液为显色剂,105℃加热5 min,于紫外光灯(365 nm)下观察霍山石斛的专属性斑点并进行真伪鉴别;利用原位薄层色谱-静电场诱导喷雾-质谱(TLC-EFISI-MS^(n))联用技术进一步对专属性斑点进行快速结构解析。结果:建立了霍山石斛专属性的TLC鉴别方法,发现霍山石斛有一专属性斑点,通过该斑点可实现霍山石斛与铁皮石斛、紫皮石斛等13种石斛属植物的区分,且能够将霍山石斛粉中掺混20%以上的铁皮石斛粉鉴别出来;根据化合物的相对分子量、多级质谱裂解碎片,初步鉴定该斑点为黄酮类化合物芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷-8-C-α-L-阿拉伯糖,为霍山石斛的专属性成分。结论:所建立的TLC鉴别方法简单灵敏、准确可靠、重现性好且专属性强,为提高霍山石斛的质量控制方法提供了实验依据,对于保证其质量和临床疗效具有重要意义。

一测多评法结合双波长法分析不同产地、栽培和加工铁皮石斛黄酮类成分的含量

建立HPLC一测多评法结合双波长法同时测定铁皮石斛中6种黄酮类成分的含量,比较不同产地、栽培和加工的铁皮石斛茎中黄酮类成分的含量,明确引起铁皮石斛黄酮类成分差异性的主要因素。采用资生堂Capcell PAK MGⅡC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相,以芦丁为内标物,检测波长340 nm,建立其对维采宁-2、夏佛塔苷、异夏佛塔苷和牡荆素葡萄糖苷的相对校正因子,并进行含量测定,实现一测多评,同时在290 nm波长下,建立柚皮素的含量测定方法。结果表明5种黄酮类成分的一测多评法与常规外标的含量测定结果无显著性差异,结合柚皮素的测定结果,可实现铁皮石斛中6中黄酮类成分的同时测定。对82个铁皮石斛样品进行含量测定并进行主成分分析和判别分析,结果表明仿野生铁皮石斛的黄酮类含量明显高于大棚床栽铁皮石斛,不同地区的仿野生铁皮石斛黄酮类成分以产自江西、贵州、浙江和福建的含量较高,大棚床栽铁皮石斛以产自福建、浙江的黄酮含量较高,柚皮素的含量与加工温度呈正相关,其他5个黄酮成分与加工温度呈负相关。主成分分析显示仿野生铁皮石斛和大棚床栽的铁皮石斛可大致分为两类,大棚床栽的铁皮石斛按产地被分为4类,仿野生铁皮石斛中贵州产地的样品基本聚集在一起,其他产地的没有明显规律。所建立的铁皮石斛含量方法简化了其多指标性黄酮类成分的测定方法,可为有效的控制铁皮石斛整体质量控制及其种植栽培、产地加工提供依据。