重组人胰高血糖素样肽-1类似物的分离纯化和鉴定

将合成的人胰高血糖素样肽-1[recombinant human glucagon-like peptide-1（7~37）,rhGLP-1]类似物基因插入到原核表达质粒pGEX-4T-3中,构建成rhGLP-1类似物与谷胱甘肽巯基转移酶（glutathione-S-transferases,GST）的融合表达载体pGEX-rhGLP-1类似物,转化大肠杆菌BL21（DE3）获得重组菌株。IPTG诱导表达的菌体经高压均质机破碎后,离心收集包涵体,经尿素变性、Glutathione-Sepharose 4B亲和层析、肠激酶酶切、SP-Sepharose FF层析和反相层析RP-C18脱盐后冻干,得到纯度大于96%的rhGLP-1类似物,经质谱测定,分子量与理论值一致。生物学活性分析表明,rhGLP-1类似物具有促进表达有GLP-1受体的HEK293细胞c AMP增加的活性。