小分子靶向药物临床应用药学指引

小分子靶向药物发展迅猛、品种繁多,其作用靶点、适应证、使用方法、监护要点等均有不同,这对临床合理应用以及药学服务提出了新的要求。广东省药学会药物警戒专业委员会根据最新的临床权威指南和药品说明书,参考相关的循证证据撰写了《小分子靶向药物临床应用药学指引》,以期促进小分子靶向药物临床合理应用,促进规范化的药学服务和精细化的药事管理,同时对相关药品的遴选提供一定的参考。

去甲基化酶ALKBH5高、低表达食管鳞癌细胞株的构建

目的构建高、低表达去甲基化酶ALKBH5的食管鳞癌(ESCC)细胞株。方法将生长状态良好的人源胚胎肾细胞293T于培养瓶内培养,分别记为A、B、a、b、c组,待细胞融合80%～90%后进行质粒转染,A组293T细胞转染高表达ALKBH5的质粒p LV-ALKBH5,B组293T细胞转染对照质粒p LV-con,上述2个质粒中均带有GFP蛋白和Flag标签蛋白(用于后续感染细胞的筛选); a组293T细胞转染低表达ALKBH5的质粒p LKO-shALKBH5-1,b组293T细胞转染低表达ALKBH5的质粒p LKO-shALKBH5-2,c组293T细胞转染对照质粒p LKO-shSCR,上述3个质粒中均带有嘌呤霉素抗性(用于后续感染细胞的筛选)。上述各组293T细胞质粒转染72 h后,分别收集细胞上清液,离心后分装;用A、B组细胞上清液分别感染ESCC细胞株(Eca109细胞和Kyse510细胞),采用流式细胞术筛选GFP蛋白(+)的细胞待测;用a、b、c组细胞上清液分别感染ESCC细胞株(Eca109细胞和TE-13细胞),用嘌呤霉素筛选细胞待测。采用qRT-PCR法和Western blotting法分别检测感染高、低表达ALKBH5上清液的ESCC细胞中ALKBH5 mRNA和蛋白。结果感染A组细胞上清液的Eca109细胞、Kyse510细胞中ALKBH5 mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于感染B组细胞上清液的Eca109细胞、Kyse510细胞(P均<0. 05),感染a、b组细胞上清液的Eca109细胞、TE-13细胞中ALKBH5 mRNA和蛋白的相对表达量均显著低于感染c组细胞上清液的Eca109细胞、TE-13细胞(P均<0. 05)。结论成功构建高、低表达ALKBH5的ESCC细胞株,为进一步探讨ALKBH5在ESCC发生发展中的作用提供了细胞模型。