社会化生态环境监测机构如何提升质量管理水平

在环境监测工作过程中,应全面促进质量管理工作的有效落实,各项工作应以促进质量管理水平提升为主要目的,形成严格的管理模式,保障全过程质量管理的系统性和完善性,全面优化环境监测工作成效,以促进环境监测水平的不断提升。

基于Red重组系统的阴沟肠杆菌基因重组技术

目的:开发一种基于Red重组系统的E.cloacae基因重组技术。方法:将Red重组酶基因连接于表达载体形成pSC-MSC-red,将Flp重组酶基因连接于表达载体形成pSC-MSC-flp。以budA基因(编码乙酰乳酸脱羧酶)为例,构建了不同长度同源臂的抗性盒。将这些DNA片段分别转化入携带p SC-MSC-red质粒的E.cloacae进行基因重组。结果:使用同源臂长度为39和100 bp的抗性盒不能得到重组子;同源臂长度为200 bp的抗性盒可以获得重组子E.cloacaeΔbudA-773,重组效率为6.1 CFU/μg DNA;同源臂长度为500 bp时,重组效率提高到131.5 CFU/μg DNA。将表达Flp重组酶的质粒pSC-MSC-flp转化入重组菌株中传代培养成功消除了抗性标记。对重组菌株E.cloacae ΔbudA进行发酵培养实验,菌株丧失了合成乙偶姻和2,3-丁二醇的能力,表明budA基因被成功敲除。结论:本文建立了一种适用于E.cloacae的基因重组方法。

论离心机在工业污水处理中的应用

从离心机工作原理出发,根据工业污水处理的实际情况,对污水处理中离心机的种类、筛选原则及应用等进行了分析和探讨,以期提供参考。

生态环境监测LIMS管理系统开发的思考

本文对生态环境监测LIMS管理系统应用存在的常见问题进行分析,结合其发展和所处阶段,从系统设计单元选定和系统前瞻性进行论述,为系统开发设计提供参考,以构建高效率、高水平、多维度的生态环境监测LIMS管理体系。

固定抗凝剂量加入不同量脐血后脐血质量分析评估的研究

目的:研究固定抗凝剂量加入不同量脐血后对脐血质量的影响。方法:对6060份脐血样本,按照抗凝剂/脐血体积比分为28:(10-29) ml组、28:(30-69) ml组、28:(70-109) ml组、28:(110-150) ml组和28:(>150) ml组。分析各组脐血的冻前有核细胞数、有核细胞活性、CFU-GM数量、CD34+细胞比例的变化情况,对各项指标进行统计学分析。结果:在抗凝剂量不变的情况下,冻前有核细胞数量随着脐血体积增加而上升(r=0.9937),最小脐血量组有核细胞数量达到(2.57±0.89)×108。有核细胞活性随着脐血体积增加而上升(r=0.9897),最小脐血量组冻前有核细胞活性的均值仍保持在95%以上。CFU-GM/×105集落数量随着脐血体积增加而上升(r=0.9024),最小脐血量组的CFU-GM/×105集落数量达到89个。CD34+细胞比例随着脐血体积增加而上升(r=0.9641),最小脐血量组的CD34+细胞比例为(0.30±0.19)%。结论:在抗凝剂体积不变的情况下,随着采集血量的降低,脐血冻前有核细胞数、有核细胞活性、CFU-GM集落数和CD34+细胞比例也相应降低,但最小血量组的上述指标均可满足临床需求。

采集到制备的不同时长对脐带血干细胞冻前质量的影响

目的:分析采集到制备不同的时长对脐带血干细胞的冻前相关质量指标的影响,为确定合适的采集到制备时长提供依据。方法:选取1712份脐带血样本,按照采集到制备的时长分为<12 h组、(12-24) h组、(24-36) h组和(36-48) h组,分析脐带血干细胞冻前有核细胞数量、有核细胞活性、CD34+细胞百分比及CFU-GM集落数的变化。结果:(1)冻前有核细胞数量随着时间延长而下降,但各组冻前有核细胞数量的差异无统计学意义(P>0.05);(2)各组的有核细胞活性结果比较发现,(12-24) h组和(24-36) h组的有核细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间有核细胞活性比较差异均有统计学意义(P<0.05);(3)CD34+细胞百分比随时间延长有微弱的升高趋势,但是差异无统计学意义(P>0.05);(4)各组的CFU-GM集落数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:随着脐带血采集到制备的时长增加,有核细胞活性会逐渐下降。脐带血采集后在36小时内制备是安全的,其干细胞的质量指标可稳定保持在较高水平,脐带血在36-48小时制备虽然质量有微弱下降,其干细胞的冻前质量也满足临床出库需求。

混合培养体系中间充质干细胞与造血干细胞生物学特性

为了体外同时获得符合鉴定标准的造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,HSC/HPC)和间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC),本研究采用Ficoll淋巴细胞分离液方法从脐带血中分离出脐带血单个核细胞,MACS免疫磁珠法分离出CD34^+的造血干细胞。分离出的细胞与MSC同时接种在培养瓶中,利用15%AB型脐血浆的IMDM培养基添加白细胞介素3(interleukin-3,IL-3)、IL-6、血小板生成素(thrombopoietin,TPO)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)和Flt-3配体(FMSlike tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L)因子培养体系来同时培养扩增HSC/HPC和MSC。为了评估扩增出的HSC/HPC和MSC是否符合细胞鉴定标准,本研究通过倒置显微镜观察HSC/HPC和MSC生长状态,并计数细胞。流式细胞仪检测HSC/HPC表面抗原CD34阳性百分率,检测第4代(P4)MSC表面抗原CD105、CD90、CD73、CD45、CD34和HLA-DR阳性表达率。半固体集落培养检测HSC/HPC的粒细胞-巨噬细胞集落形成能力。将共培养至P4的MSC行成骨、成软骨、成脂肪诱导鉴定。通过秋水仙素法进行MSC核型分析。结果显示,体外共培养的HSC/HPC依然有高增殖能力、集落形成能力和CD34阳性百分率。MSC具有向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞诱导分化的能力。MSC染色体核型维持稳定。以上结果提示本研究成功建立了一种合适的MSC和HSC/HPC混合培养体系,通过该体系可同时获得两种干细胞,共培养后的MSC依然有典型的MSC的生物学功能;共培养后的HSC/HPC的粒细胞-巨噬细胞集落培养、细胞数量和流式表型符合鉴定标准,HSC/HPC生物学功能没有受到影响。