分析和评价强生Vitros 5.1 FS生化仪的精密度和正确度

目的分析和评价Vitros 5.1FS生化分析仪的测量精密度和正确度。方法根据CLSI EP15-A2及其他相关文献,对强生Vitros 5.1FS生化分析仪17个常用生化指标精密度和正确度分析性能进行评价,结果与厂商声明的性能或公认的质量目标进行比较。结果精密度结果显示,Swithin(Stotal)均小于σwithin(σtotal),符合精密度性能要求。参考物质提供的定值均在测量结果的验证区间内。结论强生Vitros 5.1FS生化分析仪17个常用生化指标测量的精密度和正确度符合质量目标要求。

国际参考实验室能力验证样品的均匀性评价

目的评价国际参考实验室能力验证样品(RELA-A/B)的均匀性是否满足参考实验室比对的要求。方法参照CNASGL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》,用Roche Modular P800生化分析仪测量2014至2016年连续3年RELA-A/B的14个项目,即丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、L-γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、总胆红素(T-Bil)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、葡萄糖(Glu)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)。计算测量结果均值()、标准差(s)和变异系数(CV),用单因素方差分析和SS≤0.3σ准则分析评价其瓶间差异。结果 RELA 2014A和2014B样品AST测量结果 CV>2.0%。除RELA 2016B样品CK测量结果 CV<2.0%外,其他样品CK测量结果 CV均>2%。单因素方差分析结果显示,所有样品中CK测量结果 F均>临界值4.39,差异有统计学意义(P<0.05);2015B样品ALT和T-Bil,2014A样品Cr测量结果 F均>临界值4.39,差异有统计学意义(P<0.05);其他测量结果 F均<临界值4.39,差异无统计学意义(P>0.05)。S_S≤0.3σ准则分析结果显示,所有样品CK测量结果 S_S>0.3σ,CK测量结果存在瓶间差异;其他项目测量结果 S_S均≤0.3σ,其他项目测量结果无瓶间差异。结论国际参考实验室能力验证样品CK项目存在瓶间差异,值得注意;其他项目均匀性能满足参考实验室能力验证要求。

同位素稀释液相色谱串联质谱法测量血清未结合雌三醇的协作研究

目的用同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)候选参考方法进行实验室间血清未结合雌三醇(u E3)协作研究,通过该研究进一步确认方法的性能特征(正确度和精密度),并将该方法在国内参考实验室推广,推动u E3标准化进程。方法依据ISO/WD 15725-1和GB/T 6379标准,拟定我国血清u E3协作研究方案。协作研究分为两个阶段:初步试验和正式试验,共9家参考实验室参加。按要求收集5个浓度水平样品并进行均匀性评价,分发到9家参考实验室,要求每个样品每日重复测量5次,连续测量3 d。计算各实验室测量结果的偏移和精密度,用格拉布斯(Grubbs)检验和柯克伦(Cochran)检验识别离群值和离群实验室。根据合格实验室的结果计算靶值,并向离群实验室和偏出允许范围的实验室提供整改建议。结果样品均匀性评价:所有样品测量结果计算F值均小于F0.05(9,20)临界值,样品中u E3是均匀的。初步试验:Grubbs检验,1个实验室测量结果为离群值;Cochran检验,2个实验室检验结果为离群值。剔除离群值后计算靶值;2017E301为(22.08±0.24)nmol/L;2017E302为(33.46±1.67)nmol/L。2个实验室结果超出允许范围。正式试验:Grubbs检验,所有实验室测量结果均未检出离群值;Cochran检验,3个实验室数据出现离群值。剔除离群值后计算靶值,2017E303为(10.36±0.35)nmol/L,2017E304为(15.47±0.26)nmol/L,2017E305为(46.97±1.19)nmol/L;各实验室间测量结果不精密度分别为1.14%~2.21%、0.79%~1.93%、0.60%~2.09%,测量结果偏移分别为-6.18%~4.83%、-2.26%~2.39%、-4.19%~4.07%。结论通过组织开展协作研究,确认各参考实验室通过协作研究方案能够快速建立并运行u E3候选参考方法,除个别实验室外各实验室的检测性能满足预定要求(不精密度<3.0%,偏移<7.5%),进一步确认了该方法的性能和各实验室运行参考方法的能力。通过初步研究和正式研究对研究方案的各实验环节进行了验证和完善;推动了u E3项目参考方法在我国参考实验室的运行,为后续厂商试剂主校准品联合定值或标准物质研制搭建了平台,促进u E3项目的标准化。

血小板计数参考方法的性能评价及临床应用

目的复现血小板计数的参考方法并应用于临床。方法根据国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的流式细胞术计数血小板的参考方法,在本实验室复现该参考方法;通过2家校准实验室赋值新鲜全血,对4台不同型号血液分析仪的血小板计数结果进行正确度验证,并对结果不满意的仪器进行校准。结果血小板计数参考方法检测高、中、低值标本PLT的不精密度(CV)分别为2.2%、2.0%、8.4%,PLT在21×109/L^794×109/L范围内线性良好(r2=0.998),标本在6 h内测定结果稳定,携带污染率为0.05%,正确度偏倚小于3%。正确度验证中,Mindray BC 6800、Sysmex XE-5000i和Sysmex XT 1800i血液分析仪细胞检测结果均在可接受限内,Sysmex XS 500i血液分析仪经校准后通过验证。结论复现了ICSH推荐的血小板计数参考方法,其性能符合要求;赋值新鲜全血用于临床血液分析仪的正确度验证具有可行性,且可用于仪器的校准。

ALT和AST参考方法的建立与性能评价

目的建立测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的参考方法,并评价其主要分析性能。方法按照国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)有关ALT和AST活性测定的要求建立参考方法,并优化其实验条件;根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)系列文件(EP5-A2、EP15-A、EP6-A)对建立的参考方法的精密度、准确度、线性范围等性能进行评价。结果紫外分光光度计、分析天平、pH计、电子温度计、移液器和容量瓶均检定合格,不确定度符合方法要求。温控器显示为37.2℃时,比色杯内溶液温度最接近37℃;比色杯内溶液180 s后可达到设定温度;移液器加样模式实验显示吸一档打两档,打时靠壁为精密度最佳的加样模式。ALT和AST参考方法的批内不精密度均<1%,总不精密度均<2%,符合精密度性能要求;日本临床化学会酶参考品及国际参考实验室外部质量评价计划样本检测结果的相对偏倚均符合设定目标;ALT和AST参考方法分析测量范围上限分别为335.8、363.6 U/L,均高于IFCC文献报道。结论ALT和AST参考方法已基本建立,精密度、准确度及线性范围等性能指标均符合方法要求,可应用于临床研究。

全自动生化分析仪携带污染的发现及其解决方案

目的探讨Roche Modular-PPI全自动生化分析仪携带污染发生的状况,并寻找最佳的解决方案。方法对仪器进行维护保养、校准等基础性试验,各项指标均满足要求后,通过特殊清洗进行处理,分别观察样本针、试剂针的携带污染情况。结果仪器的校准维护中,各项指标均符合要求;样本针携带污染中,K+存在携带污染,LDH不存在样本针携带污染;试剂针携带污染中,28个项目两两配对,共13对项目组合存在携带污染,经水、碱、酸清洗后有效的消除污染。结论生化分析仪存在样本针、试剂针的携带污染,实验室可通过特殊清洗排除携带污染的影响,同时每个实验室都应主动发现并排除携带污染,保证结果的准确性。

28个临床化学指标3种不确定度评定方法的比较

目的探讨3种不确定度评定方法的优劣,为临床实验室选用不确定度的评定方法提供思路。方法用3种方法评定28个临床化学指标的不确定度,方法 1是澳大利亚临床生物化学家协会(AACB)建议方法;方法 2是诺德创新中心(Nordtest)建议方法;方法 3是根据室内质控数据计算不确定度。3种方法评定的扩展不确定度(U)分别与分析目标[生物学变异和美国临床实验室改进修正案(CLIA)允许总误差]比较。结果 28个指标,方法2除K和Na外,26个指标的U均比方法1高;除Na外,27个指标的U均比方法 3高。方法 1除Alb外,27个指标的U均比方法 3高。与生物学变异比较,28个指标用方法1、方法 2、方法 3评定U分别有54%、28%、62%达到理想值,12%、32%、8%达不到要求;与CLIA允许总误差比较,分别有58%、18%、74%达到理想值,2%、2%、2%达不到要求。结论临床实验室用方法 2评定测量不确定度,比方法 1和方法 3考虑到更多的不确定度来源,与生物学变异比较不合格率明显增加,提示实验室需对检测过程进行质量改进。

血β-羟丁酸诊断2型糖尿病酮症酸中毒阈值的建立

目的探索建立血β-羟丁酸(βOHB)诊断2型糖尿病酮症酸中毒(DKA)的阈值及βOHB水平与DKA严重程度的关系。方法对急症科收治的2型糖尿病患者的血βOHB与[HCO3-]进行相关分析,同时利用回归方程计算出[HCO3-]为18.0、15.0、10.0 mmol/L时的βOHB值,并以与[HCO3-]为18.0 mmol/L对应的βOHB值作为DKA诊断的阈值,并结合临床评估其诊断性能。结果血βOHB水平与[HCO3-]浓度具有良好的相关性,R2=0.7023,P<0.001。[HCO3-]为18.0、15.0和10.0 mmol/L时的βOHB值分别为3.0、4.70和7.5 mmol/L,并与DKA病情严重程度相符;结合血糖浓度≥13.9 mmol/L,当血βOHB≥3.0 mmol/L时,诊断DKA的灵敏度为99.0%,特异性为86.0%,总有效性为92.81%。结论血βOHB≥3.0 mmol/L可作为DKA诊断的阈值,并且βOHB可作为DKA病情严重程度的判断指标。

铜绿假单胞菌获得性金属β-内酰胺酶及其相关基因研究

目的了解该院铜绿假单胞菌(Pae)金属酶的产生及其相关基因携带情况。方法采用多种方法进行Pae金属酶初筛、确证试验,并检测4种金属酶基因。结果产金属酶菌株初筛阳性率为53.5%,用头孢他啶(CAZ)/乙二胺四乙酸(EDTA)、CAZ/2-巯基丙酸(2-MPA)、亚胺培南(IMP)/EDTA、IMP/2-MPA检测阳性率分别为13.95%、15.12%、17.44%、18.60%。PCR扩增结果仅IMP-1出现阳性,阳性率达16.28%,其余3种金属酶基因均为阴性。结论不同方法对金属酶检测结果不尽相同;携带IMP-1金属酶基因是该院Pae耐碳青霉烯类等多种药物的主要原因。

复溶过程中多种因素对干粉质控品检测结果的影响评估

目的探讨复溶过程中人员操作、温度、水质等因素对干粉质控品检测结果的影响,规范复溶过程,减小非产品因素导致的瓶间差,保证质控结果的可靠性。方法选用迈瑞正常值和病理值干粉质控品,按照人员、温度、水质等因素随机分为8组,将分好组的干粉质控品按要求复溶后,分别测定24个常规项目,计算出各组各项目测定结果的均值和标准差,比较各组与标准组之间的统计学差异以及临床差异。结果一般技术人员组多个项目测定结果与标准组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.0083);温度15和30℃复溶时,TBIL测定结果与标准组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.0167);用电导率为1.711和3.500μs/cm的纯水复溶时,Ca、Mg等项目测定结果与标准组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.0167)。部分有统计学意义的项目同时具有较显著的临床差异。结论应加强实验人员复溶操作过程的培训以减少因复溶引入的新瓶间差,复溶时的温度以室温(24±2)℃,水质选用电导率<小于μs/cm的纯水为宜。

急性冠状动脉综合征患者D-二聚体、cTnI和NT-ProBNP联合检测的意义及相关性分析

目的探讨D-二聚体、心肌肌铺上蛋白I(cTnI)和N-末端脑钠肽前体(NT-ProBNP)检测对急性冠状动脉综合征的意义及其相关性分析。方法 143例急性冠脉综合征(ACS)患者作为观察组,同期冠状动脉造影阴性患者40例作为对照组,比较两组患者D-二聚体、cTnI和NT-ProBNP水平;将观察组按照冠脉病变严重程度分为不稳定型心绞痛(UAP)组52例、ST段抬高的心肌梗死(STEMI)组24例和非ST段抬高的心肌梗死(NSTEMI)组67例,分析三组患者的D-二聚体、cTnI和NT-ProBNP水平在冠脉病变不同严重程度的相关性。结果观察组D-二聚体、cTnI和NT-ProBNP水平均显著高于对照组(P<0.05),具有统计学意义。观察组三组亚组的cTnI和NT-ProBNP水平在冠脉病变不同严重程度时呈正相关(P<0.05),具有统计学意义。结论 D-二聚体、cTnI和NT-ProBNP联合检测有助于ACS的诊断,且与其病变严重程度有一定的正相关性。

电化学发光法测定NT-proBNP的分析性能验证与评价

目的:验证与评价电化学发光法测定NT-proBNP的分析性能。方法:根据CLSI系列文件,对电化学发光免疫分析仪检测NT-proBNP的精密度、线性范围、可报告范围、干扰等性能进行验证与评价。结果:精密度符合厂家所提供的性能标准;NT-proBNP的检测呈一次线性(r=0.998,P<0.05),其线性范围为5.86～31557.5pg/mL;可报告范围为5.86～3155750pg/mL;干扰实验结果显示F-Bil0.2g/L、C-Bil0.4g/L、Hb5.0g/L、乳糜3000浊度对NT-proBNP检测不存在干扰。结论:电化学发光免疫分析仪检测NT-proBNP的主要分析性能符合临床要求,CLSI实验评价方案具有实用性和可操作性。

尿素参考方法的建立及其在正确度评价中的应用

目的:建立血清尿素参考方法,评价不同检测系统尿素测量结果的正确性。方法:根据美国CDC推荐尿素参考方法复现本实验室参考方法,与5个尿素测量常规检测系统进行方法间比对,运用改良的Blant-Altman图形法评价各常规系统与参考方法测量结果的一致性。结果 :参考方法总不精密度<1.5%,测定SRM909c相对偏倚为0.74%。所有5个常规系统测定结果与参考方法高度相关(r>0.999 8),各常规系统与参考方法测量结果的回归方程分别为:Y=1.011 4X-0.037 5,Y=0.982 9X+0.008 1,Y=0.995 9X-0.011 9,Y=0.932 2+0.071 7,Y=0.953 1X-0.043 3,其中X和Y分别代表参考方法与常规系统的测量结果。与参考方法比较,干式生化系统(系统4、5)表现出较明显的负偏倚,而其他系统与参考方法结果一致。结论:尿素参考方法在实验室已复现且性能符合要求,应重视干式生化系统尿素测定结果与参考方法间存在的差异。

不同厂家校准品校准同一检测系统检验结果的实验研究

目的 观察不同厂家的校准品能否直接校准非配套的检测系统.方法 参考美国临床实验室标准化委员会的EP9-A2文件,以罗氏检测系统为目标检测系统（系统1）,用罗氏C-fas、朗道校准品Level2和Level3分别与国内某一厂家生产的生化分析仪器、试剂和检测程序组成待评检测系统（系统2～4）,然后用上述四个检测系统分别检测40份新鲜患者血清中的总胆红素（TBil）等10个项目,每个标本测定两次,结果取均值.计算待评检测系统（Y）与目标检测系统（X）之间的相对偏倚,以美国临床医学检验部门修正法规（CLIA＇88）允许总误差的1/2为标准,判断检验结果的可比性.结果 系统2与系统1的TBil,DBil,ALP和CK具有可比性,其他项目不具有可比性.系统3与系统1的TBil和GGT具有可比性,其他项目不具可比性.系统4与系统1的Glu具有可比性,其他项目不具可比性.结论 不同厂家生产的校准品不能直接用于校准非配套检测系统,每一检测系统都必须具有自己的配套校准品.

高效液相色谱串联质谱法测定血清非结合雌三醇的前处理研究

目的优化高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定血清游离雌三醇(uE3)的前处理方法。方法以活性炭吸附血清为研究基质,通过加入已知量的雌三醇(E3)标准品及E3-2-3-4-13 C3内标,在LC-20AD XR高效液相色谱系统和API 5500串联四级杆质谱仪上对E3检测的色谱条件、质谱条件及萃取条件等进行优化。结果色谱条件:选用菲罗门Knietex色谱柱(100.0mm×2.1mm,2.6μm);有机相为甲醇,水相为0.1mmol/L氟化铵水溶液,8min梯度洗脱。质谱条件:选用电喷雾(ESI)负离子模式和多反应监测(MRM)模式分析,选择质荷比(m/z)287→m/z 145作为E3的定量离子对,m/z 287→m/z 171作为定性监测离子对;选择m/z 290→m/z 148作为内标的定量离子对,m/z 290→m/z 174作为定性监测的离子对。萃取条件:萃取剂为正己烷/乙酸乙酯(50/50,v/v),样品与萃取剂的比例为1∶2,萃取率可达85.71%。结论 E3检测的色谱条件、质谱条件、萃取条件已得到全面优化,为后续建立LC-MS/MS测定人血中uE3的参考方法打下良好基础。

赋值血清校准总胆固醇、三酰甘油前后测量结果的一致性

目的应用参考方法赋值冰冻新鲜人血清样本作为校准品,观察可否改善测量结果的准确性和一致性。方法由国内2家参考实验室按IFCC推荐的参考测量程序为冰冻新鲜混合人血清赋值,各实验室在赋值血清校准前,重复检测赋值血清、水平1样本（S1）和水平2样本（S2）各3次;再用赋值血清校准常规检测系统,校准后再重复校准前测量,记录并收集实验数据。比较校准前后,不同检测系统间总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）测定结果的变异和测量结果与参考方法测量结果间的偏移。结果 TC和TG的复现性（CV）由校准前的7.01%～3.16%下降到校准后的2.34%～1.85%;偏移则从3.08%～0.88%下降到1.07%～0.33%。校准前TC项目符合质量要求的临床实验室有7家,符合率为33.3%,校准后符合率为71.4%;校准前TG项目符合质量要求的临床实验室有11家,符合率为52.4%,校准后符合率为95.2%。结论参考方法赋值的冰冻新鲜人血清校准临床常规检测系统具有可行性,可改善和提高常规检测系统测定结果的准确性和可比性。

国产浓缩型酶法二氧化碳试剂盒的应用研究

目的探讨浓缩型酶法二氧化碳（CO2）试剂盒在RocheModular生化分析仪中的检测性能。方法根据CIS1系列文件（Et15-A2，EP6-A，EP9-A2，C28-A3）和其他相关文献的实验方案，对迈克浓缩型酶法C02的精密度、线性范围、参考区间及其与Roche配套试剂进行可比性分析，结果与厂商声明的性能或者公认的质量目标进行比较。同时比较分析迈克与罗氏试剂检测参数，高中低浓度标本结果及其检测点吸光度值变化。结果精密度性能通过验证；呈一次线性，线性范围为5．8～43．8mmol／L；与罗氏原装试剂具有较好的可比性，回归方程为Y-0．9822X＋0．0208，相关系数r=0．99】6；参考区间验证结果均在该实验室给出的参考区间内；迈克和罗氏试剂的参数设置略有不同，高中低浓度标本栓刹点吸光度值差异具有统计学意义（P〈0．05），但检测结果差异无统计学意义（P〉0．05）。结论迈克浓缩型酶法C0。试剂盒在Roche Modular检测中的主要分析性能均符合盾量目标耍求，满足临床需娶．

设定目标在临床化学室内质量控制中的应用

室内质量控制（质控）主要基于统计学的概率原理,通过用单个或组合的统计学过程控制规则和控制图表进行监控。Bio Rad公司Unity Real Time质控数据管理软件可帮助实验室从多角度对质控结果进行分析,通过设定当前技术水平（state of the art）、不精密度-生物学变异（imprecision-BV）、

血培养中菌群分布及耐药性分析

目的 了解本院近3年血培养阳性标本检出病原菌的分布和耐药情况,为临床医生正确、合理应用抗菌药物提供依据.方法 采用Vitek 2系统鉴定细菌,K-B琼脂扩散法做体外药敏试验,应用WHONET5.4进行其耐药性分析.结果 共检出病原菌609株,其中革兰阴性菌288株、革兰阳性菌261株、真菌60株,各占总数的47.29%、42.86%、9.85%.产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为50.0%和41.4%;葡萄球菌中MRSA和MRCNS的检出率分别为79.5%和54.7%.革兰阴性菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单孢菌为主,对亚胺培南、美洛培南敏感.革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌、凝同酶阴性葡萄球菌为主,对万古霉素、力奈唑胺、替考拉宁、奎奴普丁,达福普汀敏感.结论 血培养阳性标本检出病原菌种类复杂,耐药率逐年上升,临床医生应加强对疑似败血症患者血液中病原菌的检测,以合理选用抗菌药物.

冰冻人血清α-淀粉酶催化活性浓度候选二级标准物质的研制

目的研制冰冻人血清α-淀粉酶催化活性浓度候选二级标准物质,作为量值传递的标准。方法参照JJF 1343—2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》和JJF 1644—2017《临床酶学标准物质的研制》要求进行均匀性、稳定性、互换性评价;联合6家通过中国合格评定国家认可委员会(CNAS)认可的校准实验室对标准物质进行定值,评定其均匀性、稳定性和定值引入的不确定度,计算扩展不确定度。结果标准物质均匀性和稳定性均良好,互通性评价结果显示,4个常规检测系统的测量值均位于95%可信区间内。定值结果:水平1为(106.3±4.3)U/L(k=2),水平2为(268.1±7.9)U/L(k=2)。结论研制的冰冻人血清α-淀粉酶催化活性浓度候选二级标准物质标示值可靠,均匀性、稳定性较好,具有互换性。